組織化學(xué)技術(shù)教程1..ppt課件

1、 （內(nèi)部教材，僅供參考）（內(nèi)部教材，僅供參考） 現(xiàn)代組織化學(xué)是介入細(xì)胞生物學(xué)、現(xiàn)代組織化學(xué)是介入細(xì)胞生物學(xué)、組織形態(tài)學(xué)、化學(xué)與生物化學(xué)及分子生組織形態(tài)學(xué)、化學(xué)與生物化學(xué)及分子生物學(xué)之間的一門新興邊緣學(xué)科，它已滲物學(xué)之間的一門新興邊緣學(xué)科，它已滲透和應(yīng)用于生命科學(xué)的許多學(xué)科。近幾透和應(yīng)用于生命科學(xué)的許多學(xué)科。近幾十年來，組織化學(xué)的發(fā)展，突飛猛進(jìn)，十年來，組織化學(xué)的發(fā)展，突飛猛進(jìn)，日新月異，已產(chǎn)生了許多分支，而各類日新月異，已產(chǎn)生了許多分支，而各類分支雖有特點(diǎn)，但都源于組織化學(xué)。因分支雖有特點(diǎn)，但都源于組織化學(xué)。因此，組織化學(xué)已成為醫(yī)學(xué)生物學(xué)科研過此，組織化學(xué)已成為醫(yī)學(xué)生物學(xué)科研過程中必備知識(shí)之一

2、。程中必備知識(shí)之一。 為使廣大生物醫(yī)學(xué)青年教師、研究生、為使廣大生物醫(yī)學(xué)青年教師、研究生、醫(yī)學(xué)高等職業(yè)技術(shù)學(xué)校?？粕坝嘘P(guān)實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)高等職業(yè)技術(shù)學(xué)校?？粕坝嘘P(guān)實(shí)驗(yàn)技術(shù)人員盡快掌握組織化學(xué)基本技術(shù)，作技術(shù)人員盡快掌握組織化學(xué)基本技術(shù)，作者借鑒其他兄弟院校之經(jīng)驗(yàn)，編寫了簡(jiǎn)明者借鑒其他兄弟院校之經(jīng)驗(yàn)，編寫了簡(jiǎn)明的組織化學(xué)技術(shù)教程。由于時(shí)間倉促，有的組織化學(xué)技術(shù)教程。由于時(shí)間倉促，有些知識(shí)未編入其中，有待完善。書中疏漏，些知識(shí)未編入其中，有待完善。書中疏漏，不妥之處，望廣大讀者批評(píng)指正。不妥之處，望廣大讀者批評(píng)指正。 穆長(zhǎng)征穆長(zhǎng)征 2019年年10月月 組織化學(xué)組織化學(xué)histochemistry是運(yùn)

3、是運(yùn)用物理學(xué)、化學(xué)、免疫學(xué)、分子生物學(xué)用物理學(xué)、化學(xué)、免疫學(xué)、分子生物學(xué)等原理與技術(shù)，對(duì)組織與細(xì)胞的化學(xué)成等原理與技術(shù)，對(duì)組織與細(xì)胞的化學(xué)成分、化學(xué)反應(yīng)及其變化規(guī)律進(jìn)行定性、分、化學(xué)反應(yīng)及其變化規(guī)律進(jìn)行定性、定位和定量研究的科學(xué)，是介于這些學(xué)定位和定量研究的科學(xué)，是介于這些學(xué)科之間的一門邊緣科學(xué)。組織化學(xué)自出科之間的一門邊緣科學(xué)。組織化學(xué)自出現(xiàn)以來，已取得了長(zhǎng)足的發(fā)展。這與相現(xiàn)以來，已取得了長(zhǎng)足的發(fā)展。這與相關(guān)學(xué)科的發(fā)展是分不開的，其中細(xì)胞生關(guān)學(xué)科的發(fā)展是分不開的，其中細(xì)胞生物學(xué)、生物化學(xué)以及分子生物學(xué)是組織物學(xué)、生物化學(xué)以及分子生物學(xué)是組織化學(xué)形成和發(fā)展的基礎(chǔ)?；瘜W(xué)形成和發(fā)展的基礎(chǔ)。 組織化

4、學(xué)是在組織學(xué)和化學(xué)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的，它的歷史相當(dāng)悠久。早在十九世紀(jì)，人們把顯微鏡與化學(xué)技術(shù)結(jié)合起來，開始觀察組織中的化學(xué)反應(yīng)。如法國(guó)植物學(xué)家F.V.Raspail1826介紹了植物花和果受精過程中的碘淀粉反應(yīng)；M. Perls1867用普魯士藍(lán)顯示出鐵；A.N.F. Millon(1844)敘述了蛋白質(zhì)反應(yīng)； R. Frnrohr1850論述了纖維素的氯鋅碘法； Klebs(1868) Klebs(1868)和和H. Stuve1872)H. Stuve1872)用愈創(chuàng)木酯用愈創(chuàng)木酯酊同膿作用產(chǎn)生藍(lán)色證明組織中有過氧化酊同膿作用產(chǎn)生藍(lán)色證明組織中有過氧化物酶的存在；物酶的存在；P.Ehrli

5、ch(1885) P.Ehrlich(1885) 發(fā)現(xiàn)了細(xì)發(fā)現(xiàn)了細(xì)胞色素氧化酶；胞色素氧化酶；R. Heidenhain(1868) R. Heidenhain(1868) 指指出動(dòng)質(zhì)出動(dòng)質(zhì)ergastoplasmergastoplasm）核糖核酸是一核糖核酸是一種嗜鹼性物質(zhì)，可被醋酸沉淀；種嗜鹼性物質(zhì)，可被醋酸沉淀；F. F. Miescher(1873)Miescher(1873)利用甲綠對(duì)核染色質(zhì)的選利用甲綠對(duì)核染色質(zhì)的選擇性親和力，分離出核染色質(zhì)。擇性親和力，分離出核染色質(zhì)。 此間，金屬鹽法，硫化鈷法，偶氮色素法，此間，金屬鹽法，硫化鈷法，偶氮色素法，偶氮色素四唑鹽法偶氮色素四唑鹽法t

6、etrazolium salts tetrazolium salts methodmethod以及磷酸化酶組織化學(xué)證明法等以及磷酸化酶組織化學(xué)證明法等相繼問世。特別是相繼問世。特別是H. ScheldonH. Scheldon和和D. D. BrandesBrandes等人把電鏡與酶組織化學(xué)結(jié)合起來，等人把電鏡與酶組織化學(xué)結(jié)合起來，以金屬沉淀法觀察了酸性磷酸酶和鹼性磷以金屬沉淀法觀察了酸性磷酸酶和鹼性磷酸酶，奠定了電鏡酶組織化學(xué)酸酶，奠定了電鏡酶組織化學(xué)electron electron microscope enzyme histochemistrymicroscope enzyme his

7、tochemistry根根底。后來底。后來A. M. Seligman(1967)A. M. Seligman(1967)提出鋨黑提出鋨黑化法化法Osmification methodOsmification method進(jìn)一步闡述進(jìn)一步闡述了電鏡組織化學(xué)的基本原理和反應(yīng)過程。了電鏡組織化學(xué)的基本原理和反應(yīng)過程。 1950 1950年年A. H. CoonsA. H. Coons等人提出了熒光抗體等人提出了熒光抗體法，從而把免疫學(xué)引入組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)中，法，從而把免疫學(xué)引入組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)中，后來后來P. K. NakaneP. K. Nakane，S. Avrameas S. Avrameas 和和

8、L. L. A. SternbergerA. Sternberger等人以辣根過氧化物酶等人以辣根過氧化物酶為標(biāo)記物對(duì)酶進(jìn)行觀察，創(chuàng)立了酶標(biāo)抗為標(biāo)記物對(duì)酶進(jìn)行觀察，創(chuàng)立了酶標(biāo)抗體法，從而為組織化學(xué)開辟了新途徑。體法，從而為組織化學(xué)開辟了新途徑。 隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，19691969年人年人們把分子雜交技術(shù)應(yīng)用到組織切片和細(xì)們把分子雜交技術(shù)應(yīng)用到組織切片和細(xì)胞標(biāo)本上，開始探索原位雜交技術(shù)，經(jīng)胞標(biāo)本上，開始探索原位雜交技術(shù)，經(jīng)過過3030年不斷應(yīng)用、完善和發(fā)展，特別是年不斷應(yīng)用、完善和發(fā)展，特別是探針制備與標(biāo)記物兩大關(guān)鍵技術(shù)的突破，探針制備與標(biāo)記物兩大關(guān)鍵技術(shù)的突破，目前原

9、位雜交技術(shù)已廣泛應(yīng)用于遺傳學(xué)、目前原位雜交技術(shù)已廣泛應(yīng)用于遺傳學(xué)、病毒學(xué)、神經(jīng)內(nèi)分泌學(xué)、病理學(xué)、免疫病毒學(xué)、神經(jīng)內(nèi)分泌學(xué)、病理學(xué)、免疫學(xué)和發(fā)育生物學(xué)等各個(gè)領(lǐng)域，顯示出巨學(xué)和發(fā)育生物學(xué)等各個(gè)領(lǐng)域，顯示出巨大的應(yīng)用潛力。大的應(yīng)用潛力。 現(xiàn)代組織化學(xué)已經(jīng)滲透和應(yīng)用于生現(xiàn)代組織化學(xué)已經(jīng)滲透和應(yīng)用于生命科學(xué)的許多學(xué)科，經(jīng)過近幾十年的發(fā)命科學(xué)的許多學(xué)科，經(jīng)過近幾十年的發(fā)展，產(chǎn)生了許多分支，如核酸與核蛋白、展，產(chǎn)生了許多分支，如核酸與核蛋白、蛋白質(zhì)與氨基酸、脂類與脂蛋白、碳水蛋白質(zhì)與氨基酸、脂類與脂蛋白、碳水化合物與粘蛋白及粘多糖、無機(jī)物組織化合物與粘蛋白及粘多糖、無機(jī)物組織化學(xué)、酶組織化學(xué)電鏡組織化學(xué)、熒

10、光化學(xué)、酶組織化學(xué)電鏡組織化學(xué)、熒光組織化學(xué)、免疫組織化學(xué)、同工酶組織組織化學(xué)、免疫組織化學(xué)、同工酶組織化學(xué)、定量組織化學(xué)、原位雜交組織化化學(xué)、定量組織化學(xué)、原位雜交組織化學(xué)和放射自顯影技術(shù)等?？傊?，現(xiàn)代組學(xué)和放射自顯影技術(shù)等?？傊?，現(xiàn)代組織化學(xué)的概念已經(jīng)遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過了原有范圍，織化學(xué)的概念已經(jīng)遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過了原有范圍，無論從理論、內(nèi)容、技術(shù)手段、研究范無論從理論、內(nèi)容、技術(shù)手段、研究范圍都比過去更廣泛、更深入。圍都比過去更廣泛、更深入。 1 1盡可能地保持組織和細(xì)胞生前的形態(tài)結(jié)盡可能地保持組織和細(xì)胞生前的形態(tài)結(jié)構(gòu)、化學(xué)成分和酶的活性。為此必須選擇適構(gòu)、化學(xué)成分和酶的活性。為此必須選擇適當(dāng)?shù)墓潭ㄒ汉颓‘?dāng)

11、的處理方法，如冷凍干燥、當(dāng)?shù)墓潭ㄒ汉颓‘?dāng)?shù)奶幚矸椒?，如冷凍干燥、冰凍替代、恒冷箱切片、振?dòng)切片等。冰凍替代、恒冷箱切片、振動(dòng)切片等。 2 2化學(xué)反應(yīng)要求在細(xì)胞或組織內(nèi)進(jìn)行，須化學(xué)反應(yīng)要求在細(xì)胞或組織內(nèi)進(jìn)行，須有定位的準(zhǔn)確性。為此必須控制反應(yīng)的時(shí)間有定位的準(zhǔn)確性。為此必須控制反應(yīng)的時(shí)間和條件，使反應(yīng)的產(chǎn)物不移位，不彌散。和條件，使反應(yīng)的產(chǎn)物不移位，不彌散。 3 3反應(yīng)物須有顯色性和定量的可能性，即必須反應(yīng)物須有顯色性和定量的可能性，即必須 是有色的沉淀或結(jié)晶，沉淀顆粒細(xì)小連續(xù)、是有色的沉淀或結(jié)晶，沉淀顆粒細(xì)小連續(xù)、 色深、不溶，并能保留在原位上。顏色深度色深、不溶，并能保留在原位上。顏色深度 要

12、與物質(zhì)含量或酶的活性具有一定的比例關(guān)要與物質(zhì)含量或酶的活性具有一定的比例關(guān) 系。系。4 4反應(yīng)物要有穩(wěn)定性和重復(fù)性，以利于觀察研反應(yīng)物要有穩(wěn)定性和重復(fù)性，以利于觀察研 究和驗(yàn)證。究和驗(yàn)證。5 5反應(yīng)物有靈敏性和特異性反應(yīng)物有靈敏性和特異性, ,以利于對(duì)比觀察。以利于對(duì)比觀察。6 6反應(yīng)產(chǎn)物有對(duì)照，否則難以判斷其結(jié)果的可反應(yīng)產(chǎn)物有對(duì)照，否則難以判斷其結(jié)果的可 靠性?？啃?。 組織化學(xué)是運(yùn)用物理和化學(xué)的原理、技術(shù)研究組織化學(xué)是運(yùn)用物理和化學(xué)的原理、技術(shù)研究組織與細(xì)胞內(nèi)的化學(xué)成分及其反應(yīng)，對(duì)這些化學(xué)成組織與細(xì)胞內(nèi)的化學(xué)成分及其反應(yīng)，對(duì)這些化學(xué)成分進(jìn)行定性、定位及其定量并研究其變化規(guī)律的科分進(jìn)行定性、定

13、位及其定量并研究其變化規(guī)律的科學(xué)。它是介于組織學(xué)、細(xì)胞學(xué)與生物化學(xué)之間的一學(xué)。它是介于組織學(xué)、細(xì)胞學(xué)與生物化學(xué)之間的一門邊緣科學(xué)。人們對(duì)生物組織的研究沿著兩條主要門邊緣科學(xué)。人們對(duì)生物組織的研究沿著兩條主要途徑發(fā)展：一條途徑是對(duì)顯微鏡下可分辨的越來越途徑發(fā)展：一條途徑是對(duì)顯微鏡下可分辨的越來越細(xì)小的形態(tài)結(jié)構(gòu)進(jìn)行描述；另一條途徑是著力分離細(xì)小的形態(tài)結(jié)構(gòu)進(jìn)行描述；另一條途徑是著力分離和描述具有重要生物學(xué)意義的物質(zhì)，如核酸、蛋白和描述具有重要生物學(xué)意義的物質(zhì)，如核酸、蛋白質(zhì)、脂類及碳水化合物等。由此進(jìn)一步了解生命活質(zhì)、脂類及碳水化合物等。由此進(jìn)一步了解生命活動(dòng)的本質(zhì)規(guī)律。兩條途徑的研究結(jié)果互相處近，

14、互動(dòng)的本質(zhì)規(guī)律。兩條途徑的研究結(jié)果互相處近，互相補(bǔ)充，并在細(xì)胞、亞細(xì)胞乃至分子水平上統(tǒng)一起相補(bǔ)充，并在細(xì)胞、亞細(xì)胞乃至分子水平上統(tǒng)一起來，就形成了現(xiàn)代組織化學(xué)。來，就形成了現(xiàn)代組織化學(xué)。 組織化學(xué)源于組織學(xué)、細(xì)胞學(xué)和生組織化學(xué)源于組織學(xué)、細(xì)胞學(xué)和生物化學(xué)；但也有別于這些學(xué)科。組織化物化學(xué)；但也有別于這些學(xué)科。組織化學(xué)與組織學(xué)不同：組織學(xué)的著眼點(diǎn)是組學(xué)與組織學(xué)不同：組織學(xué)的著眼點(diǎn)是組織與細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)，組織學(xué)技術(shù)的要織與細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)，組織學(xué)技術(shù)的要求是盡可能保持組織和細(xì)胞的微細(xì)結(jié)構(gòu)。求是盡可能保持組織和細(xì)胞的微細(xì)結(jié)構(gòu)。而組織化學(xué)的著眼點(diǎn)是組織與細(xì)胞內(nèi)化而組織化學(xué)的著眼點(diǎn)是組織與細(xì)胞內(nèi)化學(xué)成分的

15、組成，組織化學(xué)技術(shù)的基礎(chǔ)是學(xué)成分的組成，組織化學(xué)技術(shù)的基礎(chǔ)是已知的化學(xué)反應(yīng)。已知的化學(xué)反應(yīng)。 組織化學(xué)與生物化學(xué)也有區(qū)別：雖然組織化學(xué)與生物化學(xué)也有區(qū)別：雖然二者都著眼于組織與細(xì)胞內(nèi)的化學(xué)組成成分二者都著眼于組織與細(xì)胞內(nèi)的化學(xué)組成成分及其含量，但生物化學(xué)研究常將組織破壞、及其含量，但生物化學(xué)研究常將組織破壞、制成勻漿、然后進(jìn)行化學(xué)成分的測(cè)定，其化制成勻漿、然后進(jìn)行化學(xué)成分的測(cè)定，其化學(xué)反應(yīng)主要在試管內(nèi)進(jìn)行故其定位性能差；學(xué)反應(yīng)主要在試管內(nèi)進(jìn)行故其定位性能差；而組織化學(xué)技術(shù)則要求盡可能在原位顯示化而組織化學(xué)技術(shù)則要求盡可能在原位顯示化學(xué)成分，故其定位、定位性能好。學(xué)成分，故其定位、定位性能好。

16、組織化學(xué)的發(fā)展借助了許多物理學(xué)技組織化學(xué)的發(fā)展借助了許多物理學(xué)技術(shù)，特別是顯微鏡技術(shù)、電鏡組織化學(xué)、電術(shù)，特別是顯微鏡技術(shù)、電鏡組織化學(xué)、電鏡細(xì)胞化學(xué)、熒光組織化學(xué)以及定量組織化鏡細(xì)胞化學(xué)、熒光組織化學(xué)以及定量組織化學(xué)等，都是基于物理學(xué)技術(shù)發(fā)展起來的組織學(xué)等，都是基于物理學(xué)技術(shù)發(fā)展起來的組織化學(xué)分支?；瘜W(xué)分支。 組織化學(xué)是應(yīng)用物理的和化學(xué)的方組織化學(xué)是應(yīng)用物理的和化學(xué)的方法來查明細(xì)胞組織的化學(xué)成分；是用組法來查明細(xì)胞組織的化學(xué)成分；是用組織學(xué)、化學(xué)、物理學(xué)原理研究細(xì)胞組織織學(xué)、化學(xué)、物理學(xué)原理研究細(xì)胞組織的結(jié)構(gòu)、功能與化學(xué)的關(guān)系；是對(duì)細(xì)胞的結(jié)構(gòu)、功能與化學(xué)的關(guān)系；是對(duì)細(xì)胞組織成分的勘察、定位、

17、定性、定量的組織成分的勘察、定位、定性、定量的特征來認(rèn)識(shí)細(xì)胞組織結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系。特征來認(rèn)識(shí)細(xì)胞組織結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系。因此，它具有較強(qiáng)的特征性。因此，它具有較強(qiáng)的特征性。 1. 1. 組織化學(xué)的要求組織化學(xué)的要求 組織化學(xué)是建立在組織細(xì)胞形態(tài)學(xué)、生物物組織化學(xué)是建立在組織細(xì)胞形態(tài)學(xué)、生物物理學(xué)、生物化學(xué)及分子生物學(xué)學(xué)科基礎(chǔ)上的一門理學(xué)、生物化學(xué)及分子生物學(xué)學(xué)科基礎(chǔ)上的一門邊緣學(xué)科，因此組織化學(xué)研究具有如下要求：邊緣學(xué)科，因此組織化學(xué)研究具有如下要求：（1 1要求形態(tài)結(jié)構(gòu)真實(shí)完整。要求形態(tài)結(jié)構(gòu)真實(shí)完整。（2 2要求顯色全過程均屬于化學(xué)反應(yīng)。要求顯色全過程均屬于化學(xué)反應(yīng)。（3 3要求化學(xué)反應(yīng)在組織

18、細(xì)胞的原位被顯示要求化學(xué)反應(yīng)在組織細(xì)胞的原位被顯示（4 4要求弄清化學(xué)成分與形態(tài)結(jié)構(gòu)及空間的關(guān)要求弄清化學(xué)成分與形態(tài)結(jié)構(gòu)及空間的關(guān) 系。系。 2 2研究方法研究方法 組織化學(xué)的研究方法隨著現(xiàn)代物理、化組織化學(xué)的研究方法隨著現(xiàn)代物理、化學(xué)技術(shù)的發(fā)展而不斷更新，不斷增多?？傮w學(xué)技術(shù)的發(fā)展而不斷更新，不斷增多。總體說來，可分為兩大類：一類是分離分析法，說來，可分為兩大類：一類是分離分析法，另一類是原位分析法。另一類是原位分析法。（1 1分離分析法分離分析法 分離分析法是將組織細(xì)胞分離分析法是將組織細(xì)胞的微小器官?gòu)钠鞴?、組織、細(xì)胞內(nèi)原位分離的微小器官?gòu)钠鞴?、組織、細(xì)胞內(nèi)原位分離出來，測(cè)定其化學(xué)成分和分

19、析化學(xué)組成與組出來，測(cè)定其化學(xué)成分和分析化學(xué)組成與組織細(xì)胞的關(guān)系。其中包括勻漿超速離心及分織細(xì)胞的關(guān)系。其中包括勻漿超速離心及分層分析法和顯微解剖分析，即組織切片的微層分析法和顯微解剖分析，即組織切片的微量化學(xué)分析法。量化學(xué)分析法。 （2 2原位分析法原位分析法 組織細(xì)胞在器官原位上不經(jīng)分離，用組織細(xì)胞在器官原位上不經(jīng)分離，用化學(xué)試劑與組織細(xì)胞內(nèi)的某些物質(zhì)進(jìn)行化化學(xué)試劑與組織細(xì)胞內(nèi)的某些物質(zhì)進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)，最終在局部呈現(xiàn)有色反應(yīng)，通過學(xué)反應(yīng)，最終在局部呈現(xiàn)有色反應(yīng)，通過顯微鏡及其他儀器，如分光光度計(jì)、熒光顯微鏡及其他儀器，如分光光度計(jì)、熒光顯微鏡等組織細(xì)胞內(nèi)的化學(xué)反應(yīng)進(jìn)行定位、顯微鏡等組織細(xì)胞內(nèi)的化學(xué)反應(yīng)進(jìn)行定位、定性和定量研究。常用的方法包括：組定性和定量研究。常用的方法包括：組織細(xì)胞吸收光譜分析法。熒光分析法。織細(xì)胞吸收光譜分析法。熒光分析法。放射自顯影術(shù)。放射自顯影術(shù)。 組織中的各種物質(zhì)可籍特殊的化學(xué)組織中的各種物質(zhì)可籍特殊的化學(xué)反應(yīng)被勘定。組織化學(xué)需要各種化學(xué)試反應(yīng)被勘定。組織化學(xué)需要各種化學(xué)試劑，許多著名的組織化學(xué)研究室均有合劑，許多著名的組織化學(xué)研究室均有合成化學(xué)試劑的實(shí)驗(yàn)室，以保證創(chuàng)建或改成化學(xué)試劑的實(shí)驗(yàn)室，以保證創(chuàng)建或改進(jìn)組織化學(xué)的技術(shù)方法。良好的組