生物化學(xué)與分子生物學(xué)部分章節(jié)重點(diǎn)歸納

1、第二十二章 基因表達(dá)與細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的偶聯(lián)機(jī)制一、論句：1、蛋白激酶/蛋白磷酸酶、G蛋白是信號(hào)通路開關(guān)分子。2、磷酸化可能提高活性也可能降低活性3、G蛋白/小G蛋白功能與GTP/GDP結(jié)合狀態(tài)有關(guān)。4、G蛋白偶聯(lián)受體通過(guò)G蛋白-第二信使-靶分子發(fā)揮作用。5、酶偶聯(lián)受體通過(guò)蛋白激激酶-蛋白激酶-靶分子發(fā)揮作用。二、名解1. 受體：位于細(xì)胞膜上的或細(xì)胞內(nèi)能特異識(shí)別配體并與之結(jié)合，進(jìn)而引起生物學(xué)效應(yīng)的特殊蛋白質(zhì)，個(gè)別是糖脂。膜受體絕大多數(shù)是跨膜糖蛋白，其胞外部分負(fù)責(zé)結(jié)合配體，細(xì)胞內(nèi)部分負(fù)責(zé)信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)；胞內(nèi)受體（包括胞漿受體和核受體）為DNA結(jié)合蛋白。2. G蛋白偶聯(lián)受體：在結(jié)構(gòu)上均為單體蛋白，有7個(gè)跨

2、膜區(qū)域，又名七跨膜受體。胞外結(jié)構(gòu)負(fù)責(zé)結(jié)合外源信號(hào)，胞內(nèi)部與異源三聚體G蛋白相結(jié)合而存在?；镜男盘?hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)方式是通過(guò)不同的G蛋白影響腺苷酸環(huán)化酶（AC）、磷脂酶C（PLC）等效應(yīng)分子活性，從而改變細(xì)胞內(nèi)第二信使的濃度，實(shí)現(xiàn)跨膜信息傳遞。3. G蛋白：即鳥苷酸結(jié)合蛋白。結(jié)合有GDP的G蛋白是非活性形式，而結(jié)合有GTP的G蛋白是活性形式。G蛋白一般固有GTP酶活性，可以水解結(jié)合的GTP是分子恢復(fù)非活性形式。異源三聚體G蛋白就是一類非常重要的轉(zhuǎn)導(dǎo)七跨膜受體信號(hào)的G蛋白。4. 小G蛋白：即分子量低的G蛋白，第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)的分子式Ras，故又稱為Ras超家族。小G蛋白具有GTP/GDP轉(zhuǎn)換、GTP酶活性等G蛋

3、白的共同特征，是重要的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子。5. 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路：細(xì)胞外信號(hào)經(jīng)由受體在細(xì)胞內(nèi)引起的有序分子變化，信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路由各種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子相互作用而形成。各種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路不是孤立的，而是有廣泛交叉聯(lián)系。信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的形成是動(dòng)態(tài)的，隨著信號(hào)的種類和強(qiáng)度不斷變化。6. 第二信使：指激素等細(xì)胞外化學(xué)信號(hào)與靶細(xì)胞受體結(jié)合后，細(xì)胞內(nèi)迅速發(fā)生濃度或分布改變的一大類小分子化合物，如cAMP、cGMP、Ca2+、IP3等。它們作用于蛋白激酶等靶分子，改變其活性，進(jìn)而改變細(xì)胞功能。上述變化實(shí)現(xiàn)了對(duì)細(xì)胞外信號(hào)的跨膜轉(zhuǎn)換和傳遞，因而這些分子被稱為第二信使。7. 蛋白激酶：是催化ATP的-磷酸基轉(zhuǎn)移至靶蛋白的特定氨基

4、酸殘基上的一大類酶。已發(fā)現(xiàn)的蛋白激酶主要有：蛋白絲氨酸/蘇氨酸/酪氨酸激酶。蛋白激酶活性受各種第二信使或蛋白分子調(diào)節(jié)。三、問(wèn)答：1、列舉在G蛋白偶聯(lián)受體的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路上可能產(chǎn)生放大作用的步驟答：受體活化G蛋白、G蛋白活化ACH和PLC等效應(yīng)分子、效應(yīng)分子催化第二信使的生成、第二信使激活靶蛋白等2、細(xì)胞膜受體分為哪幾大類？各自的結(jié)構(gòu)和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制是什么？答：可分為三類：離子通道型受體、G蛋白偶聯(lián)受體，酶活性相關(guān)受體。與離子通道型受體結(jié)合的主要是神經(jīng)遞質(zhì)，介導(dǎo)離子通道的打開和關(guān)閉，改變膜通透性，能迅速、準(zhǔn)確地傳遞神經(jīng)沖動(dòng)；G蛋白偶聯(lián)受體的胞內(nèi)段與G蛋白結(jié)合存在，通過(guò)G蛋白的活化影響AC或PLC等效

5、應(yīng)分子的活性，改變細(xì)胞內(nèi)第二信使的濃度，以實(shí)現(xiàn)跨膜信號(hào)傳遞；酶活性相關(guān)受體均屬單跨膜受體，有的自身固有酶活性，有的直接與酶結(jié)合，它們的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)依賴酶活性的變化和蛋白質(zhì)相互作用。4、列舉EGFR介導(dǎo)的EGFR-Ras-MAPK信號(hào)通路的主要構(gòu)成和作用方式答：EGF與EGFR結(jié)合、EGFR發(fā)生二聚體化、受體的激酶被激活并發(fā)生Tyr的磷酸化、募集銜接分子Grb-2、募集低分子量G蛋白調(diào)節(jié)分子SOS、SOS活化小G蛋白R(shí)as、Ras活化Raf（MAPKKK）啟動(dòng)MAPK級(jí)聯(lián)活化、MAPK進(jìn)入細(xì)胞核使特定轉(zhuǎn)錄因子磷酸化、基因表達(dá)改變。5、第二信使必須具備的特點(diǎn)答：（1）不在能量代謝途徑的中心；（2）在細(xì)

6、胞中的濃度或分布可以迅速改變；（3）作為別構(gòu)效應(yīng)劑作用于相應(yīng)的靶分子。6、主要的第二信使及作用機(jī)制答：（1）cAMP：激活PKA（2）IP3：作用于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)或肌質(zhì)網(wǎng)上的IP3受體，使得Ca2+釋放到胞質(zhì)。（3）Ca2+：可作用于肌鈣蛋白、鈣調(diào)蛋白（CaM）等。CaM又可作用于PKC（4）DAG：激活PKC7、G蛋白結(jié)構(gòu)有何特點(diǎn)？試述三種主要類型G蛋白的功能答：G蛋白是鳥苷酸結(jié)合蛋白。由、三個(gè)亞基組成。結(jié)合有GDP的G蛋白是非活性形式，而結(jié)合有GTP的G蛋白是活性形式。當(dāng)亞基與GTP結(jié)合時(shí)、脫落，從非活性轉(zhuǎn)為活性形式。G蛋白一般固有GTP酶活性，可以水解結(jié)合的GTP是分子恢復(fù)非活性形式。異源三聚體

7、G蛋白就是一類非常重要的轉(zhuǎn)導(dǎo)七跨膜受體信號(hào)的G蛋白。G蛋白功能：Gs：激活A(yù)C；Gi：抑制AC；Gp：激活PLC第二十三章 DNA操作的基本技術(shù)1、 Southern 印記可用于分析基因拷貝數(shù)的變化（用于DNA）2、 Northern 印記可用于分析基因轉(zhuǎn)錄水平的變化（用于RNA）3、 原位分子雜交技術(shù)可用于基因及其表達(dá)產(chǎn)物的定位分析（1） 原理是堿基互補(bǔ)配對(duì)（2） 標(biāo)記物是探針（DNA芯片技術(shù)是標(biāo)記樣本）4、 PCR:（1） DNA變性：是指核酸雙螺旋堿基對(duì)的氫鍵斷裂，雙鏈變成單鏈，從而使核酸的天然構(gòu)象和性質(zhì)發(fā)生改變。（2） DNA的復(fù)性：指變性DNA 在適當(dāng)條件下，二條互補(bǔ)鏈全部或部分恢復(fù)

8、到天然雙螺旋結(jié)構(gòu)的現(xiàn)象，它是變性的一種逆轉(zhuǎn)過(guò)程。（3） 退火：熱變性DNA一般經(jīng)緩慢冷卻后即可復(fù)性，此過(guò)程稱之為" 退火"（4） 原理：DNA半保留復(fù)制在不同溫度下DNA變性，復(fù)性5、 Sanger雙脫氧鏈末端終止法原理：ddNTP沒(méi)有3-OH，摻入到新生鏈中時(shí)，不能再與其他dNTP上的磷酸基團(tuán)形成3，5-磷酸二酯鍵，造成新生鏈終止。第二十八章 基因診斷與基因治療1、 基因診斷的優(yōu)點(diǎn)特點(diǎn)：（1） 高特異性；（2）高靈敏性；（3）可實(shí)現(xiàn)早期診斷；（4）應(yīng)用范圍廣2、 基因診斷的技術(shù)方法：（1）核酸分子雜交：Southern 印記雜交用于缺陷基因診斷Northern 印記雜交檢測(cè)mRNA斑點(diǎn)雜交：（直接將被測(cè)DNA或RNA固定在濾膜上，加入過(guò)量標(biāo)記核苷酸探針雜交，用于特定基因及表達(dá)產(chǎn)物的定性、定量分析，但不能鑒定分子量、且特異性不高）反向斑點(diǎn)雜交：（將探針固定于膜上，可同時(shí)檢測(cè)多種突變）原位分子雜交，主要是熒光原位分子雜交（FISH）（2） PCR（3） DNA序列分析（4） 芯片3、 基因治療：（1） 基因置換：校正缺陷基因（導(dǎo)入正?；蛑脫Q基因組內(nèi)原有的缺陷基因）（2） 基因添加：