紫外-可見分光光度計操作規(guī)程

1、. -紫外-可見分光光度計操作規(guī)程(TU1810)1目的：制訂本標準的目的是為規(guī)檢驗人員在質(zhì)量檢驗過程中的操作，保證檢驗結(jié)果的正確性。2適用圍：本標準適用于二廠檢驗員對產(chǎn)品質(zhì)量的檢驗。3職責： QC檢驗員對本標準的實施負責。4程序：4.1簡述紫外-可見分光光度法是利用物質(zhì)分子對紫外可見光譜區(qū)的輻射的吸收來進展分析的一種儀器分析方法。這種分子吸收光譜產(chǎn)生于價電子和分子軌道上的電子在電子能級間的躍遷，它廣泛用于無機和有機物質(zhì)的定性和定量分析。朗伯比耳定律LambertBeer是光吸收的根本定律，俗稱光吸收定律，是分光光度法定量分析的依據(jù)和根底。當入射光波長一定時，溶液的吸光度是吸光物質(zhì)的濃度及吸收

2、介質(zhì)厚度吸收光程的函數(shù)。其常用表達式為，式中為系數(shù)：A=··C式中A為吸光度；為吸收系數(shù)；C 為溶液濃度；為光路長度。如溶液的濃度C為1%g/ml，光路長度L為1cm，相應(yīng)的吸光度即為吸收系數(shù)以表示。如溶液的濃度C的摩爾濃度mol/L，光路長度為1cm時，那么相應(yīng)有吸收系數(shù)為摩爾吸收系數(shù)，以表示。4.2 儀器 紫外可見分光光度計是基于紫外可見分光光度法的原理工作的常規(guī)分析儀器。根據(jù)光路設(shè)計的不同，紫外可見分光光度計可以分為單光束分光光度計、雙光束分光光度計和雙波長分光光度計。4.2.1 儀器測量條件選擇 1.測量波長的選擇 通常都是選擇最強吸收帶的最大吸收波長max作為測量

3、波長，稱為最大吸收原那么，以獲得最高的分析靈敏度。而且在max附近，吸光度隨波長的變化一般較小，波長的稍許偏移引起吸光度的測量偏差較小，可得到較好的測定精細度。但在測量高濃度組分時，寧可選用靈敏度低一些的吸收峰波長較小作為測量波長，以保證校正曲線有足夠的線性圍。如果max所處吸收峰太鋒利，那么在滿足分析靈敏度前提下，可選用靈敏度低一些的波長進展測量，以減少比耳定律的偏差。 2.適宜吸光度圍的選擇 任何光度計都有一定的測量誤差，這是由于測量過程中光源的不穩(wěn)定、讀數(shù)的不準確或?qū)嶒灄l件的偶然變動等因素造成的。由于吸收定律中透射比T與濃度C是負對數(shù)的關(guān)系，從負對數(shù)的關(guān)系曲線可以看出，一樣的透射比讀數(shù)誤

4、差在不同的濃度圍中，所引起的濃度相對誤差不同，當濃度較大或濃度較小時，相對誤差都比擬大。因此，要選擇適宜的吸光度圍進展測量，以降低測定結(jié)果的相對誤差。 在實際工作中，可通過調(diào)節(jié)待測溶液的濃度或選用適當厚度的吸收池的方法，使測得的吸光度落在所要求的圍。 3.儀器狹縫寬度的選擇 狹縫的寬度會直接影響到測定的靈敏度和校準曲線的線性圍。狹縫寬度過大時，入射光的單色光降低，校準曲線偏離比耳定律，靈敏度降低；狹縫寬度過窄時，光強變?nèi)?，勢必要提高儀器的增益，隨之而來的是儀器噪聲增大，于測量不利。選擇狹縫寬度的方法是：測量吸光度隨狹縫寬度的變化。狹縫的寬度在一個圍，吸光度是不變的，當狹縫寬度大到某一程度時，吸

5、光度開場減小。因此，在不減小吸光度時的最大狹縫寬度，即是所欲選取的適宜的狹縫寬度。4.3紫外-可見分光光度計的檢定4.3.1 波長示值誤差與重復性儀器波長示值誤差指標為±0.3nm，波長重復性指標為0.2nm，您可以用儀器氘燈的兩條特征譜線檢驗，具體檢驗方法如下：確認儀器光譜寬帶為“2.0nm。開機初始化完成后，按數(shù)字5鍵進入系統(tǒng)應(yīng)用界面， 在系統(tǒng)應(yīng)用界面中按數(shù)字鍵2強狹縫設(shè)定為“2.0nm。在系統(tǒng)應(yīng)用界面按RETURN鍵返回儀器主界面，按2鍵選擇光譜測量功能。按F1鍵選擇參數(shù)設(shè)定功能，按相應(yīng)數(shù)字鍵設(shè)定采樣間隔為0.2nm、掃描速度為 中速、波長圍為660nm480nm、縱坐標圍0-

6、100、測光方式Es、光源選擇氘燈按RETURN鍵返回光譜掃描界面。按START/STOP鍵并輸入增益值為6，按ENTER鍵確認，開場掃描。掃描完畢后，按F2鍵并輸入閾值1100后，按ENTER鍵進展峰值檢出如果檢出峰波長為0.000nm，那么需要按鍵返回，然后重新按F2鍵輸入比前次輸入小的數(shù)值作為閾值，重新進展峰值檢出按F4鍵打印輸出 樣品池中不放任何遮擋物，以空氣為空白進展測量，用波長掃描功能測量全波段的吸光度值，其具體測量方法如下首先確認儀器光譜寬帶為2.0nm在儀器主界面俺2鍵選擇光譜測量模式按F1鍵進入?yún)?shù)設(shè)置界面，按相應(yīng)的數(shù)字鍵設(shè)置測光方式Abs、采樣間隔為1nm、掃描速度為中速、

7、波長圍為1100190nm、縱坐標圍為-0.01Abs.0.01Abs按RETURN鍵，返回光譜測量主界面，按AUTOZERO鍵進展基線校正。按START/STOP鍵進展掃描按F4鍵打印輸出。 讀取曲線的吸光度值，在1090nm200nm波長，測量掃描圖譜中起始點與最大偏移之差即為儀器的基線平直度。分光光度法允差圍波長nm吸收強度吸收系數(shù)允差圍235最小124.5123.0126.0257最大144.0142.8146.2313最小48.6247.050.3350最大106.6105.5108.5 可按下表所列的試劑和濃度，配制成水溶液，置1cm石英池中，在規(guī)定的波長處測定透光率，應(yīng)符合下表中

8、規(guī)定。試劑濃度%，g/ml測定用波長nm透光率%碘化鈉1.00220<0.8亞硝酸鈉5.00340<0.8合規(guī)定。4.4.1計算分光光度法按?中國藥典?規(guī)定，計算分光光度法一般不宜用于含量測定，對于少數(shù)采用計算分光光度法的品種，應(yīng)嚴格按各品種項下規(guī)定的方法進展。用本法時應(yīng)注意：有一些吸光度是在待測成分吸收曲線的上升或下降陡坡處測定，影響精度的因素較多，故應(yīng)仔細操作，盡量使供試品和對照品的測定條件一致。假設(shè)該品種不用對照品，如維生素A測定，那么應(yīng)在測定前對儀器作仔細的校正和檢定。 供試品本身在紫外-可見光區(qū)沒有強吸收，或在紫外光區(qū)雖有吸收但為了防止干擾或提高靈敏度，參加適當?shù)娘@色劑，

9、使反響產(chǎn)物的最大吸收移至可見光區(qū)。用比色法測定時，由于顯色是影響顯色深淺的因素較多，應(yīng)取供試品與對照品或標準品同時操作。除另有規(guī)定外，比色法所用的空白系指用同體積的溶劑代替對照品或供試品溶液，然后依次參加等量的相應(yīng)試劑，并用同樣方法處理。當吸光度和濃度關(guān)系不呈良好線性時，應(yīng)取數(shù)份梯度量對照品溶液，用溶劑補充至同一體積，顯色后測定各份溶液的吸光度，然后以吸光度與相應(yīng)的濃度繪制標準曲線，再根據(jù)供試品的吸光度在標準曲線上查得其相應(yīng)的濃度，并求出其含量。4.5 考前須知4.5.1 試驗中所用的量瓶和移液管均應(yīng)經(jīng)檢定校正、洗凈后使用。4.5.2 使用的石英吸收池必須干凈。當吸收池中裝入同一溶劑，在規(guī)定波

10、長測定各吸收池的透光率，如透光率相差在0.3%以下者可配對使用，否那么必須加以校正。4.5.3 取吸收池時，手指拿毛玻璃面的兩側(cè)。裝樣品溶液的體積以池體積的4/5為度，使用揮發(fā)性溶液時應(yīng)加蓋，透光面要用擦鏡紙由上而下擦拭干凈，檢視應(yīng)無殘留溶劑，為防止溶劑揮發(fā)后溶質(zhì)殘留在池子的透光面，可先用醮有空白溶劑的擦鏡紙擦拭，然后再用干擦鏡紙拭凈。吸收池放人樣品室時應(yīng)注意每次放入方向一樣。使用后用溶劑及水沖洗干凈，晾干，防塵保存，吸收池如污染不易洗凈時可用硫酸發(fā)煙硝酸3:1 v/v混合液稍加浸泡后，洗凈備用。如用鉻酸鉀清潔液清洗時，吸收池不宜在清潔液中長時間浸泡，否那么清潔液中的鉻酸鉀結(jié)晶會損壞吸收池的光

11、學外表，并應(yīng)充分用水沖洗，以防鉻酸鉀吸附于吸收池外表。4.5.4 含有雜原子的有機溶劑，通常均具有很強的末瑞吸收。因此，當作溶劑使用時，它們的圍均不能小于截止使用波長。例如甲醇、乙醇的截止使用波長為205nm。另外，當溶劑不純時，也可能增加干擾吸收。因此，在檢查所用的溶劑在供試品所用的波長附近是否符合要求，即將溶劑置1cm石英吸收池中，以空氣為空白即空白光路中不置任何物質(zhì)測定吸光度，溶劑和吸收池的吸光度應(yīng)符合下表規(guī)定。以空氣為空白測定溶劑在不同波長處的吸光度的規(guī)定波長圍nm220240241250251300300以上吸光度0.400.200.100.05每次測定時應(yīng)采用同一廠牌批號，混合均勻

12、的同批溶劑。4.5.5 稱量應(yīng)按藥典規(guī)定要求。配制測定溶液時稀釋轉(zhuǎn)移次數(shù)應(yīng)盡可能少，轉(zhuǎn)移稀釋時所取容積一般應(yīng)不少于5ml。含量測定時供試品應(yīng)稱取2份，如為對照品比擬法，對照品一般也應(yīng)稱取2份。吸收系數(shù)檢查也應(yīng)稱取供試品2份，平行操作，每份結(jié)果對平均值的偏差應(yīng)在±0.5%以。作鑒別或檢查可取樣品1份。4.5.6 供試品溶液的濃度，除各品種項下已有注明者外，供試品溶液的吸光度以在0.30.7之間為宜，吸光度讀數(shù)在此圍誤差較小，并應(yīng)結(jié)合所用儀器吸光度線性圍，配制適宜的讀數(shù)濃度。4.5.7 選用儀器的狹縫譜帶寬度應(yīng)小于供試品吸收帶半高寬的10%，否那么測得的吸光度值會偏低，或以減小狹縫寬度時

13、供試品溶液的吸光度不再增加為準，對于中國藥典紫外分光光法測定的大局部品種，可以使用2nm縫寬，但當吸收帶的半高寬小于20nm時，那么應(yīng)使用較窄的狹縫，例如青霉素鉀及鈉的吸光度檢查需用1nm縫寬或更窄，否那么其264nm的吸光度會偏低。4.5.8 測定時除另有規(guī)定者外，應(yīng)在規(guī)定的吸收峰±2nm 處，再測幾點的吸光度，以核對供試品的吸收峰位置是否正確，并以吸光度最大的波長作為測定波長，除另有規(guī)定外吸光度最大波長應(yīng)在該品種項下規(guī)定的波長±2nm以，否那么應(yīng)考慮試樣的同一性、純度以及儀器波長的準確度。4.5.9 用于制劑含量測定時，應(yīng)注意供試液與對照液的pH值是否一致，如pH值對吸

14、收有影響，那么應(yīng)調(diào)溶液的pH值一致后再測定吸光度。4.6 結(jié)果計算4.6.1 對照品比擬法可根據(jù)供試品溶液及對照品溶液的吸光度與對照品溶液的濃度以正比法算出供試品溶液的濃度，再計算含量。C樣品=A樣品×C對照/A對照式中 A為吸光度值；C為測試液濃度以mg/ml 計。4.6.2 吸收系數(shù)法規(guī)定的吸收系數(shù)，系指，即在指定波長時，光路長度為1cm，試樣濃度換算為1%g/ml時的吸光度值，故應(yīng)先求被測樣品的值，再與規(guī)定的值比擬，可計算出供試樣品的含量。樣品= 式中 A 為供試品溶液測得的吸光度值；C 為供試品溶液的百分濃度，即100ml中所含溶質(zhì)的克數(shù)g/ml；L 為吸收池的光路長度cm。

15、供試品的含量%=×100式中樣品為根據(jù)前式計算出的供試品吸收系數(shù)；標準為藥典或藥品標準中規(guī)定的吸收系數(shù)。4.7 吸收系數(shù)測定法本法主要用于新品種的吸收系數(shù)測定。4.7.1 測定方法取精制樣品精細稱取一定量，使樣品溶液配成吸光度讀數(shù)在0.60.8之間，置1cm吸收池中，在規(guī)定波長處按5.5.8項的規(guī)定測出吸光度讀數(shù)，然后再用同批溶劑將溶液稀釋1倍，使吸光度在0.30.4之間，再按上述方法測定。樣品應(yīng)同時測定2份，同一臺儀器測定的2份結(jié)果，對平均值的偏差應(yīng)不超過±0.3%，否那么應(yīng)重新測定。測定時，先按儀器正常靈敏度測試，然后再減小狹縫測定，直到減小狹縫吸光值不增加為止，取吸光

16、度不改變的數(shù)據(jù)。再用4臺不同型號的儀器復測。吸收系數(shù)可根據(jù)朗伯-比爾定律求算，以下例說明：某化合物的分子量為287，用乙醇配成濃度為0.0030%的溶液，在波長297nm處，用1cm石英池，測得吸光度為0.6139，求值及摩爾吸收系數(shù)值。297nm=A/CL=205297nm=A/CL=58744.8 開機 開機前翻開儀器樣品室蓋，觀察確認樣品室無擋光物。 開機后，儀器顯示初始化工作界面，儀器將進展自檢并初始化整個過程需要約2min左右，如果初始化正常完畢，系統(tǒng)進入儀器的操作界面，如下列圖所示：系統(tǒng)初始化 1. 存 檢 查： 正常 2.樣品池電機復位： 正常 3.波 長電機復位： 正常 4.狹

17、 縫電機復位： 正常 5.濾光片電機復位： 正常 6.光 源電機復位： 正常 7.鎢 燈 檢查： 8.氘 燈 檢查： 9.波 長 檢查： 10.參數(shù) 初始化： 系統(tǒng)忙儀器初始化完成后，您便可以開場對儀器進展操作。儀器通常需要經(jīng)過60min的預熱時間使光源到達穩(wěn)定，為保證測量數(shù)據(jù)的準確性，盡量不要在儀器預熱時進展測量。5.0 光度測量在此功能模塊下，可測定樣品在確定波長下的吸光度或透過率，完成K系數(shù)運算和測量數(shù)據(jù)打印等功能。5.1 進入光度測量模式 在儀器主界面下根據(jù)提示按1鍵選擇光度測量方式，儀器進入光度測量模式，顯示界面變?yōu)楣舛葴y量主界面，按RETURN鍵返回儀器主界面，如下圖：退出光度測量

18、時，系統(tǒng)在信息提示區(qū)顯示“數(shù)據(jù)將喪失，繼續(xù)？是：ENTER，否CLE 的信息提示您對當前已測得的數(shù)據(jù)進展操作。測試按ENTER鍵，系統(tǒng)將返回儀器主界面，所有已測得的數(shù)據(jù)將喪失。按CANCLE鍵，系統(tǒng)退回到光度測量主界面，提示信息變?yōu)椤罢埌碨TART鍵測量，您可以繼續(xù)光度測量的操作。下面根據(jù)圖3-2給出了光度測量主界面的具體介紹：此處“光度測量表示目前為光度測量模式；“990nm為當前的工作波長；“0.000Abs表示目前實時測得的吸光度值。此局部為工作區(qū)，以表格的形式顯示具體測量的數(shù)據(jù)，每屏可顯示最多9個測量數(shù)據(jù)值，超過那么會自動分屏顯示。此局部為信息提示區(qū)，當前的信息提示您按START/ST

19、OP鍵開場測量。此處顯示當前時間，圖中顯示的時間為4月15日8時34分。此局部為功能鍵提示區(qū)，顯示F1F4鍵的功能。具體按鍵功能如下：F1進入?yún)?shù)設(shè)定界面；F2刪除測量數(shù)據(jù)，刷新屏幕；F3設(shè)置樣品池狀態(tài)；F4打印測量結(jié)果。另外在此畫面下，按鍵盤的操作鍵GOTOWL可進展工作波長的設(shè)置；按AUTOZERO鍵可完成當前波長下自動校零的功能。5.2 參數(shù)設(shè)置 在光度測量主界面下，按F1鍵進入光度測量參數(shù)設(shè)置界面，按RETURN鍵返回到光度測量主界面，如下圖：在該界面下可設(shè)置測量的光度方式，測量波長和K系數(shù)運算的系數(shù)，根據(jù)界面下方的提示按相應(yīng)的數(shù)字進展各項參數(shù)的設(shè)置。所有參數(shù)設(shè)置完成后，按RETURN

20、鍵返回到光度測量主界面。5.3 設(shè)置光度方式在光度測量模式下，儀器提供Abs吸光度、T%透光率和R%反射率兩種光度方式供您選擇。 在光度測量參數(shù)設(shè)置界面按1鍵設(shè)置光度方式，每按一次1鍵，Abs、T%和R%交替變換，如下圖。5.4 設(shè)置測量波長 在光度測量參數(shù)設(shè)置界面按2鍵可進展測量波長設(shè)置，如下圖：設(shè)置波長界面的底部，系統(tǒng)提示您輸入您想要設(shè)置的測量波長，用數(shù)字鍵09和“.輸入您想要設(shè)置的測量波長，如果輸入錯誤按CANCEL鍵可清楚當前的輸入，輸入完成按ENTER鍵確認后，系統(tǒng)提示“系統(tǒng)忙，此時系統(tǒng)正在設(shè)定您所設(shè)置的波長，完成設(shè)定后系統(tǒng)退出測量波長設(shè)定，返回到光度測量參數(shù)設(shè)置界面。您也可以在下列

21、圖所示的光度測量主界面下，按GOTOWL鍵設(shè)置光度測量的工作波長。在光度測量界面的底部，系統(tǒng)提示您輸入您想要設(shè)置的測量波長，用數(shù)字鍵09和“.輸入您想要設(shè)置的測量波長，如果輸入錯誤按CANCEL鍵可清楚當前的輸入，輸入完成按ENTER鍵確認后，系統(tǒng)提示“系統(tǒng)忙，此時系統(tǒng)正在設(shè)定您設(shè)置的波長，完成設(shè)定后系統(tǒng)退出測量波長設(shè)置界面，返回到光度測量主界面；不輸入數(shù)據(jù)按RETURN鍵可直接退出測量波長設(shè)定界面，返回到光度測量主界面。5.5 輸入K系數(shù)值在光度測量參數(shù)設(shè)置界面按3鍵可進展光度測量K系數(shù)的設(shè)置，如下圖：設(shè)置K系數(shù)界面的底部，系統(tǒng)提示您輸入你您想要設(shè)置的K系數(shù)，用數(shù)字鍵09、“.和“輸入K系數(shù)

22、，如果輸入錯誤按CANCEL鍵可去除當前的輸入，輸入完后按ENTER鍵確認，系統(tǒng)設(shè)定完成輸入的K系數(shù)后退出K系數(shù)設(shè)置界面，返回到光度測量參數(shù)設(shè)置界面。5.6暗電流校正進展暗電流校正可以消除儀器局部噪聲，保證樣品的測量結(jié)果更為準確。一般在儀器環(huán)境發(fā)生變化時，您必須進展儀器的暗電流校正，所謂的環(huán)境變化主要是指：環(huán)境溫度變化較大時、安裝位置改變、做高吸收度樣品時等。建議您在啟動儀器預熱后，在進展測量前進展暗電流校正，保證數(shù)據(jù)結(jié)果的準確性。暗電流校正的具體操作如下：在光度測量參數(shù)設(shè)置界面按4鍵進展暗電流校正，此時在提示區(qū)顯示“系統(tǒng)忙，大約10s后提示信息變?yōu)椤罢埌磾?shù)字鍵選擇，此時表示暗電流校正完成，如

23、上圖所示5.7 試樣池設(shè)置在試樣池設(shè)置界面下，您可以選擇您所配置的試樣池包括：固定池、五聯(lián)池和八聯(lián)池。如果所配置的試樣池為八聯(lián)池或者五聯(lián)池，您還可以設(shè)置使用的試樣池數(shù)，并進展移動試樣池，試樣池復位等操作。在下列圖所示的光度測量主界面下，按F3鍵進入試樣池設(shè)置界面，如果所示在試樣池設(shè)置界面下，根據(jù)提示按相應(yīng)的數(shù)字鍵進展您所需要的設(shè)置，完成設(shè)置后，按RETURN鍵返回到光度測量主界面。5.8選擇試樣池類型 在試樣池設(shè)置界面下按1鍵進展試樣池類型的設(shè)置。系統(tǒng)提供的試樣池類型有固定池架、五聯(lián)池架和八聯(lián)池架三個選項，每按一次1鍵，系統(tǒng)在固定池、五聯(lián)池和八聯(lián)池之間交替轉(zhuǎn)換，如下圖。請根據(jù)自己實際所配置的試

24、樣池類型，選擇適合您的試樣池類型。5.9 設(shè)定使用試樣池數(shù)此項參數(shù)僅對五聯(lián)池或八聯(lián)池有效。在試樣控制界面下，按2鍵進展使用樣品池數(shù)設(shè)置，如下圖：在試樣池設(shè)置界面的底部，系統(tǒng)提示您輸入您想要設(shè)置的使用試樣池數(shù)，用數(shù)字鍵09輸入使用試樣池數(shù)，如果輸入錯誤按CANCEL鍵可以清楚當前的輸入，輸入完后按ENTER鍵確認，系統(tǒng)設(shè)定完成輸入的使用池數(shù)后返回到試樣池參數(shù)設(shè)置界面；不輸入數(shù)據(jù)按RETURN鍵可直接返回到試樣池參數(shù)設(shè)置界面。在測量過程中，系統(tǒng)根據(jù)該項設(shè)置對指定書目的試樣池逐一進展測量，序號以n-1,n-2,標識，n標識第n次測量，后面的數(shù)字表示樣品池序號。如果使用池數(shù)為1個，或者將多樣池修改樣池

25、數(shù)為1，那么重新回到主界面進展測量后，已測得數(shù)據(jù)按照1-1,2-1,3-1,4-1.順序編號。6.0 一號池空白校正此項參數(shù)用來設(shè)定是否要進展一號池空白校正僅對五聯(lián)池和八聯(lián)池有效，此項設(shè)置有“否和“是兩個選項，每按一次3鍵，選項在“否和“是之間交替切換，如下圖?？瞻仔Ｕ囊饬x是把位于1號試樣池的試樣作為空白，對其他試樣池除一號樣品池外的其他設(shè)定的樣品池進展測定。在測量開場時，系統(tǒng)將以1號樣品池的試樣作為空白進展校零。6.1 移動試樣池此項參數(shù)僅對五聯(lián)池和八聯(lián)池有效。在試樣池設(shè)置界面下，按數(shù)字鍵4將移動試樣池架到下一試樣池。 此選項后面的數(shù)值標示當前在光路上的試樣池編號，每按一次4鍵，試樣池架將

26、向下移動一個單位，此選項后面的數(shù)值也相應(yīng)的加1，直到樣品池編號的最大值后，樣品池復位到1號樣品池，以此循環(huán)。樣品池的最大編號五聯(lián)池為5，八聯(lián)池為8.6.2 試樣池復位此項參數(shù)僅對五聯(lián)池和八聯(lián)池有效。不管當前光路上是幾號樣品池，在試樣池設(shè)置界面下按數(shù)字鍵5將試樣池架復位，使得1號樣品池回到光路上。6.3 單池測樣在試樣池類型選擇為八聯(lián)池或者五聯(lián)池時，當使用試樣池數(shù)設(shè)置為1,1號池空白校正選項為“否時，可用<移動試樣池>功能選擇八個試樣池或五個試樣池中的任一個作為測量樣池，隨后的測量僅對選中的樣池操作。6.4 自動校零校100%在光度測量設(shè)置界面下，ZERO鍵可對當前工作波長進展零吸光

27、度透過率100%校正。在校正前，應(yīng)先放入空白樣品如：溶解待測樣品的溶劑等，然后進展校正操作。當使用單樣品池進展測量時，單樣品池測量包括使用單樣品池架和多樣品池的單池測樣，關(guān)于多樣品池的單池測樣請參考<單池測樣>。測量時首先參考<參數(shù)設(shè)置>和<試樣池設(shè)置>設(shè)置好各種測量參數(shù)和試樣池參數(shù)主要是選擇樣品池類型和多樣品的單池設(shè)置，然后參考<自動校零>進展校零操作；校零后將裝好樣品的比色皿放入樣品池，按START/STOP鍵，重復測量一次樣品，測量的結(jié)果將顯示在界面上，如下圖。測量結(jié)果的表格中“No.表示測量數(shù)據(jù)的編號，圖中表示第2次測量的第1號樣品池的結(jié)

28、果如果是多樣品的單池測量，編號“1表示的是當前使用的樣品池；“Abs表示測得樣品的吸光度值；“K*Abs表示吸光度值經(jīng)過K系數(shù)運算后的值，圖中測量時的K系數(shù)的值為10.6.5 當使用多樣品池進展測量時只有配置多樣品池架如：八聯(lián)池、五聯(lián)池等后才能進展多樣品池測量，您可以根據(jù)實際需要選擇您需要使用的樣品池個數(shù)。使用多樣品池測量可以大大的提高您的工作效率。使用多樣品池測量時的測量結(jié)果如下圖，表格中“No.表示測量數(shù)據(jù)的編號，圖中“2-3表示第2次測量的第3號樣品池的結(jié)果；“Abs表示測得樣品的吸光度值；“K*Abs表示吸光度值經(jīng)過K系數(shù)運算后的值，圖中測量時的K系數(shù)的值為10.圖中表示的是使用3個樣

29、品池進展2次測量的結(jié)果。測量結(jié)果查閱，如果測量結(jié)果超過了顯示器顯示的圍一屏最多顯示9個，您可以用方向鍵逐行查閱測量結(jié)果。測量結(jié)果的刪除 測量結(jié)果完畢后，您可以按F2鍵清楚測量數(shù)據(jù)，此時系統(tǒng)提示“數(shù)據(jù)將喪失，繼續(xù)？是：，否根據(jù)提示按鍵確認，系統(tǒng)將去除所有測量數(shù)據(jù)；按CANCEL取消刪除操作，系統(tǒng)提示變回“請按START鍵測量，您可以繼續(xù)其他操作，如果所示請您在刪除測量結(jié)果前進展數(shù)據(jù)的打印輸出，以防止數(shù)據(jù)喪失造成損失。7.0 光譜測量在此功能模塊下，可對樣品在一段確定波長的吸光度Abs、透過率T%和樣品光束或者燈能量Es和參比光束能量Er進展測量及打印。7.1 進入光譜掃描測量模式在儀器主界面下根

30、據(jù)提示按2鍵選擇光譜測量方式，儀器進入光譜測量模式，顯示界面變?yōu)楣庾V測量主界面，按RETURN鍵返回儀器主界面，如下圖：退出光譜測量時，系統(tǒng)在信息提示區(qū)顯示“數(shù)據(jù)將喪失，繼續(xù)？是：ENTER，否：CLE的信息，提示您對當前已測得的數(shù)據(jù)進展操作。此時按ENTER鍵，系統(tǒng)將返回儀器主界面，所有已測得的數(shù)據(jù)將喪失。按CANCEL鍵，系統(tǒng)退回到光譜測量主界面，提示信息變?yōu)椤罢埌碨TART鍵測量，您可以繼續(xù)光譜測量的操作下列圖給出了光譜測量主界面的具體介紹：此處“光譜測量表示目前為光譜測量模式；“990nm為當前的工作波長；“0.000Abs表示目前實時測得的吸光度值。此局部為工作區(qū)，以平面坐標圖的形式

31、顯示測得的譜線。圖中的橫坐標為波長值，縱坐標為吸光度值A(chǔ)bs根據(jù)光度方式的不同，縱坐標還可以為透過率T%和能量值Es、Er。此局部為信息提示區(qū)，當前的信息提示區(qū)您按START/STOP鍵開場測量此處顯示當前時間，圖中顯示的時間為4月15日8時34分此局部為功能鍵提示區(qū)，顯示F1F4鍵的功能。具體按鍵如上圖所示。7.2 參數(shù)設(shè)置 在光譜測量主界面下，按F1鍵進入光譜測量參數(shù)設(shè)置界面，按RETURN鍵返回到光譜測量主界面，如圖在該界面下可設(shè)置光度方式、掃描速度、采樣間隔、波長圍、縱坐標圍、光源選擇、等。根據(jù)界面下方的提示按相應(yīng)的數(shù)字進展各項參數(shù)的設(shè)置。7.3 設(shè)置光度方式在光譜測量模式下，儀器提供

32、Abs吸光度、T%透過率、R%反射率、Es樣品光路能量和Er參比光路能量五中光度方式供您選擇。 在光度測量參數(shù)設(shè)置界面下按1鍵設(shè)置光度方式，每按一次1鍵，五種光度方式之間交替轉(zhuǎn)換，如下圖。7.4 設(shè)定掃描速度儀器提供快速，中速，慢速三種掃描速度。如果是在寬的波長圍簡單的了解樣品大概什么地方有吸收峰，峰值為多少時，可以選擇快速掃描；如果需要在較小的波長圍準確讀取峰的位置和峰值，選擇慢速掃描，可以保證結(jié)果的準確可靠；中速掃描那么是介于二者之間。 在光譜測量參數(shù)設(shè)置界面下按2鍵可進展掃描速度的設(shè)置。每按一次2鍵，中速、快速和慢速之間交替切換，如下圖7.5 設(shè)置采樣間隔儀器提供的采樣間隔有0.1nm、

33、0.2nm、0.5nm、1.0nm、2.0nm、5.0nm六種，采用的采樣間隔越小，儀器所繪制的掃描曲線也越準確，但同時測量所花的時間也會越長。 在光譜測量參數(shù)設(shè)置界面下按3鍵設(shè)定采樣間隔，每按一次3鍵，采樣間隔的值在0.1nm、0.2nm、0.5nm、1.0nm、2.0nm、5.0nm之間交替切換，如下列圖所示7.6 設(shè)置測量波長圍在光譜測量參數(shù)設(shè)置界面下按4鍵可進展測量波長圍的設(shè)置，如下列圖所示7.7 設(shè)置測光值坐標圍 在光譜測量參數(shù)設(shè)置界面下5鍵可進展縱坐標圍的設(shè)置，如圖7.8 光源選擇儀器允許您自己選擇光源進展光譜測量，但這僅限于ES樣品光能量和Er(參比能量這兩種光度方式。 要進展光

34、源選擇，首先確定您選擇的光度方式為Es或Er。在光譜測量參數(shù)設(shè)置界面下按6鍵選擇光源，每按一次6光源在“鎢燈和“氘燈之間交替轉(zhuǎn)換，如下圖暗電流校正，具體操作如下:7.9 測量采用光譜測量的模式進展測量時首先參考<參數(shù)設(shè)置>設(shè)置好各種測量參數(shù)，然后參考<基線校正>進展基線校正；最后將裝好樣品的比色皿放入樣品池當前光路上的樣品池，按START/STOP鍵開場測量，系統(tǒng)將在您設(shè)置的波長圍對樣品進展掃描，此時系統(tǒng)提示“正在進展光譜掃描，您可以動態(tài)的觀察到掃描曲線的生成。當系統(tǒng)信息提示變回為“請按START鍵測量時，表示系統(tǒng)完成測量。測量完成后的結(jié)果如圖8.0 峰值檢出測量完成后

35、，在光譜測量主界面下，按F2鍵可對測量得到的譜線進展峰值檢出操作，如下圖在光譜測量的界面底部，系統(tǒng)提示您輸入閾值，用數(shù)字鍵09和“.輸入閾值，如果輸入錯誤按CANCEL鍵可清楚當前的輸入，輸入完后按ENTER鍵確認，系統(tǒng)設(shè)定完成輸入的閾值后將進展峰值檢出并將結(jié)果顯示在界面上；不輸入數(shù)據(jù)按RETURN鍵可直接退出檢出操作，系統(tǒng)將返回到光譜測量界面。系統(tǒng)承受的閾值的輸入值為整數(shù)或保存小數(shù)點后一位的小數(shù)，圍為0.1100.0；輸入超出給定圍時，系統(tǒng)將判定輸入的數(shù)值不符合要求，此時系統(tǒng)自動去除已輸入的數(shù)據(jù)，您需要重新輸入。輸入閾值后，系統(tǒng)即對當前譜圖進展峰值檢出運算，將結(jié)果顯示在畫面上，在檢出的峰值出

36、標示箭頭，在界面下方顯示該峰谷點的波長值和測光值，如下圖：8.1 試樣池設(shè)置在光譜測量主界面下，按F3鍵進入試樣池設(shè)置界面，按RETURN鍵返回到光譜測量主界面，如下圖：該界面下的選項使用與光度測量的試樣池設(shè)置界面下的使用一樣，您可以參考光度測量一章的<試樣池設(shè)置>進展操作。9.0 定量測量利用此功能，您可以對樣品進展單波長的定量測定，繪制標準曲線等。定量方法有系數(shù)法和標準曲線法。9.1 進入定量測量模式在儀器主界面下根據(jù)提示按3鍵選擇定量測量方式，儀器進入定量測量模式，顯示界面變?yōu)槎繙y量主界面，按RETURN鍵返回儀器主界面，如下圖：退出定量測量時，系統(tǒng)在信息提示區(qū)顯示“數(shù)據(jù)將

37、喪失，繼續(xù)？是:ENTER,否：CLE的信息提示您對當前已測得的數(shù)據(jù)進展操作。此時按ENTER鍵，系統(tǒng)將返回儀器主界面，所有已測得的數(shù)據(jù)將喪失。按CANCEL鍵，系統(tǒng)退回到定量測量主界面，提示信息變?yōu)椤罢埌碨TART鍵測量，您可以繼續(xù)定量測量的操作。下面根據(jù)下列圖給出了定量測量主界面的具體介紹：此處“定量測量表示目前為定量測量模式；“990nm為當前的工作波長；“0.000Abs表示目前實時測得的吸光度值。此局部為工作區(qū)，以表格的形式顯示具體測量的數(shù)據(jù)，每屏可顯示最多9個測量數(shù)據(jù)值，超過那么會自動分屏顯示。此局部為信息提示區(qū)，當前的信息提示您按START/STOP鍵開場測量。此處顯示當前時間，

38、圖中顯示的時間為4月15日8時34分。此局部為功能鍵提示區(qū)，顯示F1F4鍵功能。具體按鍵功能如下：F1進入?yún)?shù)設(shè)定界面；F2刪除測量數(shù)據(jù)，刷新屏幕；F3設(shè)置樣品池狀態(tài)；F4打印測量結(jié)果。另外在此畫面下，按鍵盤的操作鍵GOTOWL可進展工作波長的設(shè)置；按ZERO鍵可完成當前工作波長下自動校零的功能。9.2 參數(shù)設(shè)置在定量測量主界面下，按F1鍵進入定量測量參數(shù)設(shè)置界面，按RETURN鍵返回到定量測量主界面，如下圖：在該界面下可設(shè)置定量測量的工作模式、測量波長和濃度單位，根據(jù)界面下方的提示按相應(yīng)的數(shù)字進展各項參數(shù)的設(shè)置。所有參數(shù)設(shè)置完成后，按RETURN鍵返回到光度測量主界面。9.3 設(shè)置定量測量的

39、方法本儀器共提供“系數(shù)法和“標樣法兩種定量測量的方法。兩種測量方法建立工作曲線的步驟請參考<建立工作曲線>。 在定量測量參數(shù)設(shè)置界面按1鍵設(shè)置工作模式即定量測量的方法，每按一次1鍵，“系數(shù)法和“標樣法交替切換，如下列圖9.4 設(shè)置測量波長 在定量測量參數(shù)設(shè)置界面按2鍵可進展測量波長設(shè)置，如下圖：設(shè)置測量波長界面的底部，系統(tǒng)提示您輸入您想要設(shè)置的測量波長，可數(shù)字鍵09和“.輸入您想要設(shè)置的測量波長，如果輸入錯誤按CANCEL鍵可去除當前的輸入，輸入完成按ENTER鍵確認后，系統(tǒng)提示“系統(tǒng)忙，此時系統(tǒng)正在設(shè)定您所設(shè)置的波長，完成設(shè)定后系統(tǒng)退出測量波長設(shè)置界面，返回到定量測量參數(shù)設(shè)置界面

40、；不輸入數(shù)據(jù)按RETURN鍵可直接退出測量波長設(shè)定，返回到定量測量參數(shù)設(shè)置界面。您也可以在下列圖界面中，按GOTOWL鍵設(shè)置定量測量的工作波長。在定量測量界面的底部，系統(tǒng)提示您輸入您想要設(shè)置的測量波長，用數(shù)字鍵09和“.輸入您想要設(shè)置的測量波長，如果輸入錯誤按CANCEL鍵可去除當前的輸入，輸入完成按ENTER鍵確認后，系統(tǒng)提示“系統(tǒng)忙，此時系統(tǒng)正在設(shè)定您所設(shè)置的波長，完成設(shè)定后系統(tǒng)退出測量波長設(shè)置界面，返回到定量測量主界面；不輸入數(shù)據(jù)按RETURN鍵可直接退出測量波長設(shè)定，返回到定量測量主界面。9.5 設(shè)置濃度單位 儀器系統(tǒng)提供的濃度單位共有“none、“mg/L、“%、“mol/mL、“g

41、/L、“g/L、“mg/mL、“ng/mL、“mol/L等9種選擇。 在定量測量參數(shù)設(shè)置界面按3鍵可進展?jié)舛葐挝坏脑O(shè)置，每按一次3鍵，濃度單位在：“none、“mg/L、“%、“mol/mL、“g/L、“g/L、“mg/mL、“ng/mL、“mol/L之間交替切換，如下圖。9.6 系數(shù)法系數(shù)法適用于工作曲線的情況下對樣品進展定量測量。采用系數(shù)法您只需要輸入工作曲線的系數(shù)和截距就能完成工作曲線的建立。 首先，確定在定量測量參數(shù)設(shè)置界面下您所選擇的工作模式為“系數(shù)法；在定量測量參數(shù)設(shè)置界面下按F1鍵進入系數(shù)法工作曲線參數(shù)設(shè)置界面，在此界面下按RETURN鍵返回到定量測量參數(shù)設(shè)置界面，如下列圖在該界面下顯示的工作曲線的表達式為“Conc=K*Abs+B，根據(jù)界面下方的提示按1和2鍵分別對公式中的斜率K和截距B的置進展設(shè)置。設(shè)定工作曲線的斜率在系數(shù)法工作曲線參數(shù)設(shè)置界面下按1鍵可對斜率K進展設(shè)置，如圖9.7 標樣法標樣法是測量出濃度