羅漢果止咳糖漿起草說明

1、羅漢果止咳糖漿起草說明【名稱】 羅漢果止咳糖漿采用主要藥味縮寫加功效加劑型命名，漢語拼音為L(zhǎng)uohanguozhiketangjiang?！咎幏健?見正文【制法】 見正文。【性狀】 根據(jù)多批中試樣品內(nèi)容物描述。內(nèi)容物為棕黃色至棕色的澄清液體；味甜、微苦、涼?！捐b別】（1） 羅漢果的TLC鑒別：除正文所使用的展開劑外，以正丁醇-甲醇-水(8：2：3)為展開劑進(jìn)行驗(yàn)證，亦得到相似分離效果。見圖1、2。圖1 羅漢果止咳糖漿中羅漢果TLC色譜 圖2 羅漢果止咳糖漿中羅漢果TLC色譜（比對(duì)）1. 羅漢果的陰性對(duì)照液；2、3、4.供試品溶液； 1.羅漢果的陰性對(duì)照液；2、3、4.供試品溶液5.羅漢果對(duì)照藥

2、材溶液；6.羅漢果皂苷V對(duì)照 5.羅漢果對(duì)照藥材溶液；6.羅漢果皂苷V對(duì)照 品溶液。展開劑。正丁醇-乙醇-水(8：2：3)（放 品溶液。展開劑。正丁醇-甲醇-水（8：2：3）置過夜，取下層液）；顯色劑：2香草醛的10 （放置過夜，去下層液）；顯色劑：2%香草醛的硫酸乙醇溶液 10%硫酸乙醇溶液 （2）枇杷葉的TLC鑒別: 枇杷葉所含熊果酸為其主要有效成分，以熊果酸對(duì)照品及枇杷葉對(duì)照藥材（購(gòu)自中國(guó)食品藥品生物制品檢定研究院）作為對(duì)照進(jìn)行薄層色譜鑒別，結(jié)果陰性樣品無干擾。除正文所使用的展開劑外，以乙苯-丙酮（5:1）為展開劑進(jìn)行驗(yàn)證，亦得到相似分離效果。見圖3、4。圖3 羅漢果止咳糖漿中枇杷葉TL

3、C色譜 圖4 羅漢果止咳糖漿中枇杷葉TLC色譜（比對(duì)）1. 枇杷葉的陰性對(duì)照液；2、3、4.供試品溶液； 1.枇杷葉的陰性對(duì)照液；2、3、4.供試品溶液；5枇杷葉對(duì)照藥材溶液；6.熊果酸對(duì)照品溶液。 5枇杷葉對(duì)照藥材溶液；6.熊果酸對(duì)照品溶液。展開劑。甲苯-丙酮(5：1)（放置過夜，取下層 展開劑。乙苯-丙酮(5：1)（放置過夜，取下層液）；顯色劑：10硫酸乙醇溶液 液）；顯色劑：10硫酸乙醇溶液 （3）桑白皮的TLC鑒別：以桑白皮對(duì)照藥材（購(gòu)自中國(guó)食品藥品生物制品檢定研究院）作為對(duì)照進(jìn)行薄層色譜鑒別，結(jié)果陰性樣品無干擾。除正文所使用的展開劑外，以甲苯-乙酸乙酯 -甲酸（5：2：1）為展開劑進(jìn)

4、行驗(yàn)證，亦得到相似分離效果。見圖5、6。 圖5 羅漢果止咳糖漿中桑白皮TLC色譜 圖6 羅漢果止咳糖漿中桑白皮TLC色譜（比對(duì)）1.桑白皮的陰性對(duì)照液；2、3、4.供試品溶 1.桑白皮的陰性對(duì)照液；2、3、4.供試品溶液；5.液；5.桑白皮對(duì)照藥材溶液。展開劑。醋 桑白皮對(duì)照藥材溶液。展開劑。甲苯乙酸乙酯酸 甲酸（5：2：1）（放置過夜，取下層液） （4）白前的鑒別：取本品粗粉2g，加70%乙醇10ml，加熱回流1小時(shí)，濾過。取濾液1ml，蒸干，殘?jiān)哟佐?ml使溶解，再加硫酸1滴，柳葉白前顯紅紫色，放置后變?yōu)闉蹙G色；蕪花葉白前顯棕紅色，放置后不變色。（5）百部的鑒別：取本品粉末5g，加70%

5、乙醇50ml，加熱回流1小時(shí)，濾過，濾液蒸去乙醇，殘?jiān)訚獍痹囈赫{(diào)節(jié)pH值至1011，再加三氯甲烷5ml振搖提取，分取三氯甲烷層，蒸干，殘?jiān)?%鹽酸溶液5ml使溶解，濾過。濾液分為兩份：一份中滴加碘化鉍鉀試液，生成橙紅色沉淀；另一份中滴加硅鎢酸試液，生成乳白色沉淀。（6）桔梗的TLC鑒別：以桔梗對(duì)照藥材（購(gòu)自中國(guó)食品藥品生物制品檢定研究院）作為對(duì)照進(jìn)行薄層色譜鑒別，結(jié)果陰性樣品無干擾。除正文所使用的展開劑外，以二氯甲烷-乙醚（3：1）為展開劑進(jìn)行驗(yàn)證，亦得到相似分離效果。見圖7、8。 圖7 羅漢果止咳糖漿中桔梗TLC色譜 圖8 羅漢果止咳糖漿中桔梗TLC色譜（比對(duì)）1.桔梗的陰性對(duì)照液；2、

6、3、4.供試品 1.桔梗的陰性對(duì)照液；2、3、4.供試品溶液；5.溶液；5.桔梗對(duì)照藥材溶液。展開劑。 桔梗對(duì)照藥材溶液。展開劑。二氯甲烷乙醚三氯甲烷乙醚（2:1）；顯色劑：10 （3:1）；顯色劑：10硫酸乙醇溶液硫酸乙醇溶液（7） 薄荷素油的TLC鑒別：以薄荷素油對(duì)照物（購(gòu)自中國(guó)食品藥品生物制品檢定研究院）作為對(duì)照進(jìn)行薄層色譜鑒別，結(jié)果陰性樣品無干擾（置紫外燈下觀察）。除正文所使用的展開劑外，以乙苯-乙酸乙酯（19:1）為展開劑進(jìn)行驗(yàn)證，亦得到相似的分離效果。見圖9、10。 圖9 羅漢果止咳糖漿中薄荷素油TLC色譜 圖10 羅漢果止咳糖漿中薄荷素油TLC色譜（比對(duì)）1.薄荷油的陰性對(duì)照液；

7、2、3、4.供試品溶液； 1.薄荷油的陰性對(duì)照液；2、3、4.供試品溶液；5.薄荷素油對(duì)照提取物。展開劑。甲苯-乙酸乙 5.薄荷素油對(duì)照提取物。展開劑。乙苯-乙酸乙酯(19：1)（放置過夜，取下層液）；顯色劑： 酯(19：1)（放置過夜，取下層液）；顯色劑： 茴香醛試液 茴香醛試液【檢查】(1) 相對(duì)密度：依據(jù)中國(guó)藥典（2010年版一部附錄VII A）相對(duì)密度測(cè)定法進(jìn)行測(cè)定，具有方法如下：取潔凈、干燥并精密稱定重量的比重瓶，裝滿供試品（溫度應(yīng)低于20或各品種項(xiàng)下規(guī)定的溫度）后，裝上溫度計(jì)（瓶中應(yīng)無氣泡），置20（或各品種項(xiàng)下規(guī)定的溫度）的水浴中放置若干分鐘，使內(nèi)容物的溫度達(dá)到20（或各品種項(xiàng)下

8、規(guī)定的溫度），用濾紙除去溢出側(cè)管的液體，立即蓋上罩。然后將比重瓶自水浴中取出，再用濾紙將比重瓶的外面擦凈，精密稱定，減去比重瓶的重量，求得供試品的重量后，將供試品傾去，洗凈比重瓶，裝滿新沸過的冷水，再照上法測(cè)得同一溫度時(shí)水的重量，按供試品的密度=供試品重量/水重量 計(jì)算，即得。均不低于1.13。 (2) PH值：依據(jù)中國(guó)藥典（2010年版一部附錄 G）pH值測(cè)定法進(jìn)行測(cè)定，均符合規(guī)定。(3) 裝量差異：依據(jù)中國(guó)藥典（2010年版一部附錄I H）糖漿劑通則進(jìn)行檢查，具體方法如下：取供試品5支，將內(nèi)容物分別倒入經(jīng)標(biāo)化的量入式量筒內(nèi)，盡量?jī)A凈。在室溫下檢視，每支裝量與標(biāo)示裝量相比較，少于標(biāo)示裝量的不

9、得多于1支，并不得少于標(biāo)示裝量的95。多劑量灌裝的糖漿劑，照最低裝量檢查法（附錄 C)檢查，均符合規(guī)定。(4) 微生物限度：依據(jù)中國(guó)藥典（2010年版一部附錄 C）微生物限度檢查法進(jìn)行檢查，均符合規(guī)定?！竞繙y(cè)定】 羅漢果為本方的君藥，羅漢果皂苷V為其主要有效成分之一，故選擇羅漢果皂苷V作為控制本品質(zhì)量的有效成分，參考中國(guó)藥典（2010版一部）羅漢果藥材的測(cè)定方法，建立了高效液相色譜法，用蒸發(fā)光散射檢測(cè)器測(cè)定本品中羅漢果皂苷V含量的方法，具有分離效果好、靈敏度高、準(zhǔn)確度好等優(yōu)點(diǎn) 1.儀器與藥品 儀器：Waters-2695高效液相色譜儀，Alltech蒸發(fā)光散射檢測(cè)器（ELSD），色譜柱以十八

10、烷基鍵合相為填充劑Diamonsil(200mm*4.6mm，5um)。 試劑：乙腈為色譜純，水為重蒸餾水，其他試劑均為分析純。 羅漢果皂苷V由中國(guó)食品藥品生物制品檢定研究院提供（供含量測(cè)定用），在選定色譜條件分離后，按歸一化法計(jì)算含量為99.5%以上。使用前105干燥至恒重。 2.色譜條件 Diamonsil(200mm*4.6mm，5um)色譜柱，ODS預(yù)柱；乙腈-水（23：77）為流動(dòng)相；流速：1ml/min；ELSD參數(shù)：飄移管溫度為100，N2流速為2.1/min；柱溫為35。 在此色譜條件下，羅漢果皂苷V和樣品中其他組分色譜峰基線分離，與其相鄰色譜峰的分離度大于1.5；按羅漢果皂苷

11、V計(jì)算，理論塔板數(shù)（N）為3000以上；拖尾因子（T）為1.03；同時(shí)取陰性供試品溶液進(jìn)樣，結(jié)果表明，陰性供試品在羅漢果皂苷V色譜峰位置處于無相應(yīng)峰出現(xiàn)。其色譜圖分別見圖11、12、13。 圖11 對(duì)照品色譜圖 圖12 供試品色譜圖 圖13 陰性樣品色譜圖 3.供試品溶液的制備（見正文） （1）提取法考察： 精密稱取本品0.5g，加甲醇50ml，超聲處理20min和索氏提取器提取2小時(shí)，濾過，濾液蒸干，以下操作方法同供試品溶液制備。結(jié)果見表1。 表1 不同提取方法羅漢果皂苷V含量測(cè)定結(jié)果（n=3)提取方法面積1面積2面積3羅漢果皂苷V含量（mg/g）超聲索氏(2) 提取時(shí)間考察 精密稱取本品0

12、.5g，加甲醇50ml，分別超聲1小時(shí)、2小時(shí)、3小時(shí)，濾過，濾液蒸干，以下操作同供試品溶液制備。結(jié)果見表2。表2 不同提取時(shí)間羅漢果皂苷V含量的測(cè)定結(jié)果時(shí)間（小時(shí)）面積1面積2面積3羅漢果皂苷V含量（mg/g）123(3) 提取溶劑的考察：精密稱取本品內(nèi)容物0.5g，分別加甲醇、水和70%乙醇各50ml，超聲處理20min，濾過，濾液蒸干，以下操作同供試品溶液的制備。結(jié)果見表3。 表3 不同提取溶劑羅漢果皂苷V含量測(cè)定結(jié)果（n=3）溶劑面積1面積2面積3羅漢果皂苷V含量（mg/g）水70%乙醇甲醇 4. 線性范圍的考察 精密稱取經(jīng)105干燥2小時(shí)的羅漢果皂苷V對(duì)照品2.5mg，置10ml量瓶

13、中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取2ul、4ul、6ul、8ul、10ul、12ul，分別進(jìn)樣分析。以進(jìn)樣量（ug)的對(duì)數(shù)值為橫坐標(biāo)，峰面積A的對(duì)數(shù)值為縱坐標(biāo)，在212ug，lgA與lgW呈良好的線性關(guān)系。回歸方程為lgA=1.5698lgW+5.6738，r=0.9999(n=6)，因?yàn)闃?biāo)準(zhǔn)曲線不過原點(diǎn)，所以樣品測(cè)定采用外標(biāo)二點(diǎn)法計(jì)算。見表4及表5。表4 羅漢果皂苷V對(duì)照品測(cè)定結(jié)果進(jìn)樣量（ug）24681012峰面積表5 羅漢果皂苷V對(duì)照品測(cè)定結(jié)果對(duì)數(shù)值進(jìn)樣量（ug）0.30100.60200.77810.903111.0792峰面積 5. 精密度試驗(yàn)(1)重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批(批

14、號(hào)：050327)樣品2.0g，共六份，精密稱定，按正文方法制備六份供試品溶液，分別測(cè)定含量，結(jié)果見下表點(diǎn)樣位置含量RSD%123456（2）中間精密度：取本品，由兩位實(shí)驗(yàn)者分別在不同時(shí)間，不同儀器上測(cè)試，測(cè)定結(jié)果見下表含量?jī)x器第一人第一天第二人第二天第三人第三天第四人第四天RSD%6.專屬性考察 按以上色譜條件，分別測(cè)試羅漢果皂苷V對(duì)照品、供試品及陰性樣品圖譜，結(jié)果表明，陰性樣品在羅漢果皂苷V對(duì)照品色譜峰相應(yīng)位置無色譜峰，陰性無干擾。見圖14、15、16。 圖14 對(duì)照品色譜圖 圖15 供試品色譜圖 圖16 陰性樣品色譜圖7. 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取樣品供試液（批號(hào)：050223）與不同時(shí)間，分別進(jìn)樣20ul，測(cè)得樣品中羅漢果皂苷V峰面積的RSD<2%，結(jié)果見表8。 表8 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果（n=2）時(shí)間（小時(shí)）面積RSD%0246812 8. 回收率試驗(yàn) 精密稱定已知含量的樣品（批號(hào)：050214）約1.1g，分別加入對(duì)照品溶液（1.000mg/ml）0.3ml、0.4ml、0.5ml，按上述供試品制備方法及色譜條件，計(jì)算回收率，結(jié)果見表9。 表9 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果編號(hào)樣品重（mg）樣品含量（mg）加羅漢果皂苷V（mg）測(cè)得量（mg）回收率（%）平均回收率（%）RSD(%)1234569. 樣品測(cè)定 分別精密吸取對(duì)照液