三提取和分離學習教案

1、三提取三提取(tq)和分離和分離第一頁，共42頁。第1頁/共41頁第二頁，共42頁。Figure3.1 The basic steps in preparation of total cell DNA from a culture of bacteriaBasic Steps第2頁/共41頁第三頁，共42頁。基本(jbn)步驟：1) 收集細菌細胞2)打碎細胞，釋放內容物3)去掉DNA以外的成分4)DNA溶液的濃縮第3頁/共41頁第四頁，共42頁。第4頁/共41頁第五頁，共42頁。37C，150-250rpm達到(d do)最大濃度2-3109cell/ml, 600nm下的OD值，1OD相當于

2、0.8109cell/ml Figure3.2 Estimation of bacterial cell number by measurement of optical density第5頁/共41頁第六頁，共42頁。Figure3.3 Harvesting bacteria by centrifugation第6頁/共41頁第七頁，共42頁。第7頁/共41頁第八頁，共42頁。Figure3.4 Preparation of a cell extract.第8頁/共41頁第九頁，共42頁。Figure3.5 Removal of protein contaminants by phenol

3、extraction. 第9頁/共41頁第十頁，共42頁。第10頁/共41頁第十一頁，共42頁。Figure3.6 Collecting DNA by ethanol precipitation .第11頁/共41頁第十二頁，共42頁。Figure3.7 The CTAB method for purification of plant DNA十六烷基十六烷基(wn j)三甲三甲基溴化銨基溴化銨第12頁/共41頁第十三頁，共42頁。Figure3.8 The use of an anion-exchange chromatography resin in DNA purification.第1

4、3頁/共41頁第十四頁，共42頁。第14頁/共41頁第十五頁，共42頁。第15頁/共41頁第十六頁，共42頁。Figure3.9 Preparation of a cleared .Sphaeroplast殘壁細胞殘壁細胞(xbo)第16頁/共41頁第十七頁，共42頁。第17頁/共41頁第十八頁，共42頁。Figure3.10 Two conformation of circular double-stranded DNA.第18頁/共41頁第十九頁，共42頁。Figure3.11 Plasmid purification by the alkaline denaturation method

5、.Alkaline denaturation第19頁/共41頁第二十頁，共42頁。第20頁/共41頁第二十一頁，共42頁。Figure3.12 CsCl density gradient centrifugation.CsCl density gradient centrifugation第21頁/共41頁第二十二頁，共42頁。第22頁/共41頁第二十三頁，共42頁。Figure3.13 Partial unwinding of the DNA double helix by EtBr intercalation between adjacent base parirs.EB如何如何(rh)與

6、與DNA結結合合?第23頁/共41頁第二十四頁，共42頁。Figure3.14Purification of plasmiod DNA by EtBr-CsCl density gradient centrifugation如何如何(rh)分離分離質粒質粒DNA？第24頁/共41頁第二十五頁，共42頁。第25頁/共41頁第二十六頁，共42頁。Figure3.15 Plasmid amplification Plasmid amplificationInhibitor of protein synthesis: Chloramphenical, 12h, 第26頁/共41頁第二十七頁，共42頁。

7、第27頁/共41頁第二十八頁，共42頁。第28頁/共41頁第二十九頁，共42頁。第29頁/共41頁第三十頁，共42頁。Figure3.17 Induction of a clts lysogen（溶原菌）（溶原菌） by transferring from 30 to 42第30頁/共41頁第三十一頁，共42頁。Figure3.18 Achieving the right balance between culture age and inoculum size when preparing a sample of a non-lysogenic phage由于缺失修飾，大多數(shù)由于缺失修飾，大

8、多數(shù)基因工程基因工程(jyn gngchng)載體屬于此載體屬于此類型。類型。第31頁/共41頁第三十二頁，共42頁。第32頁/共41頁第三十三頁，共42頁。第33頁/共41頁第三十四頁，共42頁。Figure3.19 Collection of phage particles by polyethylene（聚乙烯）（聚乙烯） glycol（乙二醇）（乙二醇）(PEG) precipitation 第34頁/共41頁第三十五頁，共42頁。Figure3.20 Purification of phage particles by CsCl density gradient centrifugation.第35頁/共41頁第三十六頁，共42頁。第36頁/共41頁第三十七頁，共42頁。第37頁/共41頁第三十八頁，共42頁。Figure3.21 Preparation of M13 DNA from an infected cultu