知識(shí)點(diǎn)鹽析法

1、第第4 4章章 沉淀法沉淀法n知識(shí)點(diǎn)知識(shí)點(diǎn)：鹽析法，等電點(diǎn)沉淀法，有機(jī)溶劑 沉淀法，選擇性變性沉淀法，金屬離子沉淀法。n重點(diǎn)重點(diǎn)：上述幾種沉淀方法的概念、原理及其適用范圍；鹽析法的影響因素對(duì)沉淀效果的影響，并能根據(jù)實(shí)際情況予以靈活應(yīng)用和選擇。 n難點(diǎn)難點(diǎn)：常用沉淀方法的靈活運(yùn)用。 沉淀定義沉淀特點(diǎn)應(yīng)用范圍沉淀分類1. 沉淀法概述n鹽析法 n有機(jī)溶劑沉淀法n選擇性變性沉淀法n等電點(diǎn)沉淀法n離子型聚合物沉淀法n聚電解質(zhì)沉淀法 n高價(jià)金屬離子沉淀法沉淀法分類n活性蛋白n非活性蛋白n理化性質(zhì)n溶解度n提取方法蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)的回顧 n鹽析沉淀步驟n加沉淀劑方式n陳化條件n脫鹽處理2. 鹽析沉淀鹽析機(jī)理

2、示意圖 n鹽離子與蛋白質(zhì)分子爭奪水分子，降低了用于溶解蛋白質(zhì)的有效水量，減弱了蛋白質(zhì)的水合程度，破壞了蛋白表面的水化膜，導(dǎo)致蛋白質(zhì)溶解度下降；n鹽離子電荷的中和作用，使蛋白質(zhì)溶解度下降；n鹽離子引起原本在蛋白質(zhì)分子周圍有序排列的水分子的極化，使水活度降低。鹽析的機(jī)理nCohn方程式logS=-KsInKs鹽析n鹽析n二次鹽析鹽析沉淀基礎(chǔ)圖1 碳氧血紅蛋白的溶解度與硫酸銨離子強(qiáng)度的關(guān)系圖不同蛋白質(zhì)的溶解度曲線蛋白質(zhì)的鹽析分布曲線溶解度曲線(a)和鹽析分布曲線(b) n對(duì)影響n對(duì)Ks影響n鹽種類n鹽濃度n溫度npH值鹽析影響因素?zé)o機(jī)鹽種類的影響圖7 不同鹽溶液中碳氧血紅蛋白的溶解度與離子強(qiáng)度的關(guān)系

3、（25）()NaCl; ()KCl; ( )MgSO4; ()NH4)SO4; ()Na2SO4; ()K2SO4; ()檸檬酸三鈉溫度的影響pH對(duì)的影響蛋白質(zhì)起始濃度的影響二次鹽析鹽析操作3 等電點(diǎn)沉淀實(shí)例n從豬胰臟中提取胰蛋白酶原：胰蛋白酶原的pI8.9，可先于pH 3.0左右進(jìn)行等電點(diǎn)沉淀，除去共存的許多酸性蛋白質(zhì)(pI=3O)。工業(yè)生產(chǎn)胰島素(pI5.3)時(shí)，先調(diào)pH至8.0除去堿性蛋白質(zhì)，再調(diào)pH至3.0除去酸性蛋白質(zhì)(同時(shí)加入一定濃度的有機(jī)溶劑以提高沉淀效果)。n堿性磷酸酯酶的pI沉淀提?。喊l(fā)酵液調(diào)pH 4.0后出現(xiàn)含堿性磷酸酯酶的沉淀物，離心收集沉淀物。用pH 9.0的0.1 m

4、ol/L Tris-HCl緩沖液重新溶解，加入2040%飽和度的硫酸銨分級(jí)，離心收集的沉淀Tris-HCl緩沖液再次沉淀，即得較純的堿性磷酸酯酶。 4 有機(jī)溶劑沉淀原理圖酵母干粉中加入0.066 mol/L磷酸氫二鈉溶液，37水浴保溫2 h，室溫?cái)嚢? h，離心收集上清液，升溫至55，保溫20 min后迅速冷卻離心去除熱變性蛋白，上清液中多為熱穩(wěn)定性較高的醇脫氫酶。5 選擇性熱變性沉淀實(shí)例n（1）非離子型聚合物沉淀法）非離子型聚合物沉淀法n（2）聚電解質(zhì)沉淀法）聚電解質(zhì)沉淀法n（3）金屬離子沉淀法）金屬離子沉淀法n（4）親和沉淀親和沉淀6 其他沉淀法凝聚技術(shù)凝聚技術(shù)絮凝技術(shù)絮凝技術(shù)7 凝聚和絮凝技術(shù) 第五章 沉淀法課后練習(xí)1.名詞解釋： 鹽析法，有機(jī)溶劑沉淀法，