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1、操作規(guī)程Olympus IX5廈門大學(xué)醫(yī)學(xué)院中心實(shí)驗(yàn)室黃靜茹2016年10月說明:透射光主開關(guān);汞燈高壓電源開關(guān);透射光光強(qiáng)控制鈕;濾色片架;光路選擇桿;X軸和Y軸調(diào)節(jié)鈕;物鏡轉(zhuǎn)盤;粗/微調(diào)焦旋鈕;雙目觀察筒;屈光度調(diào)節(jié)環(huán);聚光鏡高度調(diào)節(jié)鈕;聚光鏡對(duì)中旋鈕;視場(chǎng)光闌調(diào)節(jié)桿;孔徑光闌調(diào)節(jié)桿;聚光鏡轉(zhuǎn)盤;熒光光閘(SHUTTER);熒光激發(fā)塊轉(zhuǎn)盤;熒光減光閥一、開機(jī)1、 打開透射光源(白光)主開關(guān);2、 打開熒光光源(汞燈高壓電源);3、 打開電腦,進(jìn)入cellSens Standard工作站;備注:標(biāo)本為HE染色、免疫組化時(shí),不需要打開熒光光源;標(biāo)本為熒光染料染色時(shí),一般也不需要打開白光光源。二
2、、明場(chǎng)觀察(Bright Field BF)1、正確放置標(biāo)本,BF主要用于HE染色、免疫組化標(biāo)本;2、轉(zhuǎn)動(dòng)熒光激發(fā)塊轉(zhuǎn)盤到“6”的位置;3、轉(zhuǎn)動(dòng)聚光鏡轉(zhuǎn)盤到“BF”位置,直到聽到咔嗒聲;4、將光路選擇桿推進(jìn)去( 選擇目鏡觀察光路);5、轉(zhuǎn)動(dòng)物鏡轉(zhuǎn)盤,選用合適的物鏡,調(diào)節(jié)白光光強(qiáng)控制鈕至合適的強(qiáng)度,調(diào)節(jié)粗/細(xì)調(diào)焦旋鈕聚焦觀察,根據(jù)需要調(diào)節(jié)瞳間距和屈光度;三、相襯觀察(Phase contrast PH)1、正確放置標(biāo)本,PH主要用于沒有任何染色的、較透明的標(biāo)本;2、轉(zhuǎn)動(dòng)熒光激發(fā)塊轉(zhuǎn)盤到“6”的位置;3、轉(zhuǎn)動(dòng)物鏡轉(zhuǎn)盤,選用合適的物鏡;4、轉(zhuǎn)動(dòng)聚光鏡轉(zhuǎn)盤,使相襯光學(xué)元件與所用物鏡相匹配(見表1);5
3、、將光路選擇桿推進(jìn)去( 選擇目鏡觀察光路);6、調(diào)節(jié)光強(qiáng)控制鈕直至合適的強(qiáng)度,調(diào)節(jié)粗/細(xì)調(diào)焦旋鈕進(jìn)行聚焦觀察,根據(jù)需要調(diào)節(jié)瞳間距和屈光度。表1:物鏡、相差元件匹配表物鏡4X10X、20X40X相差元件PHLPH 1(PH C)PH 2四、熒光觀察1、如果需要,可先用明場(chǎng)觀察對(duì)標(biāo)本定位,再轉(zhuǎn)入熒光觀察;2、如果不再需要BF觀察,可關(guān)閉白光電源;或?qū)坠夤鈴?qiáng)調(diào)節(jié)鈕逆時(shí)針旋至最低,將孔徑光闌向右撥至最??;3、轉(zhuǎn)動(dòng)熒光激發(fā)塊轉(zhuǎn)盤,根據(jù)所用的熒光染料選擇匹配的熒光激發(fā)塊;表2:熒光激發(fā)塊序號(hào)激發(fā)塊名稱激發(fā)光(nm)發(fā)射光(nm)濾掉光(nm)1WU330-3854204002WB450-48051550
4、03WG510-5505905704WBV400-4404754555WIY545-5806106006BF明場(chǎng)、相差4、打開熒光光閘(SHUTTER),使其置于“O”位置;5、將光路選擇桿推進(jìn)去( 選擇目鏡觀察光路);6、轉(zhuǎn)動(dòng)物鏡轉(zhuǎn)盤,選用合適的物鏡,調(diào)節(jié)粗/細(xì)調(diào)焦旋鈕聚焦觀察,根據(jù)熒光強(qiáng)度選擇合適的ND濾鏡(熒光減光閥)進(jìn)入光路。(第一個(gè)ND100:100% 的熒光強(qiáng)度進(jìn)入光路;第二個(gè)ND6:6%的熒光強(qiáng)度進(jìn)入光路,第三個(gè)ND25:25%的熒光強(qiáng)度進(jìn)入光路)。五、CCD成像1、cellSens Standard工作站中,,點(diǎn)擊右側(cè)攝像控制中的實(shí)時(shí)觀察;2、將光路選擇桿拉出(,CCD成像光路
5、),調(diào)節(jié)粗/細(xì)調(diào)焦旋鈕進(jìn)行聚焦;3、曝光:可先選擇自動(dòng)曝光,參照自動(dòng)曝光時(shí)間,再通過手動(dòng)調(diào)節(jié)曝光時(shí)間使圖像更清晰;4、背景校準(zhǔn):進(jìn)行明場(chǎng)和相差成像時(shí)執(zhí)行白平衡 ,熒光成像時(shí)執(zhí)行黑平衡,在樣品空白背景處畫一個(gè)小區(qū)域,軟件自動(dòng)以該處為背景對(duì)整幅圖像進(jìn)行調(diào)整,使所選區(qū)域顯示為白色或黑色;5、各成像參數(shù)設(shè)定完畢后,點(diǎn)擊拍照 ,儀器自動(dòng)成像;6、右鍵文檔工具欄窗口或在文件處進(jìn)行保存(TIF或JPG格式)。六、關(guān)機(jī)1、實(shí)驗(yàn)完畢,先退出工作站;2、將透射光光強(qiáng)調(diào)節(jié)鈕逆時(shí)針旋至最低,關(guān)閉透射光主開關(guān)(TH4);3、確認(rèn)汞燈開啟超過0.5h,方能關(guān)閉汞燈高壓電源;4、用無水乙醇擦拭鏡頭,并將物鏡轉(zhuǎn)盤轉(zhuǎn)至空位,清
6、理載物臺(tái)及桌面;5、刻錄數(shù)據(jù):放入全新光盤,將數(shù)據(jù)發(fā)送至光盤,電腦右下角出現(xiàn)刻錄提示,點(diǎn)擊該提示進(jìn)入,確認(rèn)待刻錄數(shù)據(jù),點(diǎn)擊“刻錄到光盤”-下一步,刻錄完畢,光盤自動(dòng)退出。6、關(guān)電腦及顯示器。七、圖像處理1、標(biāo)尺:在工具欄上選擇正確的物鏡倍數(shù),點(diǎn)擊“視圖”-標(biāo)尺,軟件自動(dòng)將標(biāo)尺加在圖像上,再點(diǎn)擊“圖像”-印入信息,保存即可。2、測(cè)量:點(diǎn)擊“測(cè)量”-測(cè)量工具,軟件左側(cè)顯示出測(cè)量工具欄,點(diǎn)擊選擇所需的測(cè)量工具,在圖像上畫目標(biāo)區(qū)域,右鍵點(diǎn)擊結(jié)束測(cè)量即可顯示結(jié)果。測(cè)量結(jié)果可導(dǎo)出Excel:點(diǎn)擊測(cè)量工具欄圖標(biāo)。3、圖像疊加:打開擬疊加的圖,“圖像”-組合彩色圖像-“可用圖像”中選擇擬疊加的圖-合并層-確認(rèn)。4、圖像拼接:按一定順序 拍攝圖像,相鄰兩張圖像的邊緣要部分重疊, 所有圖像拍攝完畢后,選擇視圖-工具-畫廊-全選擬拼接的圖像,選擇運(yùn)算-圖像拼接-設(shè)置水平方向圖像數(shù)量-根據(jù)拍攝順序擺好圖像位置 -確定;預(yù)覽后視情況選擇“裁剪邊緣”-確定。八、注意事項(xiàng)1、汞燈開啟后必須至少使用0.5h才能關(guān)閉!汞燈關(guān)閉后若還需使用,必須等后才能再次開啟!2、軟
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