白細胞計數,血小板計數

1、白細胞計數白細胞計數 白細胞計數白細胞計數陳新科陳新科濟寧醫(yī)學院附屬醫(yī)院檢驗科濟寧醫(yī)學院附屬醫(yī)院檢驗科【目的】【目的】 掌握顯微鏡法白細胞計數的方法?！驹怼俊驹怼?采用白細胞稀釋液將血液稀釋一定的倍數，同時破壞溶解紅細胞。將稀釋的血液注入血細胞計數板，在顯微鏡下計數一定體積內的白細胞數，經換算即可求出每升血液中的白細胞數量。 目的和原理目的和原理 實驗操作步驟實驗操作步驟1.1.加白細胞稀釋液加白細胞稀釋液: : 用吸管吸取白細胞稀釋液用吸管吸取白細胞稀釋液0.38ml0.38ml于小試管中。于小試管中。2.2.加血加血: : 用清潔干燥微量吸管吸取抗凝血用清潔干燥微量吸管吸取抗凝血20l

2、20l，擦去管外余血，輕輕加至白細胞，擦去管外余血，輕輕加至白細胞 稀釋液底部，再輕吸上清液清洗吸管稀釋液底部，再輕吸上清液清洗吸管2 23 3次，混勻。次，混勻。3.3.充池充池: : 混勻后用微量吸管將完全變?yōu)樽睾稚募毎麘乙簺_入計數池，室溫下平混勻后用微量吸管將完全變?yōu)樽睾稚募毎麘乙簺_入計數池，室溫下平放放3 35 5分鐘，待細胞下沉后于顯微鏡下計數。分鐘，待細胞下沉后于顯微鏡下計數。4.4.計數計數: : 用低倍鏡依次計數用低倍鏡依次計數4 4個大方格內的白細胞數。個大方格內的白細胞數。 改良牛鮑計數板改良牛鮑計數板1855年發(fā)明計數紅細胞的計數板 血細胞計數板法是最可靠和最經典計數

3、技術改良Neubauer計數板1855年發(fā)明計數紅細胞的計數板 血細胞計數板法是最可靠和最經典計數技術改良Neubauer計數板 改良牛鮑計數板改良牛鮑計數板1mm 計算：計算：WBC/L=N/4WBC/L=N/4101010106 620201mm 改良牛鮑計數板改良牛鮑計數板數上不數下數上不數下數左不數右數左不數右 計算方法計算方法白細胞/L=N/41010620=N/20109/L N：表示4個大方格內數得的白細胞總數。 10：將1個大方格白細胞數換算成1l血液內白細胞數 106： 1L=106l 20：為血液的稀釋倍數。 注意事項注意事項 1 1稀釋用吸管、微量吸管、改良稀釋用吸管、微

4、量吸管、改良NeubauerNeubauer計數板使用前需經過嚴格的計數板使用前需經過嚴格的 校正。校正。 2 2充池時要一次完成，如充液不足、液體外溢、斷續(xù)充液、在計數板充池時要一次完成，如充液不足、液體外溢、斷續(xù)充液、在計數板 中產生氣泡、充液后移動蓋玻片等，均會使細胞分布不均勻，造成中產生氣泡、充液后移動蓋玻片等，均會使細胞分布不均勻，造成 計數結果不準確。計數結果不準確。 3 3計數池內細胞分布應均勻，一般情況下各大方格間的細胞數相差不計數池內細胞分布應均勻，一般情況下各大方格間的細胞數相差不 超過超過10%10%。若相差太大，應重新充池。若相差太大，應重新充池。 4 4計數大小方格內

5、的壓線細胞時，遵循數上不數下、數左不數右的原計數大小方格內的壓線細胞時，遵循數上不數下、數左不數右的原 則。則。 5 5白細胞數量過多時，可采用加大稀釋倍數的方法。白細胞數量過少白細胞數量過多時，可采用加大稀釋倍數的方法。白細胞數量過少 時，可采用擴大計數域或減少稀釋倍數的方法。時，可采用擴大計數域或減少稀釋倍數的方法。 6 6白細胞稀釋液不能破壞有核紅細胞，它可使白細胞計數結果偏高，白細胞稀釋液不能破壞有核紅細胞，它可使白細胞計數結果偏高， 此時應計算白細胞校正值。此時應計算白細胞校正值。白細胞分類計數白細胞分類計數白細胞分類計數白細胞分類計數目的和原理目的和原理 【目的】 掌握顯微鏡外周血

6、白細胞分類計數的方法及各種白細胞的正常形態(tài)。 【原理】 將血液制成細胞分布均勻的血涂片，用瑞氏染液染色，根據各類細胞的形態(tài)特點和顏色差異將白細胞區(qū)別并進行計數。通常分類100個白細胞，計算得出各種白細胞所占的百分率。血涂片制作血涂片制作載玻片載玻片推片推片血液血液將推片勻速向前，勿停頓。涂片的厚將推片勻速向前，勿停頓。涂片的厚薄取決于速度和角度：快、大薄取決于速度和角度：快、大( (厚厚) )。慢、?。ū。┞?、?。ū。┮粡垵M意的血涂片應厚薄均勻一張滿意的血涂片應厚薄均勻 頭頭 體體 尾鮮明尾鮮明涂片干燥后用鉛筆在血涂片的頭涂片干燥后用鉛筆在血涂片的頭部寫上姓名和編號部寫上姓名和編號B 123血

7、涂片染色血涂片染色勿沖洗再加瑞氏染色勿沖洗再加瑞氏染色液液5-85-8滴后將滴后將液和液和液充分混允靜置液充分混允靜置1010分鐘分鐘直接流水沖洗直接流水沖洗3-53-5分鐘分鐘（切勿先倒掉染液）（切勿先倒掉染液）涂片經水洗干燥后用油鏡涂片經水洗干燥后用油鏡分類計數分類計數100100個白細胞個白細胞B123B123涂片干燥后加瑞氏染色涂片干燥后加瑞氏染色液液5-85-8滴滴覆蓋整個血膜覆蓋整個血膜1 1分鐘分鐘血涂片的觀察血涂片的觀察B123B123外周血中白細胞形態(tài)外周血中白細胞形態(tài)白細胞白細胞中性粒細胞中性粒細胞嗜酸性粒細胞嗜酸性粒細胞嗜堿性粒細胞嗜堿性粒細胞淋巴細胞淋巴細胞單核細胞單核

8、細胞外周血中白細胞形態(tài)外周血中白細胞形態(tài)中性粒細胞桿狀核中性粒細胞分葉核外周血中白細胞形態(tài)外周血中白細胞形態(tài)嗜酸性粒細胞嗜堿性粒細胞外周血中白細胞形態(tài)外周血中白細胞形態(tài)淋巴細胞單核細胞嗜酸性粒細胞計數嗜酸性粒細胞計數嗜酸性粒細胞計數嗜酸性粒細胞計數目的和原理目的和原理 【目的】 掌握嗜酸性粒細胞直接計數的方法。 【原理】 用嗜酸性粒細胞稀釋液，將血液稀釋一定倍數，使大部分的紅細胞和其他白細胞破壞，并使嗜酸性粒細胞著色。將稀釋的細胞懸液滴入血細胞計數板，計數一定體積內的嗜酸性粒細胞數，經過換算得出每升血液中的嗜酸性粒細胞數。 器材與試劑器材與試劑【器材】 同白細胞計數【試劑】嗜酸性粒細胞稀釋液為

9、低滲溶液，可使紅、白細胞溶解破裂，而嗜酸性細胞對低滲抵抗大，故能保存。1、伊紅丙酮稀釋液：20g/L伊紅：使嗜酸性顆粒著色丙酮：保護嗜酸性粒細胞蒸餾水 本試劑新鮮效果好，最好一周配一次。2、溴甲酚紫稀釋液：（低滲溶液） 溴甲酚紫：指示劑，著藍色 蒸餾水 實驗操作步驟實驗操作步驟1.1.加加嗜酸性粒嗜酸性粒細胞稀釋液細胞稀釋液: : 用吸管吸取用吸管吸取嗜酸性粒嗜酸性粒細胞稀釋液細胞稀釋液0.38ml0.38ml于小試管中。于小試管中。2.2.加血加血: : 用清潔干燥微量吸管吸取抗凝血用清潔干燥微量吸管吸取抗凝血20l20l，擦去管外余血，輕輕加至稀釋液，擦去管外余血，輕輕加至稀釋液底部，再輕

10、吸上清液清洗吸管底部，再輕吸上清液清洗吸管2 23 3次，混勻。次，混勻。3.3.充池充池: : 混勻后用微量吸管將完全變?yōu)樽睾稚募毎麘乙簺_入計數池，室溫下平混勻后用微量吸管將完全變?yōu)樽睾稚募毎麘乙簺_入計數池，室溫下平放放3 35 5分鐘，待細胞下沉后于顯微鏡下計數。分鐘，待細胞下沉后于顯微鏡下計數。4.4.計數計數: : 用低倍鏡依次計數兩邊計數池四角和中央五個大方格（共計十個大方格）用低倍鏡依次計數兩邊計數池四角和中央五個大方格（共計十個大方格）的嗜酸性粒細胞數。的嗜酸性粒細胞數。5 5. .計算計算: : 細胞細胞/L=N/10/L=N/101010202010106 6=0.02N

11、=0.02N10109 9/L/L注意事項注意事項1凡造成白細胞計數誤差的因素，嗜酸性粒細胞計數時均 應注意。2計數應在60min內完成，因時間太長，嗜酸性粒細胞會被 逐漸溶解，造成結果偏低。3血液加入稀釋液后應立即混勻，否則易致血液凝固和細 胞聚集。因嗜酸性粒細胞易于破碎，振蕩不宜太猛烈。 若使用含甘油的稀釋液，因甘油造成液體黏稠度增加， 可增加振蕩次數、延長振蕩混勻時間。4嗜酸性粒細胞計數最好固定時間，以排除日間生理變化 的影響。5注意與殘留的中性粒細胞相區(qū)別，以免造成結果偏高。6如果嗜酸性粒細胞被破壞，可適當增加試劑中乙醇、丙 酮等保護劑的用量；如果中性粒細胞破壞不全，則可適 當減少其用

12、量。血小板計數血小板計數血小板計數血小板計數目的和原理目的和原理 【目的】 掌握血小板的顯微鏡目視計數方法。 【原理】 血液經稀釋液按一定比例稀釋和破壞紅 細胞后，滴入血細胞計數板內，在顯微鏡下計數 一定范圍內的血小板數量，經過換算求出每升血 液中血小板的數量。 實驗操作步驟實驗操作步驟1.1.加加血小板血小板稀釋液稀釋液: : 用吸管吸取用吸管吸取血小板血小板稀釋液稀釋液0.38ml0.38ml于小試管中。于小試管中。2.2.加血加血: : 用清潔干燥微量吸管吸取抗凝血用清潔干燥微量吸管吸取抗凝血20l20l，擦去管外余血，輕輕加至稀釋液，擦去管外余血，輕輕加至稀釋液底部，再輕吸上清液清洗吸

13、管底部，再輕吸上清液清洗吸管2 23 3次，混勻。次，混勻。3.3.充池充池: : 混勻后用微量吸管將完全變?yōu)樽睾稚募毎麘乙簺_入計數池，室溫下平混勻后用微量吸管將完全變?yōu)樽睾稚募毎麘乙簺_入計數池，室溫下平放放10101 15 5分鐘，待細胞下沉后于顯微鏡下計數。分鐘，待細胞下沉后于顯微鏡下計數。4.4.計數計數: : 用高倍鏡依次計數中央大方格內用高倍鏡依次計數中央大方格內4 4角和正中角和正中5 5個中方格內的血小板數。個中方格內的血小板數。5 5. .計算計算: : 血小板血小板/L=N/L=N5 5101010106 620=N20=N10109 9/L/L注意事項注意事項 1要定期

14、檢查稀釋液的質量，檢測前應先作稀釋液空白計數，計數值 為零時方可充液計數。草酸銨稀釋液要清潔，無細菌、塵埃等污染。 存放時間較長后應過濾后再使用。 2毛細血管采血時，針刺應達3mm深，使血液流暢。拭去第1滴血后立 即采血，以防血小板聚集和破壞。如果同時做白細胞和血小板計數 時，應先采血做血小板計數。 3血液加入血小板稀釋液內要充分混勻，必須輕輕搖動標本2min或200 次以上，但不可過度振蕩，以免導致血小板破壞、聚集或有氣泡， 引起計數誤差。 4血小板懸液充入計數池內需要靜置1015min，使血小板完全下沉 后再計數。但應注意保持濕度，避免水分蒸發(fā)而影響計數結果。血 小板如成簇分布，應重新采血復查。溶血欠佳時，應更換稀釋液或 用200倍稀釋法計數整個中間大方格內的全部血小板數，最后計算出 每升血液中的血小板數量。 注意事項注意事項5計數時光線不可太強，注意