2012年11月6日線性范圍100mM新PBSpH=459

1、Colorimetric detection of cys using gold nanoparitlces aggregation 組會報告2012年11月9日 李世滋1手性相關(guān)文獻2近期GNPs檢測cys的工作進展 具有磁核的納米粒子在其表面同時有手性配體同時具有磁性和手性識別的能力，以此，建立一種通用的手性磁性材料。 纖維素-2,3-二（3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯）（CBDMPC），作為HPLC最有效的手性固定相，選擇性固定在包硅磁球表面，形成手性磁微球Fe3O4SiO2CBDMPC(CMM)。之后，成功將CBDMPC固定在包硅微球的表面，用IR和CD譜表征。 最后，將磁性納米材料直接

2、手性分離領(lǐng)域中。分離結(jié)果證明CMM對不同消旋物聚有手性識別能力，證明了它作為手性分離的一種有潛力的材料的可行性。此外，外加磁場使得CMM的回收非常方便。優(yōu)勢優(yōu)勢三步合成過程：三步合成過程： 首先，纖維素之后加入過量的三苯甲基氯，使僅與6位的初級羥基反應(yīng)形成三苯甲基醚。24h后，加入過量的3,5-二甲基苯異氰酸，形成在2-和3-位有羥基的氨基甲酸酯。該反應(yīng)在100繼續(xù)反應(yīng)24h。 中間物，纖維素-2,3-二（3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯）-6-O-三苯甲基因為在甲醇中不溶解而游離出來，在含有少量的鹽酸的過量甲醇中再分散室溫24h，除去三苯甲基氯，得到終產(chǎn)物CBDMPC。在無水吡啶中溶脹100，5

3、h，活化羥基。70nm1，6-己二異氰酸為間隔臂：連接羥基和異氰酸氨基甲?；鵆BDMPC 將磁球在含有60mL苯的燒瓶中超聲分散。 為了在磁球表面固化CBDMPC，將合成的CBDMPC溶解于20mL無水吡啶中，之后機械攪拌90加入上述MNPs分散液。攪拌1h后，加入100L的1,6-己二異氰酸酯，反應(yīng)在90進行12h。得到的溶液室溫條件下冷卻，通過磁性傾析手性手性磁性納米粒子，用甲醇洗滌三次。最后產(chǎn)物70真空干燥12h。消旋樣品制備：在25mL乙醇中分別，溶解5種不同的消旋物。之后再以上5種消旋溶液中分別加入150mgMNPs。室溫渦旋震蕩5min，加磁場60s內(nèi)得到上清液，用自動數(shù)字旋光計分

4、析，其他消旋樣品同上。 為了研究分離過程，擇5種消旋的安息香甲酯的一種，分離結(jié)果用HPLC分析。簡單說，通過在乙醇中稀釋得到濃度為10g/ml的消旋樣品。用HPLC分析，在試管中加入1mL的消旋樣品（10g/ml），隨后加入100mg合成的手性磁性微球?；旌弦涸谑覝貤l件下渦旋震蕩5min。之后在磁場的幫助下，溶液與CMM在60s內(nèi)得到分離，收集上清液進行HPLC分析。之后剩余溶液與CMM保持多余15min，上清液用HPLC分析?；厥眨夯厥眨?用CMM分離5種消旋物后（總用量為750mg），收集所有的CMM在磁場幫助下乙醇洗滌以除去吸附的消旋物。洗脫清液也用HPLC在相同條件下分析。發(fā)現(xiàn)洗脫CM

5、M 5次后，消旋物完全釋放。得到的回收CMM在70真空干燥12h，得到738 mg CMM。表征： 熱重分析評估了Fe3O4SiO2CBDMP微球的有機層含量。如fig4，與Fe3O4SiO2相比Fe3O4SiO2CBDMPC微球在230有明顯失重。可以推出Fe3O4SiO2CBDMPC微球在230和500表現(xiàn)高有機質(zhì)量釋放大約40%。有機物在500完全分解。磁球磁性用振動樣品磁強計（VSM）研究。結(jié)果fig5，磁飽和值（Ms）的下降是由于TGA中高有機物含量造成的。 即，厚的非磁性有機CBDMPC層包覆在硅球表面，導(dǎo)致磁化強度降低。盡管Fe3O 4SiO2CBDMPC的Ms降低，但是在外加磁

6、場下仍有強的磁響應(yīng)，在60s內(nèi)能完全分離。 直接分離5種不同的消旋物研究CMM的手性識別能力，分離結(jié)果用自動數(shù)字旋光計分析。圖table1.五種消旋物沒有任何光學(xué)旋轉(zhuǎn)，因為（+）（-）異構(gòu)體產(chǎn)生等量相反光學(xué)旋光，導(dǎo)致消旋物的消除效應(yīng)。當(dāng)與CMM作用5min后，所有的5種消旋物表現(xiàn)正光學(xué)旋光。 可能原因是：纖維素衍生物具有三重螺旋的構(gòu)型，因為其高度規(guī)律的螺旋結(jié)構(gòu)導(dǎo)致其對消旋物的手性區(qū)分，還有氨基酸酯殘基被認為是最重要的吸附位點。具有極性基團的消旋物可能主要通過氫鍵與氨基甲酸酯殘基相互作用。消旋物和纖維素衍生物間的-相互作用在手性分離中也有重要作用。根據(jù)table1，當(dāng)CMM在乙醇中用于直接手性分

7、離時，主要通過其螺旋凹槽，氫鍵或-相互作用。用NVM-GNPs檢測cys的試驗： 之前的工作情況檢測的cys的濃度范圍210 mg/L這里，UV-vis圖中沒有給出不加cys的吸收譜 近來工作進展：近來工作進展：由于NVM-GNPs穩(wěn)定性的問題，如果GNPs穩(wěn)定性非常好，在PBS中將對cys檢測響應(yīng)變差；而如果GNPs自身穩(wěn)定性非常差，則在PBS中GNPs本身的酒紅色就會因發(fā)生自團聚而逐漸變成藍紫色。 這時已經(jīng)發(fā)生團聚了的GNPs不能用于cys的檢測根據(jù)上次組會提出的問題，做了cys與GNPs反應(yīng)隨著時間變化的趨勢： 檢測加入0.4 mg/L cys后1h內(nèi)A/A對時間的變化情況。由圖可以看出

8、在低濃度的cys檢測時，變色反應(yīng)比較緩慢。在加入cys之后，GNPs的溶液稍有顏色變化，從UV-vis譜上可以看出有些變寬，因此說明在此條件下，GNPs自身的穩(wěn)定性仍然不太好。y = 0.057x + 0.4764R2 = 0.99220.40.50.60.70.80.911.1051015A650/A525A650/A525線性 (A650/A525)線性范圍： 0.4 10 mg/L 線性范圍： 0.4 10 mg/L 20121016之前合成的NVM-GNPs儲備液稀釋備用 有時候NVM-GNPs穩(wěn)定性非常好，如下情況：20121018 線性使用同一批的GNPs（比較穩(wěn)定，所以想試試把G

9、NPs的濃度稍微降低些，看看對于cys的檢測，）使用的新配置的 50 mM pH=4.30 PBS，在這種情況下這種情況下由于稀釋了納米粒子的濃度，由于稀釋了納米粒子的濃度，NVM-GNPs自身的穩(wěn)定性表現(xiàn)稍差，自身的穩(wěn)定性表現(xiàn)稍差，發(fā)現(xiàn)GNPs自身有團聚現(xiàn)象，反應(yīng)放置1.5h立即測定UV-vis。平行做了兩組實驗。20121019 線性干擾氨基酸試驗：20121025 干擾氨基酸由于GNPs自身穩(wěn)定性問題，有意注意合成條件。2012年10月31日水浴和室溫條件下在低濃度的cys的檢測線性都不好，NVM-GNPs穩(wěn)定性較好的，可能需要更改PBS的離子強度和PH。2012年11月1日線性范圍20

10、12年11月5日 改變反應(yīng)體系PBS做線性由于之前使用的都是3mL 反應(yīng)體系：2 mL 50 mM pH=4.45 PBS + 1 mL NVM-GNPs + 30 L各級濃度的cys，室溫條件下放置2h后測定UV-vis。但是，由于NVM-GNPs自身穩(wěn)定性不好，或者是在50mM PBS中過于穩(wěn)定，因而對于cys的檢測效果都不好。因此，考慮在使用穩(wěn)定的NVM-GNPs的條件下，改變反應(yīng)體系PBS的pH和濃度，以得到cys的線性范圍。嘗試了穩(wěn)定的NVM-GNPs在100mM PBS中穩(wěn)定性較好。如下圖所示，在室溫條件下與實驗隨行的空白NVM-GNPs在PBS中穩(wěn)定性很好。問題是最近做cys檢測，在長波長處本來應(yīng)該出現(xiàn)第二個吸收峰，現(xiàn)在變成了GNPs的吸收峰整體向長波長方向移動，而在做線性的圖的時候，仍選擇之前的幾處波長的比值。2012年年11月月6日日 線性范圍線性范圍 100 mM 新新PBS pH=4.59合成的NVM-GNPs條件：16.3 mg NVM + 200L NaOH + 1mL 1% HAuCl4 75油浴2h。合成