現(xiàn)代藥物分析重點

1、現(xiàn)代藥物分析選論光學小分子設計及應用一、熒光的基本原理熒光物質(zhì)的分子吸收了特征頻率的光能后，由基態(tài)躍遷到能級較高的第一電子激發(fā)態(tài)單線態(tài)或第二電子激發(fā)態(tài)單線態(tài)，然后通過無輻射躍遷返回到第一電子激發(fā)態(tài)單線態(tài)的最低振動能級上，再從該能級降落至基態(tài)的各個不同的振動能級上，同時釋放出相應能量的分子熒光，最后以無輻射躍遷形式回到基態(tài)的最低振動能級。二、常見的染料種類 熒光素類染料：FITC（異硫氰酸熒光素）FAM（羥基熒光素）TET（絲氯熒光素）羅丹明類：R101 RB200 TAMRA 菁染料：噻唑橙（TO） 惡唑橙（YO）其他類：二苯乙烯、萘酰亞胺、香豆素類、吖啶芘類三、分析化學藥物分子相關的期刊名稱

2、Springer、Chemical Reviews、Talanta、Organic Letters、dyes and pigments體內(nèi)藥物分析一、生物樣品處理方法以及特點【生物樣品的特點】樣品珍貴，濃度低、量少；來源廣泛、組成復雜、基質(zhì)復雜；樣品脆弱，容易失活；提純步驟繁瑣。【生物樣品處理方法】1.不穩(wěn)定樣品的預處理（氧化 水解）（1）易被氧化藥物：a.樣品中加入抗氧劑（VitC+EDTA、半胱氨酸、2-巰基乙醇） b.將不穩(wěn)定的藥物轉化為穩(wěn)定的衍生物（2）易水解藥物預處理：酯酶抑制劑2.常規(guī)方法：（1）蛋白質(zhì)沉淀法：加入甲醇、乙腈等有機溶劑，同時采用超速離心機；加入中性鹽沉淀； （2）超

3、濾法：操作條件溫和，沒有相態(tài)變化，能量消耗小，破壞有效成分可能小 需要血量少（3）液液萃取法：一次提取可取出大量雜質(zhì)，根據(jù)不同的有機溶劑，可具有高選擇性（4）SPE（固相萃取技術）特點：基質(zhì)效應?。?）直接進樣技術與柱切換技術在線處理和分離（樣品處理柱和樣品分析柱）（6）衍生化 可以提高穩(wěn)定性 檢測特性等問題（7）離子交換樹脂：具有高選擇性，但較麻煩適用于高極性，可電離的物質(zhì)。（8）其他（頂空GC、制備HPLC、微透析技術）二、體內(nèi)藥物分析評價指標、合格標準1.方法特異性： 特異性是指樣品中存在干擾成分的情況下，分析方法專一的測定分析物的能力，注意在待測物出峰位置，空白基質(zhì)應無干擾2.標準曲線

4、與線性范圍：定量范圍應查文獻，結合預實驗結果確定；至少6個點 線性大于0.99 每個濃度點和加入濃度的差異，L20% 其他15% 3.方法定量限 LOQ：滿足35個消除半衰期時樣品中的藥物濃度或能檢測出Cmax的1/1020時的藥物濃度4.精密度與準確度；三個濃度點每個濃度點五份樣 批內(nèi)批間精密度低20%中高15% 準確度不單獨考察 5.提取回收率； 中低3個濃度（80%、100%、120%）的提取回收率,其結果應當 精密和可重現(xiàn). 應考察高中低三個濃度的提取回收率 = 樣品處理過程后/純標準品 * 100%6.介質(zhì)效應（ME）； 用LC-MS測定樣品時，由于內(nèi)源性干擾物的存在，待測物在離子化

5、過程中發(fā)生離子增強或離子抑制的作用.使測物響應值不穩(wěn)定在85%-115%范圍內(nèi)可認為沒有介質(zhì)效應措施：（1）選擇合適樣品前處理方法，LLE和SPE介質(zhì)效應相對較少（2）改變待測物的色譜分離條件，優(yōu)化色譜條件使內(nèi)源性物質(zhì)與待測物分開（3）采用小進樣量（4）利用液相色譜電解質(zhì)效應，加入有機酸或堿，促進離子化（5）使用較低流速，降低了待測成分與基質(zhì)成分在離子源的競爭（6）改用不同的離子源，考慮APCI和APPA，ESI對基質(zhì)的敏感性更高7.樣品穩(wěn)定性：室溫放置8h時間、反復凍融、長期冰凍、進樣器放置89h三、代謝物研究的制備方法1. 體外方法：肝微粒體溫孵法、肝細胞溫孵法、基因重組酶溫孵法、肝組織切

6、片法、離體肝灌流法腸道菌群體外溫孵法（甘草皂苷）2. 體內(nèi)方法：膽汁 尿液 糞便 血液 其他（乳汁 肝勻漿等）蛋白質(zhì)組學一、蛋白質(zhì)組學的定義和特點 蛋白質(zhì)組學是指在大規(guī)模水平上研究蛋白質(zhì)的特征，包括蛋白質(zhì)的表達水平，翻譯后的修飾，蛋白與蛋白相互作用等，由此獲得蛋白質(zhì)水平上的關于疾病發(fā)生，細胞代謝等過程的整體而全面的認識。蛋白質(zhì)組學從蛋白質(zhì)的水平上，對蛋白質(zhì)進行定量，動態(tài)、整體的研究、闡明生物體全部蛋白質(zhì)，表達模式及功能模式【特點】蛋白質(zhì)組學是動態(tài)的，表現(xiàn)出多樣性。1） 從mRNA表達水平并不能預測蛋白質(zhì)表達2） 蛋白質(zhì)動態(tài)修飾和加工并非必須來自同一基因序列3） 蛋白質(zhì)組動態(tài)反映生物系統(tǒng)所處的狀

7、態(tài)4） 蛋白質(zhì)組學較之前的基因組學對于生命現(xiàn)象的解釋更直接、更準確。二、蛋白質(zhì)組學的定量方法 1.利用熒光染料進行定量的蛋白質(zhì)組分析技術。適用于檢測蛋自質(zhì)的熒光染料有兩類:1）用于蛋白質(zhì)熒光染色，如Sypro Ruby 和 RuBS2) 用于蛋白質(zhì)的熒光標記，如Cy2,Cy3和Cy5,可進行熒光雙向差示凝膠電泳。2運用質(zhì)譜進行定量的蛋白質(zhì)組分析技術：a穩(wěn)定同位素代謝標記技術b同位素親和標簽技術主要是使用一種稱為ICAT的化學試劑。其結構由三部分組成：第一 親和標簽（生物素），用來分離經(jīng)標記后的多肽；第二 連接子，用來整合穩(wěn)定的同位素；第三 活性基團，用來特異結合巰基。 三、二維電泳第一相等電聚

8、焦電泳分離 第二相按質(zhì)量分離固相PH梯度等電聚焦優(yōu)點：克服了載體兩性電解質(zhì)陽極漂移，可精確設定PH準備步驟：樣品準備第一維 固相PH梯度第二維SDS-PAGE染色考馬斯亮藍圖像分析，自動掃描優(yōu)點：可分離10100 kD 范圍內(nèi)蛋白質(zhì)；高靈敏度和高分辨率；便于計算機進行圖像分析處理；與質(zhì)譜分析匹配 缺點：極酸、極堿性蛋白質(zhì)，疏水性蛋白質(zhì)，極大蛋白質(zhì)、極小蛋白質(zhì)及低豐度蛋白質(zhì)用此種技術難于有效分離。膠內(nèi)酶解過程費時、費力，難于與質(zhì)譜聯(lián)用實現(xiàn)自動化創(chuàng)新藥物研發(fā)中的難點一、雜質(zhì)分析雜質(zhì)分類：無機雜質(zhì)（試劑、配位體、催化劑、重金屬、其他金屬、無機鹽、活性炭）、有機雜質(zhì)（起始原料、副產(chǎn)物、中間體、降解產(chǎn)物

9、、試劑、配位體、催化劑、幾何異構立體異構） 殘留雜質(zhì)已鑒定雜質(zhì)：已確證了結構特征的雜質(zhì) 特定雜質(zhì)：在質(zhì)量標準中規(guī)定雜質(zhì)并有自己限度標準的雜質(zhì)已鑒定或未鑒定 潛在雜質(zhì)：按照理論推測在生產(chǎn)或儲藏過程中可能產(chǎn)生的雜質(zhì)，實際生產(chǎn)中不一定存在 雜質(zhì)譜：存在于藥品中的雜質(zhì)組成或模式雜質(zhì)譜分析的基本途徑：揮發(fā)性雜質(zhì)殘留溶劑HS-GC 其他 GC-MS有機 RP-HPLC不同檢測器/梯度洗脫 互補方法HPEC or HPTLC or HPGPC無機雜質(zhì) ICP-MS or離子色譜二、手型 （一）不同構型的立體異構體生物活性不同 1.藥物的生物活性完全或主要由其中的一個對應體產(chǎn)生 s-萘普生 2.兩個對應體具有

10、完全相反的生物活性 哌西那朵 3.一個對映體有嚴重的毒副作用 四咪唑 4.兩個對應體的生物活性不同，但合并用藥有利 奈必洛爾 5.兩個對應體具有完全相同的生物活性 普羅帕酮 （二） 手性藥物研究 1.原料藥制備工藝研究 結構確證 2.選擇制劑的劑型、處方與工藝 3.質(zhì)量研究 4.制訂質(zhì)量標準 5.穩(wěn)定性研究（三）絕對構型（或通過衍生物的構型）確證方法 1.比旋度測定 4.旋光色散（ORD） 2.手性柱色譜（Chiral HPLC/GC） 5.圓二色譜（CD） 3.核磁共振 6.單晶X-衍射（XRSD）三、限度報告限度：超出此限度的雜質(zhì)均應在檢測報告中報告，并應報告具體的檢測數(shù)據(jù)。鑒定限度：超出

11、此限度的雜質(zhì)均應進行定性分析，確定其化學結構質(zhì)控限度：質(zhì)量標準中一般允許的雜質(zhì)限度，如制訂限度高于此限度，則應有充分的依據(jù)。原材料的雜質(zhì)限度最大日計量報告限度鑒定濃度質(zhì)控濃度2g0.03%0.05%0.05%報告限度最大日劑量小于等于1g大于1g限度0.1%0.05%鑒定限度最大日劑量小于1mg110mg大于10mg2g大于2g限度1.0%或5ug（取最小值）0.5%或20ug（取最小值）0.2%或2mg（取最小值）0.10%質(zhì)控限度最大日劑量小于10m10100mg大于100mg2g大于等于2g限度1.0%或50ug（取最小值）0.5%或200ug（取最小值）0.2%或3mg（取最小值）0.

12、15%計算藥物分析模式識別：識別出某個樣本與哪一類供模仿用的樣本相同或相似。即對表征事物或現(xiàn)象的各種形式的信息（數(shù)值的，文字的，邏輯關系的）進行處理與分析，以對其進行描述、辨認、分類和解釋，是信息科學和人工智能的重要組成部分。借助數(shù)學的方法和計算機技術揭示事物或現(xiàn)象的隱含性質(zhì)和內(nèi)部規(guī)律?；竟δ苁菍颖痉诸惢虮鎰e聚類：是研究“物以類聚”的一種統(tǒng)計方法，是數(shù)據(jù)挖掘、信息分析中的一個活躍研究領域。聚類分析的目的在于辨別在某些特性上相似的事物，并按這些特性將樣本劃分成若干類（群）。同一類內(nèi)的事物具有高度的同質(zhì)性，而不同類的事物則有高度的異質(zhì)性。聚類分析可歸屬為無監(jiān)督的模式識別方法。系統(tǒng)聚類法：先將n

13、個樣本各自看成一類，然后規(guī)定樣本之間的距離和類與類之間的距離，開始各樣本自成一類，這時類之間的距離與樣本之間的距離相同，然后選擇距離最小的兩類合并成新類，并計算該新類與其他類之間的距離，接著再將距離最近的兩類合并，重復此過程，直至所有的樣本都聚成一類為止。類與類之間的距離也有多種的定義方法，不同的定義方法就產(chǎn)生了不同的系統(tǒng)聚類方法；如最短距離法、最長距離法、中間距離法、重心類、平均法、利差平方和法、可變類平均法、可交法等；步驟基本上是一樣的，不同是類與類之間的距離有不同的定義方法。主成分分析：通過數(shù)學交換處理，從原始測量數(shù)據(jù)中抽提出能夠反映其內(nèi)在數(shù)據(jù)結構和規(guī)律的新的綜合變量，用以簡化數(shù)據(jù)復雜性

14、，描述樣本，建立簡化數(shù)學模型，以便對原始數(shù)據(jù)的進一步分析。映射技術：是將高維空間中的點集在最優(yōu)的意義下變換成為低維空間中點集的一種數(shù)學方法，即將較多數(shù)變量（高維）變換為少數(shù)幾個變量（低維），而這些較少的新變量能夠最大限度地表征原多個變量的信息。人工神經(jīng)網(wǎng)絡：一種模仿生物神經(jīng)系統(tǒng)（BNN）信息處理方式的技術。人腦中存在著由巨量神經(jīng)細胞結合而成的神經(jīng)網(wǎng)絡，它構成了大腦信息處理的物質(zhì)基礎。生物神經(jīng)系統(tǒng)信息處理的特點：高度并行性；信息的處理和存儲合二為一并行處理：多進程同時處理（以空間復雜性降低時間復雜性）串行處理：單進程順序處理名解：數(shù)學分離、聚類、特征、空間、主成分、降維方法、特征提取、類距離、類

15、間距離論述題：解釋、比較、綜合幾個方法 距離公式（基本公式） MP 神經(jīng)元輸入計算公式（基本公式）藥物基因組學一、列舉6類代表性基因多態(tài)性檢測技術1. 基于實時熒光定量PCR的SNP檢測技術（熒光標記）2. 基于核酸入侵反應的SNP檢測技術3. 基于生物質(zhì)譜的SNP檢測技術（MALDI-TOF-MS）4. 基于基因芯片的SNP檢測技術5. 基于生物發(fā)光焦測序的SNP檢測6. 新一代大規(guī)模測序技術二、簡述焦測序技術原理及其應用四個酶 DNA Polymerase 、ATP sulfurylase、Luciferase、Apyrase1. 目標DNA單鏈與鏈霉素親和素相結合（此鏈霉親和素包裹在磁納

16、米之外）2. 借助各種分離技術（如磁場）經(jīng)多步操作將干擾物分離，使溶液中僅剩DNA單鏈3. 利用聚合酶在引物后進行合成，加入四種原料的其中一種（ATGC）若可以發(fā)生互補配對，則聚合酶作用時釋放焦磷酸 4. 焦磷酸在硫酸化酶的作用下形成產(chǎn)物，再經(jīng)熒光素酶產(chǎn)生熒光1個當量PP對應一個當量熒光，如此循環(huán)2.3直到 整個測序完畢5.若NTP與DNA不反應，則會被降解酶降解以排除干擾應用：1. 通過人工方式將一個或多個基因引入基因組轉基因技術2. 序列標簽、定量性能3. 診斷21三體綜合癥、唐氏綜合癥4. 診斷大腸癌，糞便中脫落細胞5. 單細胞檢測 芯片PCR：芯片表面將單細胞捕獲三、概述抗凝藥物氯吡格

17、雷的個體化給藥注意事項FDA對氯吡咯雷用藥的黑框警告：1.使用氯吡咯雷前需檢查病人CYP2C19基因多態(tài)性，主要檢測CYP2C19*2和*3位點2.CYP2C19*2和*3基因人群為慢代謝人群，氯吡咯雷前體藥物轉化速率慢，應增加用藥劑量，從300mg/d增加到6oomg/d3.在使用氯吡咯雷是需要避免使用CYP2C19抑制性藥物，如奧美拉唑代謝組學1. 代謝組：生物體內(nèi)參與物質(zhì)傳遞、能量代謝和信息傳導等代謝調(diào)控的全體小分子物質(zhì)。2. 代謝組學：通過組群指標分析，定量研究生物體在內(nèi)、外因素的遺傳變異、疾病侵襲、藥物干預、環(huán)境變化等作用下，所含的內(nèi)源性小分子代謝物種類。數(shù)量變化的動態(tài)規(guī)律及與生理、病理變化的關聯(lián)。3. 生物樣品選取與采集（血樣、尿樣