霍亂病原菌檢測標(biāo)本的采集方法、運(yùn)輸和保存

1、： （一）標(biāo)本采集和送檢的要求（一）標(biāo)本采集和送檢的要求 標(biāo)本采集是否規(guī)范，能從很大程度上影響標(biāo)本采集是否規(guī)范，能從很大程度上影響檢驗(yàn)工作的質(zhì)量。標(biāo)本采集應(yīng)由受過專門檢驗(yàn)工作的質(zhì)量。標(biāo)本采集應(yīng)由受過專門培訓(xùn)的人員來執(zhí)行，同時(shí)注意生物安全防培訓(xùn)的人員來執(zhí)行，同時(shí)注意生物安全防護(hù)，防止樣品污染、交叉污染和自身感染。護(hù)，防止樣品污染、交叉污染和自身感染。標(biāo)本應(yīng)有唯一編號作為唯一性標(biāo)識。標(biāo)本標(biāo)本應(yīng)有唯一編號作為唯一性標(biāo)識。標(biāo)本在采集后應(yīng)立即放入冷藏箱中，注意勿使在采集后應(yīng)立即放入冷藏箱中，注意勿使標(biāo)本局部冷凍，并盡快送往實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行分標(biāo)本局部冷凍，并盡快送往實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行分離培養(yǎng)。離培養(yǎng)。 送檢標(biāo)本時(shí)應(yīng)填寫

2、送檢標(biāo)本時(shí)應(yīng)填寫“標(biāo)本送檢單標(biāo)本送檢單”（樣單見附表（樣單見附表2和和3），寫明姓名、住址、聯(lián)系方式、發(fā)病時(shí)間、），寫明姓名、住址、聯(lián)系方式、發(fā)病時(shí)間、采集時(shí)間、臨床診斷等，為環(huán)境和食品標(biāo)本等時(shí)，采集時(shí)間、臨床診斷等，為環(huán)境和食品標(biāo)本等時(shí)，也需要記錄采集時(shí)間、地點(diǎn)、種類等相關(guān)信息。也需要記錄采集時(shí)間、地點(diǎn)、種類等相關(guān)信息。標(biāo)本管標(biāo)本管/袋或瓶上標(biāo)記樣品編號。因病人標(biāo)本含有袋或瓶上標(biāo)記樣品編號。因病人標(biāo)本含有病原體，標(biāo)本裝入試管或小瓶時(shí)，注意勿污染容病原體，標(biāo)本裝入試管或小瓶時(shí)，注意勿污染容器口外壁，必須妥善包裝以防破碎、滲漏等，放器口外壁，必須妥善包裝以防破碎、滲漏等，放在堅(jiān)固的送檢箱內(nèi)由專人

3、送往檢驗(yàn)室，運(yùn)送過程在堅(jiān)固的送檢箱內(nèi)由專人送往檢驗(yàn)室，運(yùn)送過程中注意安全。送檢箱每次用后須經(jīng)消毒處理。中注意安全。送檢箱每次用后須經(jīng)消毒處理。 病人標(biāo)本應(yīng)盡可能采集糞便。根據(jù)調(diào)查需病人標(biāo)本應(yīng)盡可能采集糞便。根據(jù)調(diào)查需要以及標(biāo)本的可及性，如下標(biāo)本也作為檢要以及標(biāo)本的可及性，如下標(biāo)本也作為檢材：病人嘔吐物、尸體腸內(nèi)容物、糞便污材：病人嘔吐物、尸體腸內(nèi)容物、糞便污染衣物及相關(guān)物體表面如地面、水體、食染衣物及相關(guān)物體表面如地面、水體、食品、水生動物、蒼蠅等，但根據(jù)實(shí)際情況，品、水生動物、蒼蠅等，但根據(jù)實(shí)際情況，也不限于這些標(biāo)本。標(biāo)本轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基配方也不限于這些標(biāo)本。標(biāo)本轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基配方見附件見附件3“常用

4、的標(biāo)本保存液和細(xì)菌培養(yǎng)常用的標(biāo)本保存液和細(xì)菌培養(yǎng)基基”。4 1. 病人糞便 糞便標(biāo)本的采集應(yīng)盡可能在發(fā)病早期（能采集到的最早期）。即便病人已使用抗生素，為盡可能獲得霍亂病原學(xué)診斷，也需在能采集的最早期采集標(biāo)本。用采集糞便標(biāo)本（包括水樣便）的器材采取新鮮糞便，避免采便量過少，一般要求水樣便采取1mL3mL，放入無菌帶螺旋蓋的試管中，擰緊管蓋；成形便采取指甲大小的糞量，裝入滅菌小瓶中，蓋好瓶蓋。 如病人不能自然排出大便、可使用肛拭或肛門采便管采集。用棉拭子（用于PCR檢測的標(biāo)本，不要使用棉拭子而應(yīng)使用滅菌人造纖維拭子或塑料棒采集）或肛門采便管先在滅菌生理鹽水中蘸濕后（棉拭子貼管壁擠出多余的液體），

5、由肛門插入直腸內(nèi)3cm5cm（幼兒約2cm3cm）處，旋轉(zhuǎn)360，自肛管內(nèi)壁表面拭取采集。應(yīng)注意棉拭子大小是否適宜、光滑、結(jié)實(shí)且不易脫落。然后立即置于冷藏箱內(nèi)，送往實(shí)驗(yàn)室。肛拭子標(biāo)本如不能在2h內(nèi)送達(dá)實(shí)驗(yàn)室，應(yīng)插入Cary-Blair運(yùn)送培養(yǎng)基運(yùn)送，注意培養(yǎng)基應(yīng)埋住糞便拭子，手接觸的部分在管口折斷棄去。 糞便標(biāo)本如果運(yùn)送時(shí)間不超過24h，還可將其放在堿性蛋白胨水中室溫運(yùn)送。標(biāo)本與堿性蛋白胨水的比例為8mL10mL堿性蛋白胨水可加入1mL3mL液體便或指甲大小的成形便。過多的糞便量會降低保存液的pH值。如果沒有合適采便器材以及沒有運(yùn)送培養(yǎng)基時(shí)，可用無菌吸水紙條浸于液體糞便中，然后將吸水紙條密封于

6、塑料袋中，放入冷藏箱中運(yùn)往實(shí)驗(yàn)室。 2. 病人嘔吐物 用無菌壓舌板或棉拭子挑取少量嘔吐物作為檢材，放入滅菌塑料管、自封塑料袋或滅菌帶蓋瓶中，密封。立即置于冷藏箱內(nèi)，送往實(shí)驗(yàn)室 . 3. 水體 包括河口水、江河水、溝渠水、池塘水、湖水、井水、港灣海水、鄉(xiāng)鎮(zhèn)自來水廠源水、醫(yī)院污水排放口、下水道排放口、海水產(chǎn)品養(yǎng)殖水、海水產(chǎn)品交易市場的出水口等。需要時(shí)也可采集水體的底泥作為檢材。 水樣標(biāo)本的采集方法有多種，各實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)現(xiàn)場流行病學(xué)調(diào)查需要及實(shí)驗(yàn)室自身檢測條件，如有無過濾器等，作相應(yīng)的選擇。 (1) 鹽水瓶法 (2) Moore紗布集菌法 (3) Spira 紗布集菌法 4. 食品 針對不同的可疑食

7、品，采集整體或部分標(biāo)本，帶至實(shí)驗(yàn)室。注意采集過程中不同食品及不同部位不能交叉污染。 5. 海水產(chǎn)品 選取活海水產(chǎn)品或涂抹拭子，置于塑料袋內(nèi)（拭子標(biāo)本可按糞便拭子保存運(yùn)輸方法處置），盡快送往實(shí)驗(yàn)室。如在一箱甲魚中可采取數(shù)只甲魚的體表作為一個(gè)標(biāo)本送檢，這比只做一只甲魚體內(nèi)檢查其陽性檢出機(jī)會可能更多?；魜y監(jiān)測時(shí)，海水產(chǎn)品常作為重點(diǎn)采集監(jiān)測的對象。注意采集過程中不同食品及不同部位不能交叉污染。 6. 物體表面標(biāo)本 用滅菌棉拭蘸以堿性蛋白胨水涂擦沾染糞便的衣物表面、食物操作臺、砧板等等相關(guān)物體或懷疑污染物體表面，放入到堿性蛋白胨水中，密封，常溫下運(yùn)往實(shí)驗(yàn)室。 7. 蒼蠅標(biāo)本 在每個(gè)采樣點(diǎn)以1015只蒼蠅作為一份標(biāo)本放入自封袋或試管中，密封，置于冷藏箱中送實(shí)驗(yàn)室。 霍亂屬于腸道傳染病，對實(shí)驗(yàn)室操作以及樣品采集等方面的生物安全應(yīng)按照腸道感染細(xì)菌性疾病的通用生物安全要求。另外，霍亂在我國屬于傳染病法規(guī)定的甲類報(bào)告管理傳染病，在衛(wèi)生部人間傳染的病原微生物名錄（2006年）中，霍亂弧菌流行株危害程度為第二類，屬于高致病性微生物級別（非流行株危害程度為第三類），要求在生物安全I(xiàn)I級實(shí)驗(yàn)室（BSL-2）操作病原體。 對于霍亂疫情或疑似霍亂疫情的現(xiàn)場調(diào)查和樣本采集過程中，必須注意生物安全防護(hù)，調(diào)查采樣人員應(yīng)咨