熒光和化學(xué)發(fā)光分析法ppt課件

1、嘉興學(xué)院嘉興學(xué)院儀器分析儀器分析第二章第二章 熒光和化學(xué)發(fā)光分析法熒光和化學(xué)發(fā)光分析法*Stokes 用分光計察看到：熒光的波長比入射光的波長略微長些五顏六色雨后路面上水珠油膜呈現(xiàn)* 基態(tài)分子吸收能量基態(tài)分子吸收能量( (電能、電能、熱能、化學(xué)能或光能等熱能、化學(xué)能或光能等) )，電，電子由基態(tài)躍遷到激發(fā)態(tài)，當(dāng)子由基態(tài)躍遷到激發(fā)態(tài)，當(dāng)電子由激發(fā)態(tài)前往基態(tài)時，電子由激發(fā)態(tài)前往基態(tài)時，以發(fā)射電磁輻射以發(fā)射電磁輻射( (即光即光) )的方的方式釋放能量。式釋放能量。 分子發(fā)光：分子發(fā)光：分子分子 +電能電能化學(xué)能化學(xué)能光能光能生物活性參生物活性參與化學(xué)發(fā)光與化學(xué)發(fā)光 電致發(fā)光電致發(fā)光化學(xué)發(fā)光化學(xué)發(fā)光

2、光致發(fā)光光致發(fā)光生物發(fā)光生物發(fā)光熒光熒光磷光磷光*分子發(fā)光：分子發(fā)光：M +能能量量M*M +hv光致發(fā)光：光致發(fā)光：M + hvM*M +hv光*2.1 2.1 熒光分析法熒光分析法2.1.1 2.1.1 熒光分析法根本概念熒光分析法根本概念2.1.2 2.1.2 熒光強(qiáng)度及影響要素?zé)晒鈴?qiáng)度及影響要素2.1.3 2.1.3 儀器安裝儀器安裝2.1.4 2.1.4 定量分析方法定量分析方法2.1.5 2.1.5 熒光分析測定方法、特點和運用熒光分析測定方法、特點和運用*A A 分子的激發(fā)態(tài)分子的激發(fā)態(tài)分子激發(fā)態(tài)和三線激發(fā)態(tài)分子激發(fā)態(tài)和三線激發(fā)態(tài)激發(fā)態(tài)：激發(fā)態(tài)： 基態(tài)分子吸收能量后，價層電子躍遷

3、到高能基態(tài)分子吸收能量后，價層電子躍遷到高能級的分子軌道上稱為電子激發(fā)態(tài)級的分子軌道上稱為電子激發(fā)態(tài) 。是分子的亞穩(wěn)。是分子的亞穩(wěn)定形狀。定形狀?；鶓B(tài)：基態(tài)： 在正常形狀下，分子處于最低能級的分子軌在正常形狀下，分子處于最低能級的分子軌道上稱為基態(tài)。是分子的穩(wěn)定形狀。道上稱為基態(tài)。是分子的穩(wěn)定形狀。2.1.1 2.1.1 熒光分析法根本概念熒光分析法根本概念2.1.1.1 熒光及其產(chǎn)生*l 電子自旋多重度電子自旋多重度 電子從基態(tài)躍遷到激發(fā)態(tài)，分子中的電子電子從基態(tài)躍遷到激發(fā)態(tài)，分子中的電子可以處在不同的自旋形狀可以處在不同的自旋形狀, ,常用電子自旋多重度常用電子自旋多重度來描畫。來描畫。M

4、 = 2S + 1S是電子的總自旋量子數(shù)，各電子自旋量子數(shù)的代數(shù)和。是電子的總自旋量子數(shù)，各電子自旋量子數(shù)的代數(shù)和。2.1.1.1 熒光及其產(chǎn)生* 單重態(tài)單重態(tài)M=1：電子自旋都配對的分子的電：電子自旋都配對的分子的電子態(tài)稱為單重態(tài)，用子態(tài)稱為單重態(tài)，用“S表示。表示。 三重態(tài)三重態(tài)M=3：分子中的電子對的電子自旋：分子中的電子對的電子自旋平行的電子態(tài)稱為三重態(tài)，用平行的電子態(tài)稱為三重態(tài)，用“T表示。表示。S2 T2 S1 T1 S0 ( (洪特規(guī)那么洪特規(guī)那么) ) M = 2S + 1M自旋多重度自旋多重度S總自旋量子數(shù)總自旋量子數(shù)2.1.1.1 熒光及其產(chǎn)生*2022-4-25S2S1S

5、0T1吸吸收收發(fā)發(fā)射射熒熒光光發(fā)發(fā)射射磷磷光光系間跨越內(nèi)轉(zhuǎn)換振動弛豫能量l 2l 2l 1l 1l 3l 3 外轉(zhuǎn)換l l 2 2T2內(nèi)轉(zhuǎn)換振動弛豫分子熒光和磷光發(fā)射過程* 電子處于激發(fā)態(tài)是不穩(wěn)定形狀，前往基態(tài)時，經(jīng)過輻射躍遷(發(fā)光)和非輻射躍遷(熱)等方式失去能量。傳送途徑傳送途徑輻射躍遷輻射躍遷熒光熒光磷光磷光內(nèi)轉(zhuǎn)換內(nèi)轉(zhuǎn)換系間跨越系間跨越振動弛豫振動弛豫非輻射躍遷非輻射躍遷延遲熒光延遲熒光外轉(zhuǎn)換外轉(zhuǎn)換前往速度快的途徑，發(fā)生幾率大前往速度快的途徑，發(fā)生幾率大!B B 分子去激發(fā)過程及熒光的產(chǎn)生分子去激發(fā)過程及熒光的產(chǎn)生2.1.1.1 熒光及其產(chǎn)生*S2S0ehv1. 振動弛豫：同一電子能級內(nèi)

6、以熱能量交換振動弛豫：同一電子能級內(nèi)以熱能量交換方式由高振動能級至低相鄰振動能級間的躍遷。發(fā)方式由高振動能級至低相鄰振動能級間的躍遷。發(fā)生振動時間生振動時間10 -11 10 -13 s。1 1、非輻射躍遷、非輻射躍遷2.1.1.1 熒光及其產(chǎn)生*S2S0S1ehv2. 內(nèi)轉(zhuǎn)換：一樣多重度的電子能級中內(nèi)轉(zhuǎn)換：一樣多重度的電子能級中, 相等能相等能級間的非輻射能級交換。發(fā)生內(nèi)轉(zhuǎn)換的時間級間的非輻射能級交換。發(fā)生內(nèi)轉(zhuǎn)換的時間10-12 s。2.1.1.1 熒光及其產(chǎn)生*S2S0S1T1ehv3. 系間跨越：不同多重態(tài)在有重疊的轉(zhuǎn)動能級系間跨越：不同多重態(tài)在有重疊的轉(zhuǎn)動能級間的非輻射躍遷。電子自旋改

7、動，躍遷禁阻，經(jīng)過間的非輻射躍遷。電子自旋改動，躍遷禁阻，經(jīng)過自旋自旋-軌道耦合等躍遷。軌道耦合等躍遷。2.1.1.1 熒光及其產(chǎn)生*4. 外轉(zhuǎn)換：激發(fā)態(tài)分子與溶劑或其他分外轉(zhuǎn)換：激發(fā)態(tài)分子與溶劑或其他分子之間產(chǎn)生相互作用而損失能量回到基態(tài)的非子之間產(chǎn)生相互作用而損失能量回到基態(tài)的非輻射躍遷。輻射躍遷。 外轉(zhuǎn)換使熒光或磷光減弱或外轉(zhuǎn)換使熒光或磷光減弱或“猝滅。猝滅。2.1.1.1 熒光及其產(chǎn)生*S2S0S1T11. 熒光發(fā)射：電子由第一激發(fā)單重態(tài)的最低振動熒光發(fā)射：電子由第一激發(fā)單重態(tài)的最低振動能級能級基態(tài)各振動能級，發(fā)射時間約為基態(tài)各振動能級，發(fā)射時間約為10-710-9 s 。 發(fā)射熒光的

8、能量比分子吸收的能量小，波長長。發(fā)射熒光的能量比分子吸收的能量小，波長長。 ehvhv2 2、輻射躍遷、輻射躍遷2.1.1.1 熒光及其產(chǎn)生*2. 磷光發(fā)射：電子由第一激發(fā)三重態(tài)的最低振磷光發(fā)射：電子由第一激發(fā)三重態(tài)的最低振動能級動能級基態(tài)各振動能級。發(fā)光時間：基態(tài)各振動能級。發(fā)光時間：10-410s 。S2S0S1T1hvehvS0 激發(fā)態(tài)激發(fā)態(tài)振動弛豫振動弛豫內(nèi)轉(zhuǎn)換內(nèi)轉(zhuǎn)換系間跨越系間跨越振動弛豫振動弛豫 T1 S0 2.1.1.1 熒光及其產(chǎn)生*1 1、熒光激發(fā)光譜、熒光激發(fā)光譜 固定熒光丈量固定熒光丈量波長，改動激發(fā)光波長，改動激發(fā)光的波長，丈量不同的波長，丈量不同波長波長exex激發(fā)光

9、照激發(fā)光照射下熒光強(qiáng)度的變射下熒光強(qiáng)度的變化，記錄熒光強(qiáng)度化，記錄熒光強(qiáng)度F F與激發(fā)光波長的與激發(fā)光波長的關(guān)系曲線。關(guān)系曲線。200260320380440500560620熒光激發(fā)光譜熒光激發(fā)光譜熒光發(fā)射光譜熒光發(fā)射光譜磷光光譜磷光光譜室溫下菲的乙醇溶液熒（磷）光光譜室溫下菲的乙醇溶液熒（磷）光光譜2.1.1.2 熒光激發(fā)光譜曲線和發(fā)射光譜曲線*2 2、熒光發(fā)射光譜、熒光發(fā)射光譜 200260320380440500560620熒光激發(fā)光譜熒光激發(fā)光譜熒光發(fā)射光譜熒光發(fā)射光譜磷光光譜磷光光譜室溫下菲的乙醇溶液熒（磷）光光譜室溫下菲的乙醇溶液熒（磷）光光譜 固定激發(fā)光波長固定激發(fā)光波長和強(qiáng)度

10、，記錄在不同和強(qiáng)度，記錄在不同波長波長emem下所發(fā)射的下所發(fā)射的熒光強(qiáng)度所得關(guān)系曲熒光強(qiáng)度所得關(guān)系曲線即不同波長下熒光線即不同波長下熒光強(qiáng)度的分布。強(qiáng)度的分布。發(fā)射光譜的外形與激發(fā)波長無關(guān)。發(fā)射光譜的外形與激發(fā)波長無關(guān)。2.1.1.2 熒光激發(fā)光譜曲線和發(fā)射光譜曲線*l 熒光發(fā)射光譜與吸收光譜成鏡像關(guān)系熒光發(fā)射光譜與吸收光譜成鏡像關(guān)系 2.1.1.2 熒光激發(fā)光譜曲線和發(fā)射光譜曲線l 吸收光譜的外形闡明了分子第一激發(fā)單重態(tài)的振動能級；發(fā)射光譜闡明分子基態(tài)的振動能級構(gòu)造。l 基態(tài)與激發(fā)態(tài)兩者的振動能級構(gòu)造類似，激發(fā)與去激發(fā)組成相反的兩個過程。*u 分子產(chǎn)生熒光必需具備的條件分子產(chǎn)生熒光必需具備

11、的條件1. 具有適宜的構(gòu)造：通常是含有苯環(huán)和稠環(huán)的剛具有適宜的構(gòu)造：通常是含有苯環(huán)和稠環(huán)的剛性構(gòu)造的有機(jī)分子；性構(gòu)造的有機(jī)分子；2. 具有一定的熒光量子產(chǎn)率。具有一定的熒光量子產(chǎn)率。2.1.1.3 熒光效率*=發(fā)射熒光的分子數(shù)發(fā)射熒光的分子數(shù)激發(fā)分子總數(shù)激發(fā)分子總數(shù)2.1.1.3 熒光效率熒光量子產(chǎn)率熒光量子產(chǎn)率： 衡量熒光物質(zhì)發(fā)光才干。衡量熒光物質(zhì)發(fā)光才干。 它表示激發(fā)分子發(fā)射出熒光它表示激發(fā)分子發(fā)射出熒光(或磷光或磷光) 的比例。的比例。* 熒光量子產(chǎn)率與激發(fā)態(tài)能量釋放各過程的速率常數(shù)有關(guān)，可用各過程的速率常數(shù)來表示熒光量子產(chǎn)率：ffiiKKK 熒光發(fā)射過程的熒光發(fā)射過程的速率常數(shù)，取決速

12、率常數(shù)，取決于分子構(gòu)造。于分子構(gòu)造。各種非輻射躍遷過程的速各種非輻射躍遷過程的速率常數(shù)之和。取決于分子率常數(shù)之和。取決于分子所處的化學(xué)環(huán)境，同時也所處的化學(xué)環(huán)境，同時也與化學(xué)構(gòu)造有關(guān)。與化學(xué)構(gòu)造有關(guān)。2.1.1.3 熒光效率* 熒光分子與其他分子相互作用引起熒光強(qiáng)度降低甚熒光分子與其他分子相互作用引起熒光強(qiáng)度降低甚至熒光消逝的景象為熒光猝滅，又稱熒光熄滅。至熒光消逝的景象為熒光猝滅，又稱熒光熄滅。1 1、 碰撞猝滅碰撞猝滅-動態(tài)猝滅動態(tài)猝滅 M* + Q M + Q + 熱量熱量激發(fā)態(tài)分子激發(fā)態(tài)分子猝滅劑猝滅劑2.1.1.4 猝滅*2 2、 生成化合物的猝滅生成化合物的猝滅-靜態(tài)猝滅靜態(tài)猝滅

13、M + Q M Q 基態(tài)的熒光物質(zhì)與猝滅劑反響生成非熒光的基態(tài)的熒光物質(zhì)與猝滅劑反響生成非熒光的化合物，導(dǎo)致熒光的猝滅?；衔?，導(dǎo)致熒光的猝滅。2.1.1.4 猝滅3 3、 能量轉(zhuǎn)移能量轉(zhuǎn)移 M* + Q M + Q* 激發(fā)態(tài)的分子與猝滅劑作用，能量發(fā)生轉(zhuǎn)移激發(fā)態(tài)的分子與猝滅劑作用，能量發(fā)生轉(zhuǎn)移，猝滅劑被激發(fā)。，猝滅劑被激發(fā)。*5 5、 自猝滅自猝滅 熒光物質(zhì)的濃度較大時，激發(fā)態(tài)分子之間碰撞較多，在熒光物質(zhì)的濃度較大時，激發(fā)態(tài)分子之間碰撞較多，在碰撞中引起能量損失，產(chǎn)生自熄，使熒光強(qiáng)度減小。碰撞中引起能量損失，產(chǎn)生自熄，使熒光強(qiáng)度減小。2.1.1.4 猝滅4 4、 氧的猝滅氧的猝滅 氧對溶液熒

14、光產(chǎn)生猝滅作用的緣由比較復(fù)氧對溶液熒光產(chǎn)生猝滅作用的緣由比較復(fù)雜，能夠包含著多種機(jī)理。雜，能夠包含著多種機(jī)理。 *2.1.2 熒光強(qiáng)度及影響要素?zé)晒鈴?qiáng)度及影響要素2.1.2.1 熒光強(qiáng)度與溶液濃度的關(guān)系2.1.2.2 有機(jī)物的熒光與其構(gòu)造的關(guān)系2.1.2.3 金屬離子螯合物的熒光2.1.2.4 實驗條件對熒光強(qiáng)度的影響*Epsilon大寫，小寫，是第五個希臘字母。漢字讀音：艾普西龍朗伯-比爾定律0fbc*303. 2IKIP15*A A 躍遷的類型躍遷的類型l* 是有機(jī)化合物產(chǎn)生熒光的主要躍遷類型，具是有機(jī)化合物產(chǎn)生熒光的主要躍遷類型，具有有* 共軛雙鍵的分子才干發(fā)射較強(qiáng)的熒光。共軛雙鍵的分子

15、才干發(fā)射較強(qiáng)的熒光。2.1.2.2 有機(jī)物的熒光與其構(gòu)造的關(guān)系熒光的產(chǎn)生是分子先閱歷* 或n * 激發(fā)，然后經(jīng)振動弛豫或其他非輻射躍遷再發(fā)生* 或* n 而得到熒光。*B B 共軛效應(yīng)共軛效應(yīng)化合物化合物量子產(chǎn)率量子產(chǎn)率F ex（nm） em（nm） 苯苯萘萘蒽蒽丁省丁省2052863653902.1.2.2 有機(jī)物的熒光與其構(gòu)造的關(guān)系0.110.280.360.52278321404480*C C 分子共平面效應(yīng)分子共平面效應(yīng)芴芴 = 1聯(lián)苯聯(lián)苯 = 0.2熒光分子的共平面性添加，那么共軛體系大，熒光分子的共平面性添加，那么共軛體系大，有利于有利于* 躍遷。躍遷。2.1.2.2 有機(jī)物的熒光

16、與其構(gòu)造的關(guān)系*熒光黃熒光黃 = 0.92酚酞酚酞 = 02.1.2.2 有機(jī)物的熒光與其構(gòu)造的關(guān)系*D D 取代基效應(yīng)取代基效應(yīng)1. 給電子取代基加強(qiáng)熒光給電子取代基加強(qiáng)熒光-NH2，-NHR ，-NR2，-OH， -OR ，-CN產(chǎn)生產(chǎn)生 p 共軛共軛2. 吸電子取代基減弱熒光吸電子取代基減弱熒光-C=O， -COOH ，-NO2摩爾吸光系數(shù)小，熒光發(fā)射弱，系間跨躍較大，摩爾吸光系數(shù)小，熒光發(fā)射弱，系間跨躍較大，同樣使熒光減弱。同樣使熒光減弱。 2.1.2.2 有機(jī)物的熒光與其構(gòu)造的關(guān)系*D D 取代基效應(yīng)取代基效應(yīng)2.1.2.2 有機(jī)物的熒光與其構(gòu)造的關(guān)系A(chǔ) A 躍遷的類型躍遷的類型B

17、B 共軛效應(yīng)共軛效應(yīng)C C 分子共平面效應(yīng)分子共平面效應(yīng)*2.1.2.3 金屬離子螯合物的熒光2 2螯合物中金屬離子的發(fā)光螯合物中金屬離子的發(fā)光1 1螯合物中配位體的發(fā)光螯合物中配位體的發(fā)光*2.1.2.3 金屬離子螯合物的熒光1 1螯合物中配位體的發(fā)光螯合物中配位體的發(fā)光 不少有機(jī)化合物雖然具有共軛雙鍵，但由于不是剛性構(gòu)造，分子處于非同一平面，因此不發(fā)生熒光。假設(shè)這些化合物和金屬離子構(gòu)成螯合物，隨著分子的剛性加強(qiáng)，平面構(gòu)造的增大，常會發(fā)生熒光。 如8-羥基喹啉本身有很弱的熒光，但其金屬螯合物具有很強(qiáng)的熒光。*2.1.2.3 金屬離子螯合物的熒光 這類發(fā)光過程通常是螯合物首先經(jīng)過配位體的躍遷激

18、發(fā)，接著配位體把能量轉(zhuǎn)給金屬離子，導(dǎo)致dd 躍遷和ff躍遷，最終發(fā)射的是dd躍遷和ff躍遷光譜。2 2螯合物中金屬離子的發(fā)光螯合物中金屬離子的發(fā)光*2 2、溶劑、溶劑3 3、溶液黏度和溫度、溶液黏度和溫度 4 4、溶液的、溶液的PHPH值值2.1.2.4 實驗條件對熒光強(qiáng)度的影響1 1、激發(fā)光源、激發(fā)光源*2.1.2.4 實驗條件對熒光強(qiáng)度的影響1 1、激發(fā)光源、激發(fā)光源激發(fā)光強(qiáng)度激發(fā)光強(qiáng)度I0I0大，熒光強(qiáng)度增大，靈敏度增高。大，熒光強(qiáng)度增大，靈敏度增高。2 2、溶劑、溶劑 主要表現(xiàn)為溶劑的極性、氫鍵、配位鍵的構(gòu)成對主要表現(xiàn)為溶劑的極性、氫鍵、配位鍵的構(gòu)成對化合物的熒光發(fā)生變化?；衔锏臒晒?/p>

19、發(fā)生變化。 * *躍遷類型：溶劑極性增大，躍遷能量降躍遷類型：溶劑極性增大，躍遷能量降低，發(fā)生紅移，熒光加強(qiáng)。低，發(fā)生紅移，熒光加強(qiáng)。 氫鍵、配位鍵的構(gòu)成主要影響熒光分子的存氫鍵、配位鍵的構(gòu)成主要影響熒光分子的存在型體、電離形狀，熒光強(qiáng)度和外形均發(fā)生很大變化在型體、電離形狀，熒光強(qiáng)度和外形均發(fā)生很大變化。*3 3、溶液黏度和溫度、溶液黏度和溫度 黏度大，溫度低，可減小碰撞引起的熒光熄滅，黏度大，溫度低，可減小碰撞引起的熒光熄滅，熒光強(qiáng)度增大。熒光強(qiáng)度增大。溫度升高，外轉(zhuǎn)換的幾率添加，熒光強(qiáng)度降低。溫度升高，外轉(zhuǎn)換的幾率添加，熒光強(qiáng)度降低。4 4、溶液的、溶液的PHPH值值不同不同PH值下，熒光

20、分子存在方式不同。值下，熒光分子存在方式不同。2.1.2.4 實驗條件對熒光強(qiáng)度的影響*2.1.3 2.1.3 儀器安裝儀器安裝Cary Eclipse 熒光分光光度計熒光分光光度計熒光、磷光化學(xué)熒光、磷光化學(xué)/生物發(fā)光生物發(fā)光美國瓦里安技術(shù)中國美國瓦里安技術(shù)中國*一、熒光分光光度計構(gòu)造流程一、熒光分光光度計構(gòu)造流程 2.1.3 儀器安裝儀器安裝光源光源樣品池樣品池激發(fā)激發(fā)單色器單色器檢測器檢測器數(shù)據(jù)處置數(shù)據(jù)處置儀器控制儀器控制發(fā)射發(fā)射單色器單色器組成：激發(fā)光源、樣品池、雙單色器、檢測器、顯組成：激發(fā)光源、樣品池、雙單色器、檢測器、顯示系統(tǒng)。示系統(tǒng)。特殊點：兩個單色器，光源與檢測器通常成直角。

21、特殊點：兩個單色器，光源與檢測器通常成直角。*1 1、激發(fā)光源、激發(fā)光源 汞燈、碘鎢燈、氙弧燈、激光等汞燈、碘鎢燈、氙弧燈、激光等。2 2、樣品池、樣品池 I0ItIf樣品池四面透光。樣品池四面透光。2.1.3 儀器安裝儀器安裝*4 4、檢測器、檢測器 普通采用硒光電池。普通采用硒光電池。 檢測器的方向與激發(fā)光的方向成直角，以消檢測器的方向與激發(fā)光的方向成直角，以消除樣品池中透射光和雜散光的干擾。除樣品池中透射光和雜散光的干擾。 3 3、單色器、單色器 激發(fā)單色器：激發(fā)單色器：選擇激發(fā)光波長，用以分別出所需用的激發(fā)光。選擇激發(fā)光波長，用以分別出所需用的激發(fā)光。發(fā)射單色器：發(fā)射單色器：選擇熒光發(fā)

22、射波長，用以濾去雜散光、瑞利光、選擇熒光發(fā)射波長，用以濾去雜散光、瑞利光、拉曼光和雜質(zhì)所發(fā)射的熒光。拉曼光和雜質(zhì)所發(fā)射的熒光。 2.1.3 儀器安裝儀器安裝*二、磷光分光光度計構(gòu)造流程二、磷光分光光度計構(gòu)造流程 光源樣品池激發(fā)單色器檢測器數(shù)據(jù)處置儀器控制發(fā)射單色器斬波器磷光鏡利用熒光和磷光發(fā)射利用熒光和磷光發(fā)射壽命的差別壽命的差別通常情況下，樣品池需求放在盛液氮的石英杜瓦瓶內(nèi)，通常情況下，樣品池需求放在盛液氮的石英杜瓦瓶內(nèi)，來測定低溫磷光。來測定低溫磷光。*2 2、定量方法、定量方法 1 1、定量根據(jù)、定量根據(jù) 2.1.4 定量分析方法定量分析方法*1 1、定量根據(jù)、定量根據(jù) 熒光強(qiáng)度熒光強(qiáng)度

23、 If If 正比于吸收的光強(qiáng)度正比于吸收的光強(qiáng)度 Ia Ia 和熒光量子產(chǎn)率和熒光量子產(chǎn)率 ：faII 001 10bCatIIII由朗伯由朗伯- -比耳定律得：比耳定律得：2.303001 101bCbCfIIIe 熒光強(qiáng)度熒光強(qiáng)度 If ：2.1.4 定量分析方法定量分析方法*對于稀溶液，當(dāng)對于稀溶液，當(dāng) 2.303bC 0.05時：時：02.303ffIIbC If -熒光強(qiáng)度熒光強(qiáng)度I0 -入射光強(qiáng)度入射光強(qiáng)度f -熒光量子產(chǎn)率熒光量子產(chǎn)率b - 吸收光程吸收光程 - 摩爾吸光系數(shù)摩爾吸光系數(shù)C - 物質(zhì)濃度物質(zhì)濃度fIKC2.1.4 定量分析方法定量分析方法*2 2、定量方法、定量

24、方法 規(guī)范曲線法：規(guī)范曲線法：FCsFxCx2.1.4 定量分析方法定量分析方法*A A 無機(jī)化合物的熒光分析無機(jī)化合物的熒光分析如如MgMg、AlAl、CaCa等，本身不發(fā)射熒光，但與有機(jī)試劑可構(gòu)成等，本身不發(fā)射熒光，但與有機(jī)試劑可構(gòu)成熒光配合物進(jìn)展定量測定；熒光配合物進(jìn)展定量測定； 直接法：如直接法：如8-8-羥基喹啉與羥基喹啉與AlAl離子反響生成熒光配合物離子反響生成熒光配合物 安息香，水楊醛縮鄰氨基苯酚，黃酮醇，安息香，水楊醛縮鄰氨基苯酚，黃酮醇， 二苯乙醇酮二苯乙醇酮 2.1.5 熒光分析測定方法、特點和運熒光分析測定方法、特點和運用用*熒光熄滅法*B B 有機(jī)化合物的熒光分析有機(jī)化合物的熒光分析本身發(fā)射熒光的，如羅丹明本身發(fā)射熒光的，如羅丹明B B、熒光素等可直接測定；、熒光素等可直接測定；不發(fā)射熒光的物質(zhì)可經(jīng)過處置后成為發(fā)射熒光的物質(zhì)進(jìn)展不發(fā)射熒光的物質(zhì)可經(jīng)過處置后成為發(fā)射熒光的物質(zhì)進(jìn)展測定；測定；*C C：蛋白質(zhì)的熒光分析：蛋白質(zhì)的熒光分析蛋白質(zhì)的根本構(gòu)造，有的氨基酸本身可以發(fā)熒光，蛋白質(zhì)的根本構(gòu)造，有的氨基酸本身可以發(fā)熒光，例如：酪氨酸，色氨酸，苯丙氨酸例如：酪氨酸，色氨酸，苯丙氨