注射液有關物質(zhì)及含量測定方法學驗證方案

1、注射用XX有關物質(zhì)及含量測定方法學驗證方案樣品：自制XX供試品：批號：市售品：進口XX批號：國產(chǎn)XX批號：對照品：XX對照品：自制，批號：xxxxxx,XX含量：51.27%水分：1.34%A對照品：來源：批號：B對照品：來源：批號：C對照品：來源：批號：1、方法驗證注射用XX是以XX為原料通過復溶并重新凍干獲得，制品期間未加入任何輔料，同時注射用XX有關物質(zhì)及含量測定方法與原料測定方法完全一致，因此注射用XX有關物質(zhì)及含量測定方法學驗證可與XX原料方法學一致，此次方法學驗證使用的樣品用原料（批號：xxxxxx）代替。2、檢測方法含量測定照高效液相色譜法（中國藥典2015年版四部通則0512）

2、測定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以水相-甲醇-乙睛（800:160:16）為流動相；柱溫：30C；檢測波長為260nm。取對照品溶液作為系統(tǒng)適用性試驗溶液，量取20M注入液相色譜儀，各雜質(zhì)峰之間及主成分峰與相鄰雜質(zhì)峰之間的分離度應符合規(guī)定，理論板數(shù)按XX峰計算應不低于3000。測定法取本品適量，精密稱定，加水溶解制成每1ml中約含XX0.2mg的溶液，作為供試品溶液。精密量取供試品溶液20小注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取XX對照品適量，同法測定。按外標法以峰面積計算，按無水物計算，含XX陽離子應為50.0%54.0%。有關物質(zhì)照高效液相色譜法（中國藥典2015年

3、版四部通則0512）測定。取本品，精密稱定，加水溶解并稀釋制成每1ml中約含XX0.5mg的溶液，作為供試品溶液；另分別取A、B、XX、C對照品適量，精密稱定，加水溶解并定量制成每1ml中約含A2.5gB2.5g、XX5.0聞、C5.0g的混合溶液，作為對照品溶液。取對照品溶液20口，注入液相色譜儀，出峰順序依次為A、B、XX、C,調(diào)節(jié)檢測靈敏度，使主成分色譜峰的峰高約為滿量程的10%30%;再精密量取對照品溶液和供試品溶液各20出分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的6倍。供試品溶液色譜圖中如顯雜質(zhì)峰，按外標法以峰面積計算，A峰面積不得大于對照品溶液中A的主峰面積（0.5%）,B

4、峰面積不得大于對照品溶液中B的主峰面積（0.5%）,C峰面積不得大于對照品溶液中C的峰面積（1.0%）,其它單個雜質(zhì)峰面積不得大于對照品溶液中XX主峰面積的0.1倍（0.1%）,其它雜質(zhì)峰面積的和不得大于對照品溶液中XX主峰面積的0.5倍（0.5%）。3、方法學驗證項目采用自制品（批號：xxxxxx）按照確定的檢測方法進行詳細的方法學驗證。項目驗證要求專屬性（1）空白溶劑水應不十擾測定；供試品溶液色諳圖中主成分峰與對照品溶液色諳圖中主成分峰保留時間應一致；系統(tǒng)適用性溶液中各成分峰保留時間與其單獨進樣的保留時間基本一致，各已知雜質(zhì)峰之間、主成分峰與相鄰雜質(zhì)峰之間分離度均應大于2.0,主成分峰理論

5、板數(shù)應3000專屬性（2）供試品破壞試驗（包括酸破壞試驗，堿破壞試驗，氧化破壞試驗，高溫破壞試驗，光照破壞試驗）中主成分峰與相鄰雜質(zhì)峰應能完全分離，主成分峰純度因子應大于980，物料基本守恒，破壞前后峰面積和基本一致。系統(tǒng)適用性（1）有美物質(zhì)方法學配制6份相同濃度的雜質(zhì)對照品混合溶液（系統(tǒng)適用性試驗溶液）進行分析，各雜質(zhì)峰峰面積的RSD應W2.0%保留時間的RSD應W1.0%主峰拖尾因子應不大于2.0,理論板數(shù)應3000各已知雜質(zhì)峰與相鄰峰分離度應2.0系統(tǒng)適用性（2）含量測定方法學配制6份相同濃度的0.2mg/ml對照品溶液進行分析，主峰峰面積的RSD應2.0%主峰保留時間的RSD應w1.0

6、%主峰拖尾因子應&2.0主峰的理論板數(shù)應3000線性與范圍（1）有美物質(zhì)方法學A在定量限-200%限度（定量限-5.0gg/m®濃度范圍內(nèi)配制6份濃度不同的各組分對照品溶液，分別測定主峰面積，以濃度（C）為橫坐標，以相應的峰面積（A）為縱坐標，進行線性回歸分析。B在定量限-200%限度（定量限-5科g/ml的濃度范圍內(nèi)配制6份濃度不同的各組分對照品溶液，分別測定主峰面積，以濃度C）為橫坐標，以相應的峰面積（A）為縱坐標，進行線性回歸分析。XX在定量限-200%限度（定量限-10科g/m的濃度范圍內(nèi)配制6份濃度不同的各組分對照品溶液，分別測定主峰面積，以濃度C）為橫坐標，以相應

7、的峰面積（A）為縱坐標，進行線性回歸分析。C在定量限-200%限度（定量限-10gg/m的濃度范圍內(nèi)配制6份濃度不同的各組分對照品溶液，分別測定主峰面積，以濃度（C）為橫坐標，以相應的峰面積（A）為縱坐標，進行線性回歸分析。可接受標準：回歸方程的相關系數(shù)（R2）應0.990丫軸截距應在100%響應值白225%以內(nèi)，響應因子的RSD應W10%線性與范圍（2）含量測定方法學在50%-300%（0.1mg/ml-0.6mg/ml）的濃度范圍內(nèi)配制5份濃度不同的對照品溶液，分別測定主峰面積，以濃度（C）為橫坐標，以相應的峰面積（A）為縱坐標，進行線性回歸分析?；貧w方程的相關系數(shù)（R2）應0.993Y軸

8、截距應在100%響應值的2%以內(nèi)，響應因子的RSD應W2.0%檢測限LOD主峰與噪音峰信號比3時的各已知雜質(zhì)和主成分對照品溶液濃度（量）。定量限LOQ主峰與噪音峰信號比10時的各已知雜質(zhì)和主成分對照品溶液濃度（量）；配制6份各已知雜質(zhì)和主成分定量限濃度溶液，所測6份溶液各已知雜質(zhì)和主成分主峰保留時間的RSD應詞,所測6份各已知雜質(zhì)和主成分溶液主峰面積的RSD應磴。精密度（1）有美物質(zhì)方法學包括重復性和中間精密度。重復性：配制6份同一濃度（相當于100%濃度水平）的供試品溶液，由1人在盡可能相同的條件下進行雜質(zhì)含量測定，所得6份雜質(zhì)含量數(shù)據(jù)的RSD應02%中間精密度：配制6份相同濃度供試品溶液，

9、由另一分析人員用另一臺儀器十/、同日期進行雜質(zhì)含量測定，所得12份雜質(zhì)含量數(shù)據(jù)的RSD應w2%精密度（2）含量測定方法學包括重復性和中間精密度。重復性：配制6份相同濃度的供13t品溶液，由1人在盡可能相同的條件下進行含量測定，所得6份含量數(shù)據(jù)的RSD應w1%中間精密度：配制6份相同濃度供試品溶液，由另1人用另一臺儀器進行含量測定，所得12份含量數(shù)據(jù)的RSD應W1%準確度（1）有美物質(zhì)方法學分別配制含已知雜質(zhì)濃度為各自限度濃度50%、100%、150%的供試品溶液各3份，分別測定已知雜質(zhì)含量，將實測值與理論值比較，計算回收率，各濃度下的平均回收率均應在92%-105%,9個回收率數(shù)據(jù)的RSD應W

10、10%準確度（2）含量測定方法學分別配制含XX濃度為80%、100%、120%的供試品溶液各3份，分別測定含量，將實測值與理論值比較，計算回收率，各濃”的平均回收率均應在98%-101%,9個回收率數(shù)據(jù)的RSD應W2.0%耐用性（1）（濃0.5mg/ml）有美物質(zhì)方法學溶液穩(wěn)定性：供試品溶液分別在室溫和冰箱冷藏室（4C）中放置12h,分別在0、4、8、12h測定雜質(zhì)含量，各已知雜質(zhì)含量的絕對值在10.1%以內(nèi)，并不得出現(xiàn)新的大于報告限度的雜質(zhì)視為溶液穩(wěn)定，否則為不穩(wěn)定。流速耐用性：供試品溶液在0.8ml/min、1.0ml/min、1.2ml/min條件下測定雜質(zhì)含量，各已知雜質(zhì)峰的拖尾因子不

11、大于2.0,各已知雜質(zhì)和相鄰峰應達到基線分離，各雜質(zhì)含量數(shù)據(jù)的RSD應不大于2.0%,雜質(zhì)含量與1.0ml/min測定數(shù)值相比變化值在M.1%以內(nèi)，視為耐用性好，否則為不好。柱溫耐用性：供試品溶液在25C、30C、35c條件下測定雜質(zhì)含量，各已知雜質(zhì)峰的拖尾因子不大于2.0,各已知雜質(zhì)和相鄰峰應達到基線分離，雜質(zhì)含量數(shù)據(jù)的RSD應不大于2.0%,雜質(zhì)含量與30c測定數(shù)值相比變化值在3.1%以內(nèi)，視為耐用性好，否則為不好。流動相pH值耐用性：供試品溶液在pH值為3.3、3.5、3.7條件下測定雜質(zhì)含量，各已知雜質(zhì)峰的拖尾因子不大于2.0,各已知雜質(zhì)和相鄰峰應達到基線分離，雜質(zhì)含量數(shù)據(jù)的RSD應不

12、大于2.0%,雜質(zhì)含量與pH3.5測定數(shù)值相比變化值在10.1%以內(nèi)，視為耐用性好，否則為不好。流動相比例耐用性：供試品溶液在流動相（水相：甲醇：乙睛）比例分別為750:200:20;800:160:16;850:120:12條件下測定雜質(zhì)含量，各已知雜質(zhì)峰的拖尾因子不大于2.0,各已知雜質(zhì)和相鄰峰應達到基線分離，雜質(zhì)含量數(shù)據(jù)的相對標準偏差應不大于20%,雜質(zhì)含量與800:160:16測定數(shù)值相比變化值在10.1%以內(nèi)視為耐用性好，否則為不好。耐用性（2）（濃度0.2mg/ml）含量測定方法學溶液穩(wěn)定性：供試品溶液分別在室溫和冰箱冷藏室（4C）中放置12h,分別在0、4、8、12h測定含量，與

13、0時比較，各放置時間含量變化的絕對值不大于2.0%,視為溶液穩(wěn)定，否則為不穩(wěn)定。流速耐用性：供試品溶液在0.8ml/min、1.0ml/min、1.2ml/min條件下測定含量，主峰的拖尾因子應不大于2.0,主峰與相鄰雜質(zhì)峰應達到基線分離，含量數(shù)據(jù)的相對標準偏差應不大于2.0%視為耐用性好，否則為不好。柱溫耐用性：供試品溶液在25C、30C、35c條件下測定，主峰的拖尾因子應不大于2.0,主峰與相鄰雜質(zhì)峰應達到基線分離，含量數(shù)據(jù)的相對標準偏差應不大于2.0%視為耐用性好，否則為不好。流動相pH值耐用性：供試品溶液在pH值為3.3、3.5、3.7條件下測定，主峰的拖尾因子應不大于2.0,主峰與相

14、鄰雜質(zhì)峰應達到基線分離，含量數(shù)據(jù)的相對標準偏差應不大于2.0%視為耐用性好，否則為不好。流動相比例耐用性：供試品溶液在流動相（水相：甲醇：乙睛）比例分別為750:200:20;800:160:16;850:120:12條件下測定，主峰的拖尾因子應不大于2.0,主峰與相鄰雜質(zhì)峰應達到基線分離，含量數(shù)據(jù)的相對標準偏差應不大于2.0%視為耐用性好，否則為不好。4.1溶液配制A對照品儲備液：精密稱取A對照品適量，加水稀釋制成約0.1mg/ml的對照品儲備液B對照品儲備液：精密稱取B對照品適量，加水稀釋制成0.1mg/ml的對照品儲備液。有關物質(zhì)檢查XX對照品儲備液：精密稱取XX對照品適量，加水稀釋制成

15、約0.5mg/ml的對照品儲備液。C對照品儲備液：精密稱取C對照品適量，力口水稀釋制成約0.2mg/ml的對照品儲備液。A雜質(zhì)定位溶液：精密量取A對照品儲備液適量，加水稀釋制成約2.5科g/m對照品溶液。B雜質(zhì)定位溶液：精密量取B對照品儲備液適量，加水稀釋制成約2.5g/ml溶液。5.0g/mlj溶液XX定位溶液：精密量取XX對照品儲備液適量，加水稀釋制成約C雜質(zhì)定位溶液：精密量取C對照品儲備液適量，加水稀釋制成約5.0g/m溶液B對照品儲備液、XX對照品雜質(zhì)對照品溶液（系統(tǒng)適用性溶液）：精密量取A對照品儲備液、儲備?C對照品儲備液適量，加水稀釋制成含A約2.5科g/m,lB約2.5科g/m,

16、lXX約5.0科g/mlC約5.0科g/m的混合溶液，同時作為系統(tǒng)適用性溶液。含量測定對照品儲備液：精密量取XX對照品（批號xxxxxx）適量，加水溶解并稀釋制成約含XX1.0mg/ml的溶液。供試品儲備液：精密稱取XX（批號xxxxxx、市售樣品1批號xxxxxx、市售樣品2批號xxxxxx）樣品適量，加水溶解稀釋制成約含XX5.0mg/ml的溶液。供試品溶液（1）:精密稱取各來源XX樣品適量，加水溶解稀釋制成約含XX0.5mg/ml的溶液作為供試品溶液（有關物質(zhì)檢測）。供試品溶液（2）：精密稱取各來源XX樣品適量，加水溶解稀釋制成約含XX0.2mg/ml的溶液作為供試品溶液（含量測定）。對

17、照品溶液：精密量取XX對照品（批號xxxxxx）適量，加水溶解并稀釋制成約含XX0.2mg/ml的溶液（含量測定）。4.2方法學驗證4.2.1 專屬性（1）（1）空白溶劑干擾試驗：取水溶液20dl注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，在主成分峰及各已知雜質(zhì)峰位置應不出現(xiàn)色譜峰，以此確定空白溶劑無干擾。(2)雜質(zhì)定位試驗(DAD檢測器)精密量取A雜質(zhì)定位溶液、B雜質(zhì)定位溶液、C雜質(zhì)定位溶液、XX定位溶液、雜質(zhì)對照品溶液各203，依次注入色譜儀中，記錄色譜圖。雜質(zhì)對照溶液中理論板數(shù)按XX峰計算應3000各雜質(zhì)峰之間及主成分峰與相鄰雜質(zhì)峰之間的分離度應符合規(guī)定，各已知雜質(zhì)定位溶液保留時間與雜質(zhì)對照品溶液各峰

18、保留時間應一致，各雜質(zhì)對照峰純度因子應大于980。(3)供試品溶液與對照品溶液對比試驗(DAD檢測器)精密量取XX自制供試品溶液(1),供試品溶液(2)和對照品溶液(0.2mg/ml)各20dl分別注入色譜儀中，記錄色譜圖。供試品溶液色譜圖中主成分峰與對照品溶液色譜圖中主成分峰保留時間應一致，主成分峰與相鄰雜質(zhì)峰應能完全分離，主成分峰的純度因子應大于980。專屬性(1)試驗結果名稱雜質(zhì)定位溶液雜質(zhì)對照溶液主峰保留時間(min)主峰保留時間(min)理論板數(shù)與相鄰雜質(zhì)峰之間分離度純度因子ABCXX樣品主峰保留時間(min)理論板數(shù)與相鄰雜質(zhì)峰之間分離度純度因子對照品溶液(0.2mg/ml)供試品

19、溶液(1)-自制品(0.5mg/ml)供試品溶液(2)-自制品(0.2mg/ml)可接受標準空白溶劑應不干擾測定；供試品溶液色譜圖中主成分峰與對照品溶液色譜圖中主成分峰保留時間應一致，各已知雜質(zhì)峰之間、主成分峰與相鄰雜質(zhì)峰之間分離度均應大于2.0,理論板數(shù)按XX計算應3000各已知雜質(zhì)及主成分峰純度因子均應大于980。4.2.2 專屬性(2)強制降解試驗4.2.2.1 未破壞樣品有關物質(zhì)檢測(DAD檢測器)6/20以水為空白：精密量取超純水20科注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，應不干擾檢測。分別精密量取供試品儲備液各1ml,分別置于3個10ml量瓶中，加水稀釋至刻度，精密量取20d注入液相色譜儀

20、中，記錄色譜圖，列表總結雜質(zhì)情況，并對比自家樣品與市售品的質(zhì)量。4.2.2.2 氧化破壞(DAD檢測器)(1)氧化破壞空白試驗量取1ml30%過氧化氫置于10ml量瓶中，在室溫放置48h后，加水定容至刻度，精密量取此溶液20dl注入液相色譜儀中，記錄色譜圖。(2)分別量取3個供試品儲備液各1ml置10ml容量瓶中，加入1ml30%過氧化氫，在室溫放置48h后，加水定容至刻度，分別精密量取此溶液20d注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，計算樣品破壞前后的總峰面積比值、統(tǒng)計3個供試液破壞后產(chǎn)生的雜質(zhì)個數(shù)及所占比例情況，列表進行對比分析。4.2.2.3 堿破壞試驗(DAD檢測器)(1)堿破壞空白試驗量取1

21、ml0.05mol/L氫氧化鈉溶?夜,置于10ml量瓶中，在室溫放置1h后，力口1ml0.05mol/lHCl溶液，加水定容至刻度，精密量取此溶液20dl注入液相色譜儀中，記錄色譜圖。(2)分別量取3個供試品儲備液各1ml置10ml容量瓶中，加入1ml0.05mol/L氫氧化鈉溶液，在室溫放置1h后，加1ml0.05mol/lHCl溶液，加水定容至刻度，精密量取此溶液20dl注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，計算樣品破壞前后的總峰面積比值、統(tǒng)計3個供試液破壞后產(chǎn)生的雜質(zhì)個數(shù)及所占比例情況，列表進行對比分析。4.2.2.4 酸破壞13t驗(DAD檢測器)(1)酸破壞空白試驗量取1ml1mol/LHC

22、L溶液，置于10ml量瓶中，在室溫放置24h后，力口1ml1mol/L氫氧化鈉溶液，加水定容至刻度，精密量取此溶液20科注入液相色譜儀中，記錄色譜圖。(2)分別量取3個供試品儲備液各1ml置10ml容量瓶中，加入1ml1mol/LHCL溶液，在室溫放置24h后，力口1ml1mol/LNaOH溶液，加水定容至刻度，精密量取此溶液20"注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，計算樣品破壞前后的總峰面積比值、統(tǒng)計3個供試液破壞后產(chǎn)生的雜質(zhì)個數(shù)及所占比例情況，列表進行對比分析。4.2.2.5 高溫破壞試驗(DAD檢測器)(1)高溫破壞空白試驗以水為空白：精密量取超純水20科注入液相色譜儀中，記錄色譜圖

23、，應不干擾檢測。(2)量取3個供試品儲備液各1ml置10ml容量并S中，加水定容，在50c恒溫放置2h后，精密量取此溶液20科注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，計算樣品破壞前后的總峰面積比值、統(tǒng)at3個供試液破壞后產(chǎn)生的雜質(zhì)個數(shù)及所占比例情況，列表進行對比分析。4.2.2.6 光照破壞試驗（DAD檢測器）（1）光照破壞空白試驗以水為空白：精密量取超純水20科注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，應不干擾檢測。（2）分別量取3個供試品溶液于光強為4500Lux（最高光強），室溫放置48h后，精密量取此溶液20dl注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，計算樣品破壞前后的總峰面積比值、統(tǒng)計3個供試液破壞后產(chǎn)生的雜質(zhì)個數(shù)

24、及所占比例情況，列表進行對比分析?？山邮軜藴剩? .各降解條件空白試驗不干擾測定。2 .主峰純度因子應大于980,主峰與相鄰雜質(zhì)峰分離度應R2.0。3 .破壞前后物質(zhì)應守恒：破壞前后的總峰面積比應在90.0-110.0%范圍內(nèi)。4 .自家產(chǎn)品破壞后雜質(zhì)個數(shù)及雜質(zhì)總量不應多于其他兩種對比樣品。4.2.3 系統(tǒng)適用性試驗（1）（有關物質(zhì)）（1）做空白溶劑干擾試驗以水為空白：精密量取超純水20科注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，應不干擾檢測。（2）配制6份相同濃度的雜質(zhì)對照品溶液，分別精密量取20d注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，各雜質(zhì)峰峰面積的RSD應W2.0%保留時間的RSD應W1.0%主峰拖尾因子應

25、不大于2.0,理論板數(shù)應>3000各已知雜質(zhì)峰與相鄰峰分離度應>2.04.2.4 系統(tǒng)適用性試驗（2）（含量測定）（1）做空白溶劑干擾試驗以水為空白：精密量取超純水20科注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，應不干擾檢測。（2）配制6份相同濃度的0.2mg/ml對照品溶液，分別精密量取20d注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，主峰峰面積的RSD應W2.0%主峰保留時間的RSD應W1.0%主峰拖尾因子應<2.0主峰的理論板數(shù)應R3000主峰與相鄰雜質(zhì)峰分離度應>2.04.2.5 檢測限分別量取各已知雜質(zhì)和主成分對照品儲備液，加水逐步稀釋成一定濃度的溶液，精密量取20M注入液相色譜儀中，

26、記錄色譜圖，信噪比約為3:1時的各成分濃度及進樣量，為檢測限濃度及量。4.2.6 定量限分別量取各已知雜質(zhì)和主成分對照品溶液，加水逐步稀釋成一定濃度的溶液，精密量取20d注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，信噪比約為10:1時的各成分濃度及進樣量，為定量限濃度及量。分別配制6份各已知雜質(zhì)和主成分的定量限濃度溶液，分別精密量取203注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，所測6份各已知雜質(zhì)和主成分的定量限溶液主峰的保留時間的RSD應=1%,所測6份各已知雜質(zhì)和主成分溶液主峰面積的RSD應您%。4.2.7 線性與范圍（1）（有關物質(zhì)）4.2.7.1 A線性與范圍(儲備液濃度為0.1mg/ml)精密量取A對照品儲備

27、液適量配制成定量限濃度、1ml(40%)、2ml(80%)、2.5ml(100%)、3ml(120%)、4ml(160%)、5ml(200%),分別置100ml容量瓶中，置于100ml量瓶中，加水稀釋至刻度。分別精密量取20dL注入液相色譜儀中，記錄色譜圖。以A濃度(C,mg/ml)為橫坐標，以峰面積(A)為縱坐標，進行線性回歸，回歸方程的相關系數(shù)(R)應0.9如，Y軸截距應在100%響應值的25%以內(nèi)，響應因子的RSD應W10%結果見下表。A線性與范圍試驗結果表濃度（C,mg/ml）峰面積(A)響應因子(A/C)響應因子RSD%應司0%Y軸截距/100%響應值應<25%回歸方程A=KC

28、+b相關系數(shù)(R2)應0.9904.2.7.2B線性與范圍(儲備液濃度為0.1mg/ml)精密量取B對照品儲備液適量配制成定量限溶液、1ml(40%)、2ml(80%)、2.5ml(100%)、3ml(120%)、4ml(160%)、5ml(200%),置于100ml量瓶中，加水稀釋至刻度。分別精密量取20dL注入液相色譜儀中，記錄色譜圖。以B濃度(C,mg/ml)為橫坐標，以峰面積(A)為縱坐標，進行線性回歸，回歸方程的相關系數(shù)(R)應0.90,Y軸截距應在100%響應值的25%以內(nèi)，響應因子的RSD應40%。結果見下表。B線性與范圍試驗結果表濃度（C,mg/ml）峰面積(A)響應因子(A/

29、C)響應因子RSD%應司0%Y軸截距/100%響應值應<25%回歸方程A=KC+b相關系數(shù)(R2)應0.9904.2.7.3XX線性與范圍(有關物質(zhì)檢查對照品儲備液濃度為0.5mg/ml)精密量取XX對照品儲備液適量配制成定量限溶液、0.4ml(40%)、0.8ml(80%)、1ml(100%)、1.2ml(120%)、1.6ml(160%)、2ml(200%),置于100ml量瓶中,加水稀釋至刻度。分別精密量取20dL注入液相色譜儀中，記錄色譜圖。以XX濃度(C,mg/ml)為橫坐標，以峰面積(A)為縱坐標，進行線性回歸，回歸方程的相關系數(shù)(R)應0.90丫軸截距應在100%響應值的2

30、5%以內(nèi)，響應因子的RSD應得0.0%。結果見下表。XX線性與范圍試驗結果表濃度（C,mg/ml）峰面積（A）響應因子（A/C）響應因子RSD%應司0%Y軸截距/100%響應值應<25%回歸方程A=KC+b相關系數(shù)（R2）應0.9904.2.7.4C線性與范圍（儲備液濃度為0.2mg/ml）精密量取C對照品儲備液適量配制成定量限溶液、1ml（40%）、2ml（80%）、2.5ml（100%）、3ml（120%）、4ml（160%）、5ml（200%）,置于100ml量瓶中，加水稀釋至刻度。分別精密量取20始注入液相色譜儀中，記錄色譜圖。以線性回歸，回歸方程的相關系數(shù)（C濃度（C,mg/m

31、l）為橫坐標，以峰面積（A）為縱坐標，進行R）應0.90,丫軸截距應在100%響應值的25%以內(nèi)，響應因子的RSD應得0%。結果見下表。C線性與范圍試驗結果表濃度（C,mg/ml）峰面積（A）響應因子（A/C）響應因子RSD%應司0%Y軸截距/100%響應值應<25%回歸方程A=KC+b相關系數(shù)（R2）應0.9904.2.8線性與范圍（2）（含量測定）4.2.8.1XX線性與范圍（含量測定對照品儲備液濃度為1.0mg/ml）精密量取XX對照品貯備液1.0ml（50%）、2ml（100%）、3ml（150%）、5ml（300%）分別置10ml容量瓶中，加水稀釋至刻度。分別精密量取20dL注

32、入液相色譜儀中，記錄色譜圖。以XX濃度（C,mg/ml）為橫坐標，以峰面積（A）為縱坐標，進行線性回歸，回歸方程的相關系數(shù)（R2）應0.9%丫軸截距應在100%響應值的2%以內(nèi)，響應因子的RSD應W2.0%結果見下表。XX線性與范圍試驗結果表濃度（C,mg/ml）峰面積（A）響應因子（A/C）響應因子RSD%應2.0%Y軸截距/100%響應值應2%回歸方程A=KC+b相關系數(shù)（R2）應0.9984.2.9精密度（1）（有關物質(zhì)）4.2.9.1重復性取XX樣品適量，精密稱定，加水溶解并稀釋制成每1ml約含XX0.5mg的溶液，搖勻，得供試品溶液，同法配制6份，分別精密量取20口注入液相色譜儀中，

33、記錄色譜圖；另取雜質(zhì)對照品溶液同法測定，計算有關物質(zhì)，所測6份供試品溶液的有關物質(zhì)的RSD應V%。有關物質(zhì)檢查重復性試驗結果表樣品123456A%平均值%RSD%應2%B%平均值%RSD%應2%C%平均值%RSD%應V%最大未知單雜%平均值%RSD%應V%未知雜質(zhì)和%平均值%RSD%應V%總雜平均值%RSD%應V%由另一QC人員用另一臺液相，同法測定6份供試品溶液有關物質(zhì)，12份雜質(zhì)含量數(shù)據(jù)的RSD應V%。有關物質(zhì)檢查中間精密度試驗結果表樣品123456789101112A%平均值%RSD%應w2%B%平均值%RSD%應W%C%平均值%RSD%應w2%最大未知單雜%平均值%RSD%應w2%未知

34、雜質(zhì)和%平均值%RSD%應w2%總雜平均值%RSD%應w2%4.2.10精密度（2）（含量測定）4.2.10.1重復性取XX樣品適量，精密稱定，加水溶解并稀釋制成每1ml約含XX0.2mg的溶液，搖勻，得供試品溶液，同法配制6份，分別精密量取20口注入液相色譜儀中，記錄色譜圖；另取含量測定對照品溶液同法測定，計算含量，所測6份供試品溶液的含量測定的RSD應W%。含量測定重復性試驗結果表樣品123456含量%平均值%RSD%應得4.2.10.2中間精密度由另一分析人員于不同日期用不同儀器同法測定6份含量，12份含量數(shù)據(jù)的RSD應得。含量測定中間精密度試驗結果表樣品123456789101112含

35、量%平均值%RSD%應得備注：將重復性項下的含量測定結果作為準確度試驗的已知含量。4.2.11準確度(1)(有關物質(zhì))(1)配制供試品儲備液：精密稱取XX樣品適量，加水溶解并定量稀釋制成約含XX5.0mg/ml的溶液，配制250ml,4c冰箱中保存。(2)配制供試品溶液：精密量取供試品儲備液1ml,置于10ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得。(3)配制加標供試液：分別精密量取A對照品儲備?夜(濃度0.1mg/ml)、B對照品儲備液(濃度0.1mg/ml)、C各雜質(zhì)對照品儲備液對口品儲備液(濃度0.2mg/ml)2.5、5.0、7.5ml,分別置于3個200ml量瓶中，分別加入供試品儲備液2

36、0ml,加水稀釋至刻度，搖勻，制成分別含50%、100%、3份，共9份。加水稀釋制成每1ml中約含A150%已知雜質(zhì)的含XX樣品0.5mg/ml的供試液，每個濃度分別制備(4)配制雜質(zhì)對照品溶液：精密量取各雜質(zhì)對照品儲備液適量,2.5閔、B2.5囚、C5.0四的混合溶液。20W注入液相色譜儀，記錄92%-105%,9個回(5)分別精密量取供試品溶液、雜質(zhì)對照品溶液、各濃度供試液色譜圖，分別測定已知雜質(zhì)含量，計算回收率，各濃度下的平均回收率均應在收率數(shù)據(jù)的RSD應2%。有關物質(zhì)檢查準確度試驗結果表編p加入量(mg)測得量(mg)回收率(%)平均回收率(%)RSD(%)雜質(zhì)ABCABCABCABC

37、ABC50%1-11-21-31002-1精密稱取XX樣品適量，加水溶解并定量稀釋分別制成每1ml中約含XX0.16mg(80%)、0.2mg(100%)和0.24mg(120%)的溶液，各濃度分別制備3份，共9份，分別精密量取20口注入液相色譜儀中，記錄色譜圖；另取含量測定對照品溶液20dL注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，分別計算回收率。結果見下表。各濃度回收率均應98%-101%,9個回收率數(shù)據(jù)的RSD應W2.0%含量測定準確度試驗結果表編R已知量(mg)測得量(mg)回收率(%)平均回收率(%)RSD(%)80%1-1應98%-101%應W2.0%1-21-3100%2-1應98%-101

38、%2-22-3120%3-1應98%-101%3-23-34.2.13耐用性(1)(有關物質(zhì))4.2.13.1溶液穩(wěn)定性精密稱取供試品適量，加水溶解并稀釋制成每1ml約含XX0.5mg的溶液，分別置室溫和4c冰箱各放置12h,分別在0、4、8、12h測定雜質(zhì)含量，各已知雜質(zhì)含量的絕對值在M.1%以內(nèi)，并不得出現(xiàn)新的大于報告限度(0.05%)的雜質(zhì)視為溶液穩(wěn)定，否則為不穩(wěn)定。有關物質(zhì)檢查溶液穩(wěn)定性試驗結果表放置時間0h4h8h12h雜質(zhì)變化雜質(zhì)雜質(zhì)與0h差雜質(zhì)與0卜差雜質(zhì)與0卜差ABC新增大于0.05%的雜質(zhì)一4.2.13.2流速耐用性精密稱取供試品適量，加水溶解并稀釋制成每1ml中約含XX0.

39、5mg的溶液，作為供試品溶液。分別在流速0.8ml/min、1.0ml/min、1.2ml/min條件下測定雜質(zhì)含量，各已知雜質(zhì)峰的拖尾因子不大于2.0,各已知雜質(zhì)和相鄰峰應達到基線分離，雜質(zhì)含量數(shù)據(jù)的相對標準偏差應不大于2.0%,雜質(zhì)含量與1.0ml/min數(shù)值相比變化的絕對值在劃1%以內(nèi)，視為耐用性好，否則為不好。有關物質(zhì)檢查流速耐用性試驗結果表流速(ml/min)0.81.01.2雜質(zhì)含量RSD%A含量%與1.0ml/min結果差值與相鄰峰分離度拖尾因子B含量%與1.0ml/min結果差值與相鄰峰分離度拖尾因子C含量%與1.0ml/min結果差值與相鄰峰分離度拖尾因子最大未知單雜含量%未

40、知總雜含量%總雜含量%4.2.13.3柱溫耐用性精密稱取供試品適量，加水溶解并稀釋制成每1ml中約含XX0.5mg的溶液，作為供試品溶液。分別在柱溫25C、30C、35c條件下測定，各已知雜質(zhì)峰的拖尾因子不大于2.0,各已知雜質(zhì)和相鄰峰應達到基線分離，雜質(zhì)含量數(shù)據(jù)的相對標準偏差應不大于2.0%,雜質(zhì)含量與30c測定數(shù)值相比變化的絕對值在M.1%以內(nèi)，視為耐用性好，否則為不好。有關物質(zhì)檢查柱溫耐用性試驗結果表柱溫C253035雜質(zhì)含量RSD%A含量%與30C差值與相鄰峰分離度拖尾因子B含量%與30C差值與相鄰峰分離度拖尾因子C含量%與30C差值與相鄰峰分離度拖尾因子最大未知單雜含量%未知總雜含量

41、%總雜含量%4.2.13.4流動相pH值耐用性精密稱取供試品適量，加水溶解并稀釋制成每1ml中約含XX0.5mg的溶液，作為供試品溶液。分別在pH值為3.3、3.5、3.7條件下測定雜質(zhì)含量，各已知雜質(zhì)峰的拖尾因子不大于2.0,各已知雜質(zhì)和相鄰峰應達到基線分離，雜質(zhì)含量數(shù)據(jù)的相對標準偏差應不大于2.0%,雜質(zhì)含量與pH值3.5測定數(shù)值相比變化的絕對值在M.1%以內(nèi)，視為耐用性好，否則為不好。有關物質(zhì)檢查流動相pH值耐用性試驗結果表PH值3.33.53.7雜質(zhì)含量RSD%A含量%與pH3.5差值與相鄰峰分離度拖尾因子B含量%與pH3.5差值與相鄰峰分離度拖尾因子C含量%與pH3.5差值與相鄰峰分離度拖尾因子最大未知單雜含量%未知總雜含量%總雜含量%4.2.13.5流動相比例耐用性精密稱取供試品適量，加水溶解并稀釋制成每1ml中約含XX0.5mg的溶