百合的組織培養(yǎng)ppt課件

1、百合的組織培養(yǎng)百合的組織培養(yǎng)種子生產(chǎn)與經(jīng)營(yíng)種子生產(chǎn)與經(jīng)營(yíng)11001班班閆重陽(yáng)閆重陽(yáng)百合花的簡(jiǎn)介百合花的簡(jiǎn)介 種類(lèi)：百合科屬多年生草本鱗莖植物種類(lèi)：百合科屬多年生草本鱗莖植物 原產(chǎn)地：澳洲原產(chǎn)地：澳洲 它是著名的球根花卉它是著名的球根花卉 主要分布在北半球的溫帶和寒帶地區(qū)，少數(shù)種類(lèi)主要分布在北半球的溫帶和寒帶地區(qū)，少數(shù)種類(lèi)分布在熱帶高海拔地區(qū)。分布在熱帶高海拔地區(qū)。 形態(tài)特征形態(tài)特征多年生球根草本花卉，株高多年生球根草本花卉，株高4060cm，還有高達(dá)，還有高達(dá)1m以上的。莖直立，不分枝以上的。莖直立，不分枝，草綠色，草綠色 莖稈基部帶紅色或紫褐色斑點(diǎn)。莖稈基部帶紅色或紫褐色斑點(diǎn)。 地下具鱗莖，

2、鱗莖由闊卵形或披針形，白色或淡黃色，直徑由地下具鱗莖，鱗莖由闊卵形或披針形，白色或淡黃色，直徑由68cm的肉質(zhì)鱗的肉質(zhì)鱗片抱合成球形，外有膜質(zhì)層。多數(shù)須根生于球基部。單葉，互生，狹線形，無(wú)葉片抱合成球形，外有膜質(zhì)層。多數(shù)須根生于球基部。單葉，互生，狹線形，無(wú)葉柄，直接包生于莖稈上，葉脈平行。有的品種在葉腋間生出紫色或綠色顆粒狀珠柄，直接包生于莖稈上，葉脈平行。有的品種在葉腋間生出紫色或綠色顆粒狀珠芽，其珠芽可繁殖成小植株?；ㄖ谇o稈頂端，呈總狀花序，簇生或單生，花芽，其珠芽可繁殖成小植株?；ㄖ谇o稈頂端，呈總狀花序，簇生或單生，花冠較大，花筒較長(zhǎng)，呈漏斗形喇叭狀，六裂無(wú)萼片，因莖稈纖細(xì)，花

3、朵大，開(kāi)放冠較大，花筒較長(zhǎng)，呈漏斗形喇叭狀，六裂無(wú)萼片，因莖稈纖細(xì)，花朵大，開(kāi)放時(shí)常下垂或平伸；花樣，因品種不同而色彩多樣，多為黃色、白色、粉紅、橙紅時(shí)常下垂或平伸；花樣，因品種不同而色彩多樣，多為黃色、白色、粉紅、橙紅，有的具紫色或黑色斑點(diǎn)，也有一朵花具多種顏色的，極美麗?；ò暧衅秸沟模械木咦仙蚝谏唿c(diǎn)，也有一朵花具多種顏色的，極美麗。花瓣有平展的，有向外翻卷的，故有有向外翻卷的，故有“卷丹美名。有的花味濃香，故有卷丹美名。有的花味濃香，故有“麝香百合之稱(chēng)?；晗惆俸现Q(chēng)?；浣Y(jié)長(zhǎng)橢圓形蒴果。落結(jié)長(zhǎng)橢圓形蒴果。 生生長(zhǎng)長(zhǎng)習(xí)習(xí)性性性喜濕潤(rùn)、光照、要求肥沃、富含腐性喜濕潤(rùn)、光照、要求肥沃、富

4、含腐殖質(zhì)、土層深厚、排水性極為良好的砂殖質(zhì)、土層深厚、排水性極為良好的砂質(zhì)土壤，質(zhì)土壤， 多數(shù)品種宜在微酸性至中性土壤中生長(zhǎng)多數(shù)品種宜在微酸性至中性土壤中生長(zhǎng)。百合喜涼爽潮濕環(huán)境，日光充足的地。百合喜涼爽潮濕環(huán)境，日光充足的地方、略蔭蔽的環(huán)境對(duì)百合更為適合。忌方、略蔭蔽的環(huán)境對(duì)百合更為適合。忌干旱、忌酷暑，它的耐寒性稍差些。百干旱、忌酷暑，它的耐寒性稍差些。百合生長(zhǎng)、開(kāi)花溫度為合生長(zhǎng)、開(kāi)花溫度為1624，低于，低于5或高于或高于30生長(zhǎng)幾乎停止，生長(zhǎng)幾乎停止，10以以上植株才正常生長(zhǎng)，超過(guò)上植株才正常生長(zhǎng)，超過(guò)25時(shí)生長(zhǎng)又時(shí)生長(zhǎng)又停滯，如果冬季夜間溫度低于停滯，如果冬季夜間溫度低于5持續(xù)持續(xù)5

5、7天，花芽分化、花蕾發(fā)育會(huì)受到嚴(yán)重天，花芽分化、花蕾發(fā)育會(huì)受到嚴(yán)重影響，推遲開(kāi)花甚至盲花、花裂。百合影響，推遲開(kāi)花甚至盲花、花裂。百合喜肥沃、腐殖質(zhì)多深厚土壤，最忌硬粘喜肥沃、腐殖質(zhì)多深厚土壤，最忌硬粘土；排水良好的微酸性土壤為好，土壤土；排水良好的微酸性土壤為好，土壤pH值為值為5.56.5。 關(guān)于百合的組織培養(yǎng)關(guān)于百合的組織培養(yǎng)最早是最早是Dobreaux等人等人1950首次用純白百合首次用純白百合Liliumcandidum的花的花蕾成功地誘導(dǎo)出小鱗莖。蕾成功地誘導(dǎo)出小鱗莖。黃濟(jì)明黃濟(jì)明19791984對(duì)對(duì)25個(gè)種或品種進(jìn)行了組培試驗(yàn)，證明百合的珠芽、個(gè)種或品種進(jìn)行了組培試驗(yàn)，證明百合的

6、珠芽、鱗片、鱗莖盤(pán)、根、莖、葉、莖尖、花梗、花柱和未成熟胚等外植體均能被鱗片、鱗莖盤(pán)、根、莖、葉、莖尖、花梗、花柱和未成熟胚等外植體均能被促進(jìn)形態(tài)發(fā)生。新美芳二促進(jìn)形態(tài)發(fā)生。新美芳二1980對(duì)百合鱗片、花被片、花絲、花柄等也對(duì)百合鱗片、花被片、花絲、花柄等也組培成功，認(rèn)為開(kāi)花時(shí)各花器官和莖所形成小鱗莖的能力最高。組培成功，認(rèn)為開(kāi)花時(shí)各花器官和莖所形成小鱗莖的能力最高。程治英等人程治英等人19912019對(duì)對(duì)30多種或品種的百合進(jìn)行組培證實(shí)的結(jié)果如下：多種或品種的百合進(jìn)行組培證實(shí)的結(jié)果如下：（1用百合根、葉作為外植體，也與鱗片一樣，不同部位分化叢芽的能力用百合根、葉作為外植體，也與鱗片一樣，不同

7、部位分化叢芽的能力都是近軸端大于遠(yuǎn)軸端。都是近軸端大于遠(yuǎn)軸端。（2鱗莖鱗片分化能力分化苗的頻率和速度都是外部大于內(nèi)部。雜種鱗莖鱗片分化能力分化苗的頻率和速度都是外部大于內(nèi)部。雜種品種的分化能力大于野生種，低海拔種大于高海拔種。鱗片組培得到小鱗莖品種的分化能力大于野生種，低海拔種大于高海拔種。鱗片組培得到小鱗莖的試管鱗片其分化能力大于原始培養(yǎng)鱗片的分化能力。的試管鱗片其分化能力大于原始培養(yǎng)鱗片的分化能力。 有效的組培方法有效的組培方法 1、培養(yǎng)基配方、培養(yǎng)基配方 誘導(dǎo)培養(yǎng)基：誘導(dǎo)培養(yǎng)基：MS+BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L 增殖培養(yǎng)基：增殖培養(yǎng)基：MS+BA0.5mg/L+NAA0.5

8、mg/L 生根培養(yǎng)基：生根培養(yǎng)基：1/2MS+NAA0.1mg/L 培養(yǎng)的前處理培養(yǎng)的前處理 2、培養(yǎng)程序、培養(yǎng)程序 取材及滅菌優(yōu)選生長(zhǎng)健壯、開(kāi)花性狀好的種球作取材及滅菌優(yōu)選生長(zhǎng)健壯、開(kāi)花性狀好的種球作為外植體。在取材前，最好將準(zhǔn)備接種的鱗莖在為外植體。在取材前，最好將準(zhǔn)備接種的鱗莖在45的低溫下處理的低溫下處理68周，然后經(jīng)洗衣粉常規(guī)清洗周，然后經(jīng)洗衣粉常規(guī)清洗后，剝?nèi)[莖外皮及外部后，剝?nèi)[莖外皮及外部23層鱗片，切去少許頂部層鱗片，切去少許頂部及基部，先用及基部，先用75%的酒精浸泡的酒精浸泡3060S，然后在，然后在0.1%升汞溶液中處理升汞溶液中處理1520分鐘，次氯酸鈉處理分鐘，次

9、氯酸鈉處理1015分分鐘，無(wú)菌水洗鐘，無(wú)菌水洗34次，即可進(jìn)行無(wú)菌操作切塊段次，即可進(jìn)行無(wú)菌操作切塊段接種。接種。 溫度：溫度：20-25 光照：光照：800-1200lx 每天每天9-14h照明照明 培養(yǎng)基：培養(yǎng)基：pH5.6-5.8培養(yǎng)條件培養(yǎng)條件培養(yǎng)條件培養(yǎng)條件培養(yǎng)條件培養(yǎng)條件根的培養(yǎng)根的培養(yǎng)以毛百合為材料，在以毛百合為材料，在MS+NAA0.5-0.1mg/L 培養(yǎng)基上，形成腫脹的粗根，培養(yǎng)基上，形成腫脹的粗根，將其切成小段將其切成小段MS+B2mg/L+NAA0.2mg/L的培養(yǎng)基的培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，便能分化出苗。上進(jìn)行培養(yǎng)，便能分化出苗。毛百合試管苗毛百合試管苗5-6個(gè)月，能形成直

10、徑個(gè)月，能形成直徑17mm左右的鱗莖，移栽后成活情況良左右的鱗莖，移栽后成活情況良好。好。胚培養(yǎng)胚培養(yǎng)在雜交育種工作中，在雜交育種工作中，為防止雜種胚和母體為防止雜種胚和母體胚乳間不親和，有可胚乳間不親和，有可能造成胚敗育的情況能造成胚敗育的情況下，可采取胚培養(yǎng)，下，可采取胚培養(yǎng)，以克服不親和現(xiàn)象，以克服不親和現(xiàn)象，有利于育種工作的順有利于育種工作的順利進(jìn)行。利進(jìn)行。培養(yǎng)時(shí)仍以培養(yǎng)時(shí)仍以MS培養(yǎng)基較好，糖濃度是種類(lèi)而異培養(yǎng)基較好，糖濃度是種類(lèi)而異常在常在20-40之間之間pH5.0較為適宜，較為適宜，NAA用量只宜用量只宜在在0.1-0.001之間。加入適量之間。加入適量BA有利于幼胚成活，有

11、利于幼胚成活，高高BA會(huì)抑制胚根的產(chǎn)生，并促進(jìn)胚組織愈傷組會(huì)抑制胚根的產(chǎn)生，并促進(jìn)胚組織愈傷組織化，通?？椈?，通常MS+BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L培養(yǎng)培養(yǎng)促進(jìn)愈傷組織生長(zhǎng)，然后將長(zhǎng)大的愈傷組織轉(zhuǎn)移促進(jìn)愈傷組織生長(zhǎng)，然后將長(zhǎng)大的愈傷組織轉(zhuǎn)移到到1/2MS不加任何激素的培養(yǎng)基上，約不加任何激素的培養(yǎng)基上，約2個(gè)月后，個(gè)月后，可形成大量的不定芽，延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間，就會(huì)生根，可形成大量的不定芽，延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間，就會(huì)生根，產(chǎn)生出完整的雜交后代。產(chǎn)生出完整的雜交后代。影響百合小鱗莖形成的因素影響百合小鱗莖形成的因素 季節(jié)春、夏、秋、冬）季節(jié)春、夏、秋、冬） 鱗片不同部位的影響上、鱗片不同部位的影響

12、上、中、下）中、下） 小鱗片培養(yǎng)后形成小鱗莖小鱗片培養(yǎng)后形成小鱗莖的大小分布的大小分布 小鱗莖形成的重量與培養(yǎng)小鱗莖形成的重量與培養(yǎng)及用量的關(guān)系成反比）及用量的關(guān)系成反比）試管鱗莖休眠現(xiàn)象試管鱗莖休眠現(xiàn)象百合百合30下的小鱗莖不休眠，而下的小鱗莖不休眠，而25下的絕大部分鱗莖休眠；低鹽下的絕大部分鱗莖休眠；低鹽低糖和高氮培養(yǎng)基上的小鱗莖不休眠，而高糖低糖和高氮培養(yǎng)基上的小鱗莖不休眠，而高糖9%）培養(yǎng)基上的）培養(yǎng)基上的小鱗莖會(huì)出現(xiàn)休眠現(xiàn)象。不同的品種在小鱗莖會(huì)出現(xiàn)休眠現(xiàn)象。不同的品種在36的溫度下的溫度下39120D可可打破休眠。打破休眠。休眠現(xiàn)象還與培養(yǎng)小鱗莖時(shí)所用的糖濃度有關(guān)休眠現(xiàn)象還與培養(yǎng)

13、小鱗莖時(shí)所用的糖濃度有關(guān)Takayama等等1982）；）；3%糖濃度培養(yǎng)下得到的小鱗莖在糖濃度培養(yǎng)下得到的小鱗莖在5下約下約2個(gè)月可打破休眠，個(gè)月可打破休眠，而而9%糖濃度下培養(yǎng)得到的小鱗莖要冷藏約糖濃度下培養(yǎng)得到的小鱗莖要冷藏約4個(gè)月。我們?cè)谂囵B(yǎng)過(guò)程個(gè)月。我們?cè)谂囵B(yǎng)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，蔗糖濃度較高中發(fā)現(xiàn)，蔗糖濃度較高40g/L對(duì)小鱗莖的形成和長(zhǎng)大有利。如對(duì)小鱗莖的形成和長(zhǎng)大有利。如糖濃度降到糖濃度降到20g/L，小鱗莖很快能長(zhǎng)成幼苗。因此，可用糖濃度控，小鱗莖很快能長(zhǎng)成幼苗。因此，可用糖濃度控制小鱗莖的生長(zhǎng)，使幼苗生長(zhǎng)健壯，提高成活率。也有人在組培前制小鱗莖的生長(zhǎng)，使幼苗生長(zhǎng)健壯，提高成活率。也有

14、人在組培前用用4的低溫處理鱗片的低溫處理鱗片120D，在經(jīng)組培所得到的小鱗莖不發(fā)生休眠，在經(jīng)組培所得到的小鱗莖不發(fā)生休眠現(xiàn)象?，F(xiàn)象。 快速繁殖的實(shí)例快速繁殖的實(shí)例 把最初培養(yǎng)得到的小鱗莖，每?jī)蓚€(gè)月用把最初培養(yǎng)得到的小鱗莖，每?jī)蓚€(gè)月用20 x90mm的培養(yǎng)皿，加入的培養(yǎng)皿，加入MS+NAA0.1+蔗蔗糖糖9%+活性炭活性炭0.5%的瓊脂培養(yǎng)基，繼代一的瓊脂培養(yǎng)基，繼代一次。次。2個(gè)月后獎(jiǎng)得到的小鱗片切割，轉(zhuǎn)移到個(gè)月后獎(jiǎng)得到的小鱗片切割，轉(zhuǎn)移到MS+KT10的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，給予的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，給予25和和2.5w/的連續(xù)光照。在經(jīng)過(guò)的連續(xù)光照。在經(jīng)過(guò)2 個(gè)月在原小個(gè)月在原小鱗片的表面再生出無(wú)數(shù)成堆的、新的小鱗鱗片的表面再生出無(wú)數(shù)成堆的、新的小鱗片。再將