中國藥品檢檢驗標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范___重金屬檢查法

1、重金屬檢查法簡述1.1 重金屬是指在規(guī)定實驗條件下能與顯色劑作用顯色的金屬雜質(zhì)。中國藥典2010年版二部附錄即H采用硫代乙酰胺試液或硫化鈉試液作顯色劑，以鉛（Pb）的限量表示。1.2 由于實驗條件不同，分為三種檢查方法。第一法適用于溶于水、稀酸或有機(jī)溶劑如乙醇的藥品，供試品不經(jīng)有機(jī)破壞，在酸性溶液中進(jìn)行顯色，檢查重金屬；第二法適用于難溶或不溶于水、稀酸或乙醇的藥品，或受某些因素（如自身有顏色的藥品、藥品中的重金屬不呈游離狀態(tài)或重金屬離子與藥品形成配位化合物等）干擾不適宜采用第一法檢查的藥品，供試品需經(jīng)有機(jī)破壞，殘渣經(jīng)處理后在酸性溶液中進(jìn)行顯色，檢查重金屬，第三法用來檢查能溶于堿而不溶于稀酸（或

2、在稀酸中即生成沉淀）的藥品中的重金屬。檢查時，應(yīng)根據(jù)中國藥典品種項下規(guī)定的方法選用。1.3 三種方法顯示的結(jié)果均為微量重金屬的硫化物微粒均勻混懸在溶液中所呈現(xiàn)的顏色；如果重金屬離子濃度大，加入顯色劑后放置時間長，就會有硫化物聚集下沉。1.4 重金屬硫化物生成的最佳pH值是3.03.5,經(jīng)實驗，重金屬檢查選用醋酸鹽緩沖液（pH3.5）2ml調(diào)節(jié)pH值為適宜。顯色劑硫代乙酰胺試液用量經(jīng)實驗也以2ml為佳，顯色時間一般為2min。經(jīng)實驗，以每27ml中含1020仙g的Pb與顯色劑所產(chǎn)生的顏色為最佳目視比色范圍。在規(guī)定實驗條件下，與硫代乙酰胺試液在弱酸條件下產(chǎn)生的硫化氫顯色的金屬離子有銀、鉛、汞、銅、

3、鎘、鈿、睇、錫、神、鋅、鉆與鍥等。1.5 由于在藥品生產(chǎn)過程中遇到鉛的機(jī)會較多，且鉛易蓄積中毒，故以鉛作為重金屬的代表，用硝酸鉛配制標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液。2 儀器與用具2.1 納氏比色管50ml,應(yīng)選擇外表面無劃痕，色澤一致，無瑕疵，管的內(nèi)徑和刻度線的高度均勻一致的質(zhì)量好的玻璃比色管進(jìn)行實驗。2.2 配制與貯存標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液用的玻璃容器均不得含鉛。3 試藥與試液3.1 標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液準(zhǔn)確稱取在105c干燥至恒重的硝酸鉛0.1599g,置1000ml量瓶中，加硝酸5ml與水50ml溶解后，用水稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液。臨用前，精密量取貯備液10ml,置100ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得，限當(dāng)日使用（

4、每Iml相當(dāng)于10/的Pb）。3.2 硫代乙酰胺試液、硫化鈉試液、醋酸鹽緩沖液（pH3.5）與維生素C等均按中國藥典2010年版二部附錄XV的規(guī)定。3.3 稀焦糖溶液取蔗糖或葡萄糖約5g,置瓷塔竭中，在玻璃棒不斷攪拌下，加熱至呈棕色糊狀，放冷，用水溶解成約25ml,濾過，貯于滴瓶中備用。臨用時，根據(jù)供試液色澤深淺，取適當(dāng)量調(diào)節(jié)使用。4 操作方法4.1 第一法4.1.1 取25ml納氏比色管三支，編號為甲、乙、丙。4.1.2 甲管中加一定量的標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液與醋酸鹽緩沖液(pH3.5)2ml,加水或各品種項下規(guī)定的溶劑稀釋成25ml。4.1.3 乙管中加按該品種項下規(guī)定的方法制成的供試液25ml04.

5、1.4 內(nèi)管中加與乙管相同量的供試品，按該品種項下規(guī)定的方法制成溶液，在加水或溶劑稀釋成25ml前，加與甲管相同量的標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液，然后加水或溶劑稀釋使成25ml。4.1.5 如供試液略帶顏色，可在甲管中滴加稀焦糖溶液少量或其他無干擾的有色溶液，使其色澤與乙管、內(nèi)管一致。4.1.6 在甲、乙、丙三管中分別加硫代乙酰胺試液各2ml,搖勻，放置2min,同置白紙上，自上向下透視，當(dāng)內(nèi)管中顯出的顏色不淺于甲管時，乙管中顯出的顏色與甲管比較，不得更深。如內(nèi)管中顯出的顏色淺予甲管，試驗無效，應(yīng)取樣按第二法重新檢查。4.1.7 如在甲管中滴加稀焦糖溶液或其他無干擾的有色溶液，仍不能使顏色一致時，應(yīng)取樣按第二法

6、重新檢查。4.1.8 供試品如含高鐵鹽而影響重金屬檢查時，可在甲、乙、丙三管中分別加相同量的維生素C0.51.0g,再照上述方法檢查。4.1.9 配制供試液時，如使用的鹽酸超過Iml(或與鹽酸Iml相當(dāng)?shù)南←}酸)，氨試液超過2ml,或加入其他試劑進(jìn)行處理者，除另有規(guī)定外，甲管溶液應(yīng)取同樣同量的試劑置瓷皿中蒸干后，加醋酸鹽緩沖液(pH3.5)2ml與水15ml,微熱溶解后，移至納氏比色管中，加標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液一定量，再用水或各品種項下規(guī)定的溶劑稀釋成20ml04.2 第二法4.2.1 2.1取25ml納氏比色管兩支，編號為甲、乙。4.2.2 除另有規(guī)定外，當(dāng)按第一法檢查，內(nèi)管中量出的顏色淺于甲管，或供

7、試液帶顏色，即使在甲管中滴加稀焦糖溶液或其他無干擾的有色溶液，仍不能使顏色一致，需改用第二法檢查時，取各品種項下規(guī)定量的供試品，按熾灼殘渣檢查法(中國藥典2010年版二部附錄VfflN)進(jìn)行熾灼處理，然后取遺留的殘渣，加硝酸0.5ml,蒸干，至氧化氮蒸氣除盡后，放冷，加鹽酸2ml,置水浴上蒸干后加水15ml.滴加氨試液至對酚猷指示液顯微粉紅色，再加醋酸鹽緩沖液(pH3.5)2ml.微熱溶解后，移至乙管中，加水稀釋成2sml04.2.3 直接取該品種熾灼殘渣檢查項下在500600c熾灼的遺留殘渣，再按4.2.2自二，加硝酸0.5ml.蒸干至氧化氮蒸氣除盡后，”起，依法操作至“移至乙管中，加水稀釋

8、成25ml”。4.2.4如不取熾灼殘渣項下遺留的殘渣，則可取供試品一定量，緩緩熾灼至完全炭化，放冷，加硫酸0.5lml,使恰濕潤，用低溫加熱至硫酸除盡后，加硝酸0.5ml,蒸干，至氧化氮蒸氣除盡后，放冷，在500600c熾灼使完全灰化，再按4.2.2自“,，放冷，加鹽酸2ml,”起，依法操作至“移至乙管中，加水稀釋成25ml”。4.2.5 如供試品為溶液，貝n取各品種項下規(guī)定量的溶液，蒸發(fā)至干，再按4.2.2自“，按熾灼殘渣檢查法，”起，依法操作至“移至乙管中，加水稀釋成25ml”。4.2.6 取配制供試液的試劑，置瓷皿中蒸干后，加醋酸鹽緩沖液(pH3.5)2ml與水15ml,微熱溶解后，移至

9、甲管中，加標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液一定量，加水稀釋成25ml04.2.7 在甲、乙兩管中分別加硫代乙酰胺試液各2ml,搖勻，放置2min,同置白紙上，自上向下透視，乙管中顯出的顏色與甲管比較，不得更深。4.3 第三法4.3.1 取25ml納氏比色管兩支，編號為甲、乙。4.3.2 除另有規(guī)定外，取規(guī)定量的供試品置乙管中，加氫氧化鈉試液5ml使溶解，再加水稀釋使成25ml04.3.3 取一定量的標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液置甲管中，氫氧化鈉試液5ml并加水使成25ml。4.3.4 在甲、乙兩管中分別加硫化鈉試液5滴，搖勻，同置白紙上，自上向下透視，乙管中顯出的顏色與甲管比較，不得更深。5 注意事項5.3 標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液應(yīng)在臨用前精密

10、量取標(biāo)準(zhǔn)鉛貯備液新鮮稀釋配制，限當(dāng)日使用(每1ml相當(dāng)于l0g的Pb)；配制與貯存標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液使用的玻璃容器，均不得含有鉛。5.4 硫代乙酰胺試液與重金屬反應(yīng)受溶液的pH值、硫代乙酰胺試液加入量、顯色時間等因索的影響，經(jīng)實驗，本重金屬檢查選用醋酸鹽緩沖液(pH3.5)2ml調(diào)節(jié)pH值，顯色劑硫代乙酰胺試液用量2ml,顯色時間為2min,是最有利顯色反應(yīng)進(jìn)行、使呈色最深的條件，故配制醋酸鹽緩沖液(pH3.5)時，要用pH計調(diào)節(jié)溶液的pH值，應(yīng)注意控制硫代乙酰胺試液的加入量及硫代乙酰胺試液顯色劑的顯色時間。5.5 為了便于目視比較，第一、二和第三法中的標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液用量以2.0ml(相當(dāng)與20g的Pb)

11、為宜，小于1.Oml或大于30ml,呈色太淺或太深，均不利于目視比較，故在檢查時，如供試品取樣量與標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液的取用量均未指明時，常以標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液為2.0ml來計算供試品的取樣量，并進(jìn)行試驗。5.6 如需取熾灼殘渣項下遺留的殘渣作重金屬檢查時，則熾灼溫度必須控制在500600c。實驗證明，熾灼溫度在700c以上時，多數(shù)金屬鹽都有不同程度的損失以鉛為例，在700c經(jīng)6h熾灼，損失達(dá)68%。某些供試品（如安乃近、諾氟沙星等）在熾灼時能腐蝕瓷地竭而帶入較多的重金屬，應(yīng)改用石英培竭或柏培竭操作。5.7 熾灼殘渣加硝酸處理，必須蒸干，至氧化氮蒸氣除盡，否則會使硫代乙酰胺水解生成的硫化氫，因氧化析出乳硫，影響

12、檢查.蒸干后殘渣加鹽酸處理，使重金屬轉(zhuǎn)化為氯化物，在水浴上蒸干以趕除多余的鹽酸，加水溶解，加入酚猷指示液1滴，再逐滴加入氨試液，邊加邊攪拌，直到溶液剛顯微粉紅色為止，再加醋酸鹽緩沖液（pH3.5）.使供試液的pH值調(diào)節(jié)至3.5。5.8 供試品中如含有高鐵鹽，在弱酸性溶液中會使硫代乙酰胺水解生成的硫化氫進(jìn)一步氧化析出乳硫，影響檢查，加入維生素C可將高鐵離子還原為亞鐵離子而消除干擾。5.9 如供試品自身為重金屬的鹽，在檢查這類藥品中的其他金屬時，必須先將供試品本身的金屬離子除去，再進(jìn)行檢查。如在枸檬酸鐵錢中檢查鉛鹽時，利用Fe3+在一定濃度的鹽酸中形成HFeCl62-,用乙醴提取除去，再調(diào)節(jié)供試液

13、至堿性，用氟化鉀試液掩蔽微量的鐵后進(jìn)行檢查；右旋糖酊鐵注射液中重金屬檢查，也是在一定濃度的鹽酸中，用醋酸異丁酯提取除去鐵鹽后進(jìn)行檢查。5.10 藥品本身生成的不溶性硫化物，影響重金屬檢查，可加入掩蔽劑以避免干擾。如硫酸鋅和葡萄糖酸睇鈉中鉛鹽檢查，是在堿性溶液中加入氟化鉀試液，或在中性溶液中加入灑石酸，使鋅離子或睇離子生成穩(wěn)定的絡(luò)合物，再依法檢查。5.11 為了消除鹽酸或其他試劑可能夾雜的重金屬，故在配制供試品溶液時，如使用鹽酸超過1ml（或與鹽酸Iml相當(dāng)?shù)南←}酸）或使用氨試液超過2ml,以及用硫酸或硝酸進(jìn)行有機(jī)破壞，或加入其他試劑進(jìn)行處理者，除另有規(guī)定外，對照溶液應(yīng)取同樣量試液蒸干后，依法檢

14、查。5 .10在檢查時，標(biāo)準(zhǔn)管（甲管）、供試品管（乙管）與監(jiān)測管（內(nèi)管）應(yīng)平行操作，同時按順序加入試劑，試劑加入量、操作條件等應(yīng)一致。6 記錄與計算6.1 記錄6.1.1 必須記錄標(biāo)準(zhǔn)鉛貯備液的來源及標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液的制備。6.1.2 必須記錄檢查所采用的方法，供試品取樣量，供試液的制備或供試品處理的方法，標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液取用量等檢查各操作過程，以及操作過程中使用的特殊試劑，試劑名稱和用量或?qū)z查結(jié)果有影響的試劑用量，實際過程中出現(xiàn)的現(xiàn)象及實驗結(jié)果等。6.2 計算6.2.1標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液濃度計算1mol硝酸鉛Pb（NO3）2的質(zhì)量為331.21g,含鉛（Pb）為207.2g;稱取硝酸鉛0.1599g,配成10

15、00ml貯備液，含Pb量為:207.20,1599106100.0g/ml331.211000貯備液依法稀釋10倍后所得標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液濃度為每Iml含10仙g的Pb。6.2.2 重金屬限量計算進(jìn)行檢查時，如取供試品1.0g,與標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液2.0ml制成的對照液比較，計算重金屬限量。重金屬限量（ppm）=標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液體積（ml）x標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液濃度（Ng/ml）/供試品質(zhì)量（g）=2.010/1.0=20（ppm）（百萬分之二十）6.2.3 標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液取樣量計算根據(jù)取供試品量及限量計算，如取供試品2.0g,依法檢查，規(guī)定含重金屬不得過百萬分之五，應(yīng)取標(biāo)準(zhǔn)鉛（Pb）溶液（l0Ng/ml）多少毫升？V=重金屬限量（ppm）x供試品重（g）/標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液濃度（11g/ml）=5X2,0/10=1.0ml例如葡萄糖注射液中重金屬檢查，“取本品適量（約相當(dāng)于葡萄糖3g）,依法檢查，按葡萄糖含量計算，含重金屬不得過百萬分之五”，計算標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液取用量。