氯霉素酶聯(lián)免疫檢測試劑盒組織生乳蜂蜜飼料蛋

1、氯霉素酶聯(lián)免疫檢測試劑盒說明書【反應(yīng)原理】氯霉素酶聯(lián)免疫檢測試劑盒，主要是利用抗原與抗體的特異性免疫化學(xué)反應(yīng)的基本原理來進行的，換句話說，就是利用酶標(biāo)記物與樣品中的氯霉素與微孔中的抗體進行競爭反應(yīng)。在整個反應(yīng)當(dāng)中，如果樣品中的氯霉素殘留的越多，相對地就會競爭反應(yīng)越多的酶標(biāo)記物，使得能結(jié)合上抗體的酶標(biāo)記物相對地減少，用TMB底物顯色，樣品中的氯霉素含量與樣品的吸光度值呈反比，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出氯霉素含量?！驹噭┖薪M份】1、酶標(biāo)板：8孔/條，12條/板2、氯霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液(1.5 mL / 瓶)：0 ppb、0.025 ppb、0.05 ppb、0.1 ppb、0.3 ppb、0.6 ppb ;

2、 10ppb3、10倍濃縮樣品稀釋液 30 mL 4、10倍濃縮清洗液 30 mL 5、氯霉素酶標(biāo)記物 8 mL 6、顯色液 12 mL 7、反應(yīng)終止液 12 mL 【試劑盒技術(shù)指標(biāo)】試劑盒靈敏度： 0.025ppb樣本檢測下限：生乳0.1 ppb蜂蜜0.1 ppb蜂王漿0.1 ppb血清 0.025 ppb魚蝦、蟹、雞肉、豬肉0.025 ppb飼料0.25 ppb蛋 0.025 ppb交叉反應(yīng)率：氯霉素 100%左旋霉素 1.4%慶大霉素<0.1%甲砜霉素 3.1%四環(huán)素<0.1%青霉素<0.1%磺胺甲嘧啶<0.1%回收率：生乳70130%蜂蜜70130%蜂王漿701

3、30%魚、蝦、蟹、烏賊、雞及豬肉70130%飼料70130%血清70130%蛋 70130%批間、批內(nèi)變異系數(shù)：CV10%【所需儀器和試劑】所需儀器：酶標(biāo)儀、離心機、均質(zhì)機、微量移液器(單道20µl-200µl、100µl-1000µl、多道250µl)所需試劑：乙酸乙酯、正己烷、0.5 N 鹽酸溶液、0.5 N 氫氧化鈉溶液【注意事項】1、使用前請先將試劑盒回溫至室溫 (置于室溫60分鐘以上)，各溶液皆搖勻后方可使用。2、回溫后，取出所需酶標(biāo)板條，將剩余未測的ELISA孔條立即放回鋁箔袋中，置于4 保存。3、10倍樣品稀釋液與10倍清洗液請用

4、蒸餾水稀釋10倍方可使用。 (如1 mL濃縮稀釋液加9 mL蒸餾水) 稀釋后的1×樣品稀釋液和1×清洗液可于4 保存一周。4、萃取流程請使用P.P.材質(zhì)的15 mL離心管以免腐蝕。5、反應(yīng)終止液含0.5 N HCl，請小心操作。6、氯霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液含氯霉素，請小心操作。7、本試劑盒的所有試劑出廠前均做過完整的測試，請使用試劑盒提供的藥品及試劑，勿任意更換。8、ELISA所得的氯霉素濃度若低于該樣品檢品敏感度即可視為該樣品背景值，無須回乘稀釋倍數(shù)。反之若所得的氯霉素濃度若高于該樣品檢品敏感度，即可能為氯霉素陽性樣品，建議使用再其它檢測方法檢測，如GC/MS等。9、進行生乳的檢品

5、制備時，在ELISA操作時中請確實輕敲酶標(biāo)板一到二分鐘(D.操作步驟的第四點)。10、陰性生乳的OD 450吸光值可能會高于標(biāo)準(zhǔn)品0 ppb的吸光值但不會影響對氯霉素陽性樣品的判定?！緲颖厩疤幚怼繕悠诽幚砬绊氈海?）實驗中必須使用一次性吸頭，在吸取不同的試劑時要更換吸頭。（2）實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈，必要時可對實驗器具進行清潔，以避免污染干擾實驗結(jié)果。樣品處理 ：本試劑可檢測生乳、蜂蜜、蜂王漿、魚、蝦、蟹、烏賊、雞肉、豬肉、飼料及血清等殘留的氯霉素；1、待測物為生乳，請先參考注意事項第9,10點。n 現(xiàn)配萃取稀釋液：10倍濃縮樣品稀釋液用蒸餾水稀釋10倍后使用。(如1 mL濃縮樣

6、品稀釋液加9 mL蒸餾水稀釋)n 取250 µL乳品放置1.5 mL微量小管中。n 加入750 µL現(xiàn)配一倍樣品稀釋液，快速震蕩 30秒鐘后備用。稀釋倍數(shù): 42、待測物為蜂蜜，則按以下方法進行萃?。簄 取2 g蜂蜜、4 mL蒸餾水與4 mL乙酸乙酯置入15 mL離心管中，震蕩30秒。n 持續(xù)上下顛倒該離心管10分鐘，使其充分混合均勻。n 用離心機離心1700 x g 10分鐘，取1 mL上層液(乙酸乙酯)至10 mL玻璃管中，于50 下，利用氮氣將有機溶劑吹干。n 加入0.5 mL樣品稀釋液，震蕩30秒鐘后備用。稀釋倍數(shù): 13、待測物為蜂王漿，則按以下方法進行萃取：n

7、取2 g蜂王漿、3 mL 0.5 M NaOH及8 mL乙酸乙酯置入15 mL離心管中，震蕩 30秒。n 持續(xù)上下顛倒該離心管10 分鐘，使其充分混合均勻。n 用離心機離心1700 x g 10分鐘，取2 mL上層液(乙酸乙酯)至10 mL玻璃管中，于50 下，利用氮氣將有機溶劑吹干。n 加入0.5 mL樣品稀釋液，震蕩30秒鐘后備用。稀釋倍數(shù): 14、待測物為魚、蝦、蟹、烏賊、雞肉、豬肉及血清，則按以下方法進行萃取：n 將3克已均質(zhì)的樣品放入15 mL離心管中，再加入6 mL乙酸乙酯，震蕩5分鐘。n 用離心機離心1700 x g 10分鐘，取2 mL上層液(乙酸乙酯)至10 mL玻璃管中，于

8、50 下，利用氮氣將有機溶劑吹干。n 在此玻璃管中加入正己烷1 mL，先將殘余物完全溶解后，再加入1 mL樣品稀釋液，震蕩30秒鐘。n 用離心機離心1700 x g 10分鐘，利用吸管吸去包含中間乳化層部分的上層液(正己烷)，再吸取下層液(水層)備用。稀釋倍數(shù): 1若待測物為白蝦可按以下流程將樣品做8倍濃縮以增加檢品敏感度n 將6克已均質(zhì)的樣品放入15 mL離心管中，再加入6 mL乙酸乙酯，震蕩5分鐘。n 用離心機離心1700 x g 10分鐘，取4 mL上層液(乙酸乙酯)至10 mL玻璃管中，于50 下，利用氮氣將有機溶劑吹干。n 在此玻璃管中加入正己烷2 mL，先將殘余物完全溶解后，再加入

9、0.5 mL樣品稀釋液，震蕩30秒鐘。n 用離心機離心1700 x g 10分鐘，利用吸管吸去包含中間乳化層部分的上層液(正己烷)，再吸取下層液(水層)備用。稀釋倍數(shù): 0.1255、待測物為飼料，則按以下方法進行萃取：n 取2 g飼料與4 mL乙酸乙酯置入15 mL離心管中，震蕩30秒。n 持續(xù)上下顛倒該離心管10分鐘，使其充分混合均勻。n 用離心機離心1700 x g 10分鐘，取1 mL上層液(乙酸乙酯)至10 mL玻璃管中，于50 下，利用氮氣將有機溶劑吹干。n 在此玻璃管中加入正己烷1 mL，先將殘余物完全溶解后，再加入0.5 mL樣品稀釋液，震蕩30秒鐘。n 用離心機離心1700

10、x g 10分鐘，利用吸管吸去包含中間乳化層部分的上層液(正己烷)，再吸取下層液(水層)稀釋10倍后(如50 µL下層液加450 µL樣品稀釋液)備用。稀釋倍數(shù): 106、待測物為全蛋，則按以下方法進行萃?。簄 取1 g全蛋液，加入 0.5N HCl 0.5 mL后快速震蕩30秒。n 加入4 mL乙酸乙酯后快速震蕩30秒使其混合均勻。n 用離心機離心1700 x g 10分鐘，取2 mL上層液(乙酸乙酯)至10 mL玻璃管中，于50 下，利用氮氣將有機溶劑吹干。n 在此玻璃管中加入正己烷1 mL，先將殘余物完全溶解后，再加入0.5 mL樣品稀釋液，震蕩30秒鐘。n 用離心機

11、離心1700 x g 10分鐘，利用吸管吸去包含中間乳化層部分的上層液(正己烷)，再吸取下層液(水層)備用。稀釋倍數(shù): 1注1:若乳化現(xiàn)象太嚴(yán)重，看不到下層液有澄清部分，請先將玻璃管中大部分上層液取出，剩余乳化部份再利用隔水加熱80100 約3分鐘后再離心，即可改善乳化現(xiàn)象。注2:因為利用乙酸乙酯萃取的流程可能有溶劑的背景值過高的現(xiàn)象，因此建議若待測物使用乙酸乙酯來做萃取，可多做一個溶劑背景值的樣品。待測物的濃度等于所得濃度減去溶劑背景值的濃度再乘以稀釋倍數(shù)。注3:如何得到溶劑背景值的濃度如該待測物的萃取流程，但不加待測物，從把適量的乙酸乙酯移入玻璃管中做起到完成整個萃取流程。之后同待測物一起

12、以ELISA做測試?！緳z測程序】本產(chǎn)品的酶標(biāo)記物與氯霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液均直接使用，無需再稀釋 1、將標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔按序編號后分別分別加入100 µL 氯霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液。 2、在其他的微孔加入100 µL已完成前處理的樣品溶液。 3、再于每一微孔另加入50 µL已完全回溫的酶標(biāo)記物。 4、輕敲酶標(biāo)板四周，使其充分混合后于室溫下避光靜置1小時。 5、將微孔中的反應(yīng)液甩掉，再將已稀釋清洗液（參考注意事項3）加滿每一微孔后甩掉，重復(fù)3次。 6、最后一次甩掉清洗液后，在吸水紙上拍干。 7、于每一微孔加入顯色液100 µL后，輕敲酶標(biāo)板四周，使其充分混合。 8、于室溫下避光

13、靜置20分鐘。 9、加入反應(yīng)終止液，每一微孔加入100 µL。 10、酶標(biāo)儀以單波長450 nm或雙波長450 nm / 650 nm讀值?！窘Y(jié)果判定】1、定性判定：用樣品的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)值比較即可得出樣本所含氯霉素濃度范圍（ng/ml）。假設(shè)樣品1的吸光度值為0.313，樣品2的吸光度值為1.032，標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值分別是：0ppb為1.892；0.025ppb為1.501；0.05ppb為1.175；0.1ppb為0.751； 0.3ppb為0.421； 0.6ppb為0.198。則樣品1的濃度范圍0.3ppb-0.6ppb；樣品2的濃度范圍0.05ppb-0.1ppb。（再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)）2、定量判定：所獲得的每個濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣本吸光度值的平均值（B）除以第一個標(biāo)準(zhǔn)（0標(biāo)準(zhǔn)）的吸光度值（B0）再乘以100%，即百分吸光度值。百分吸光度值（%）B×