實(shí)驗(yàn)一 蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)測(cè)定和沉淀反應(yīng)

1、實(shí)驗(yàn)一、蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)測(cè)定和沉淀反應(yīng)實(shí)驗(yàn)一、蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)測(cè)定和沉淀反應(yīng)一、目的1.了解蛋白質(zhì)的兩性解離性質(zhì)2.學(xué)習(xí)測(cè)定蛋白質(zhì)等電點(diǎn)的一種方法3.加深對(duì)蛋白質(zhì)膠體溶液穩(wěn)定因素的認(rèn)識(shí)4.了解沉淀蛋白質(zhì)的幾種方法及其實(shí)用意義二、原理 蛋白質(zhì)是兩性電解質(zhì)。在蛋白質(zhì)溶液中存在下列平衡：等電點(diǎn)等電點(diǎn): :當(dāng)溶液的pH達(dá)到一定數(shù)值時(shí)，蛋白質(zhì)顆粒上正負(fù)電荷的數(shù)目 相等，在電場(chǎng)中，蛋白質(zhì)既不向陰極移動(dòng)，也不向陽極移動(dòng)，此時(shí)溶液的pH值稱為此種蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)。 四、操作步驟n（一）酪蛋白等電點(diǎn)的測(cè)定（1）取同樣規(guī)格的試管4支，加入各試劑，然后混勻。此時(shí) 4個(gè)管的pH依次為5.9、5.5、4.7、3.5。n（2）

2、各加酪蛋白的醋酸鈉溶液1mL， 加一管，搖勻一管。觀察其混濁度。靜置10分鐘后，再觀察其混濁度。最混濁的一管pH即為酪蛋白的等電點(diǎn)。 （二）蛋白質(zhì)的沉淀及變性1、蛋白質(zhì)的鹽析 n蛋白質(zhì)的鹽析: 無機(jī)鹽（硫酸銨、硫酸鈉、氯化鈉等）的濃溶液能析出蛋白質(zhì)。鹽的濃度不同，析出的蛋白質(zhì)也不同。如球蛋白可在半飽和硫酸銨溶液中析出，而清蛋白則在飽和硫酸銨溶液中才能析出。n鹽溶:由鹽析獲得的蛋白質(zhì)沉淀，當(dāng)降低其鹽類濃度時(shí)，又能再溶解，故蛋白質(zhì)的鹽析作用是可逆過程。n于試管中加入蛋白質(zhì)溶液5mL ，再加等量的飽和硫酸銨溶液，混勻后靜置數(shù)分鐘則析出球蛋白的沉淀。倒出少量混濁沉淀，加少量水，觀察是否溶解，為什么？將

3、管內(nèi)容物過濾，向?yàn)V液中添加硫酸銨粉末到不再溶解為止。此時(shí)析出沉淀為清蛋白。取出部分清蛋白，加少量蒸餾水，觀察沉淀的再溶解。2、重金屬離子沉淀蛋白質(zhì) n 重金屬離子與蛋白質(zhì)結(jié)合成不溶于水的復(fù)合物。取1支試管，加入蛋白質(zhì)溶液2mL，再加3%硝酸銀溶液12滴，振蕩試管，有沉淀產(chǎn)生。放置片刻，傾去上清液，向沉淀中加入少量的水，沉淀是否溶解？為什么？3、某些有機(jī)酸沉淀蛋白質(zhì) n 取1支試管，加入蛋白質(zhì)溶液2mL，再加入1ml5%三氯乙酸溶液，振蕩試管，觀察沉淀的生成。放置片刻傾出清液，向沉淀中加入少量水，觀察沉淀是否溶解。4、有機(jī)溶劑沉淀蛋白質(zhì)n 取1支試管，加入2mL蛋白質(zhì)溶液，再加入2mL95%乙醇。觀察沉淀的生成（如果沉淀不明顯，加點(diǎn)NaCl，混勻。5、乙醇引起的變性與沉淀 n取3支試管，編號(hào)。依下表順序加入試劑五、注意事項(xiàng)n等電點(diǎn)測(cè)定的實(shí)驗(yàn)要求各種試劑的濃度和加入量必須相當(dāng)準(zhǔn)確。六、實(shí)驗(yàn)報(bào)告n以表格形式總結(jié)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，包括觀察到的現(xiàn)象