食品的測定實驗五食品中蛋白質(zhì)含量測定(精)講解學(xué)習(xí)

1、食品的測定實驗五食品中蛋白質(zhì)含量測定(精)三、儀器與試劑n（一）試劑n1、硫酸銅（CuSO45H20） n2、硫酸鉀n3、硫酸（密度為1.8419g/L）n4、硼酸溶液（20g/L）n5、氫氧化鈉溶液（400g/L）n6、0.01mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液。n7、混合指示試劑：0.1%甲基紅乙溶液液1份，與0.1%溴甲酚綠乙醇溶液5份臨用時混合。n8、黃豆粉。（二）儀器n微量定氮蒸餾裝置：n n1、電爐； 2、水蒸氣發(fā)生器（2L平底燒瓶）；3、螺旋夾a；4、小漏斗及棒狀玻璃塞（樣品入口處）；5、反應(yīng)室；6、反應(yīng)室外層；7、橡皮管及螺旋夾b；8、冷凝管；9、蒸餾液接收瓶。四、實驗步驟四、實驗步驟

2、n1、樣品消化n 稱取黃豆粉約0.3g（0.001g），移入干燥的100mL凱氏燒瓶中，加入0.2g硫酸銅和6g硫酸鉀，稍搖勻后瓶口放一小漏斗，加入20mL濃硫酸，將瓶以450角斜支于有小孔的石棉網(wǎng)上，使用萬用電爐，在通風(fēng)櫥中加熱消化，開始時用低溫加熱，待內(nèi)容物全部炭化，泡沫停止后，再升高溫度保持微沸，消化至液體呈藍(lán)綠色澄清透明后，繼續(xù)加熱0.5h，取下放冷，小心加20mL水，放冷后，無損地轉(zhuǎn)移到100mL容量瓶中，加水定容至刻度，混勻備用，即為消化液。n n 試劑空白實驗：取與樣品消化相同的硫酸銅、硫酸鉀、濃硫酸，按以上同樣方法進(jìn)行消化，冷卻，加水定容至100mL，得試劑空白消化液。 2、定

3、氮裝置的檢查與洗滌n檢查微量定氮裝置是否裝好。在蒸氣發(fā)生瓶內(nèi)裝水約三分之二，加甲基紅指示劑數(shù)滴及數(shù)毫升硫酸，以保持水呈酸性，加入數(shù)粒玻璃珠（或沸石）以防止暴沸。n測定前定氮裝置如下法洗滌23次：從樣品進(jìn)口入加水適量（約占反應(yīng)管三分之一體積）通入蒸汽煮沸，產(chǎn)生的蒸汽沖洗冷凝管，數(shù)分鐘后關(guān)閉夾子a，使反應(yīng)管中的廢液倒吸流到反應(yīng)室外層，打開夾子b由橡皮管排出，如此數(shù)次，即可使用。3、堿化蒸餾n量取硼酸試劑20mL于三角瓶中，加入混合指示劑23滴，并使冷凝管的下端插入硼酸液面下，在螺旋夾a關(guān)閉，螺旋夾b開啟的狀態(tài)下，準(zhǔn)確吸取10.0mL樣品消化液，由小漏斗流入反應(yīng)室，并以10mL蒸餾水洗滌進(jìn)樣口流入反

4、應(yīng)室，棒狀玻塞塞緊。使10mL氫氧化鈉溶液倒入小玻杯，提起玻塞使其緩緩流入反應(yīng)室，用少量水沖洗立即將玻塞蓋堅，并加水于小玻杯以防漏氣，開啟螺旋夾a，關(guān)閉螺旋夾b，開始蒸餾。通入蒸汽蒸騰10min后，移動接收瓶，液面離開凝管下端，再蒸餾2min。然后用少量水沖洗冷凝管下端外部，取下三角瓶，準(zhǔn)備滴定。n同時吸取10.0mL試劑空白消化液按上法蒸餾操作。n4、樣品滴定n以0.01mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至灰色為終點。n5、數(shù)據(jù)記錄n樣品消化液（mL）n消耗鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液平均值（mL）（三次測定的平均值）五、結(jié)果計算n式中 X樣品蛋白質(zhì)含量（g/100g）；nV1樣品滴定消耗鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液體積（mL）；

5、nV2空白滴定消耗鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液體積（mL）；nc鹽酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液濃度（mol/L）；n0.0140 1.0mL鹽酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液相當(dāng)?shù)牡馁|(zhì)量（g）；nm樣品的質(zhì)量（g）；nF氮換算為蛋白質(zhì)的系數(shù)，一般食物為6.25；乳制品為6.38；面粉為5.70；高梁為6.24；花生為5.46；米為5.95；大豆及其制品為5.71；肉與肉制品為6.25；大麥、小米、燕麥、裸麥為5.83；芝麻、向日葵5.30。n計算結(jié)果保留三位有效數(shù)字。六、注意事項及說明n1、本法也適用于半固體試樣以及液體樣品檢測。半固體試樣一般取樣范圍為2.00g5.00g；液體樣品取樣10.0mL25.0mL（約相當(dāng)?shù)?0mg40mg）

6、。若檢測液體樣品，結(jié)果以g/100mL表示。n2、消化時，若樣品含糖高或含脂及較多時，注意控制加熱溫度，以免大量泡沫噴出凱氏燒瓶，造成樣品損失?？杉尤肷倭啃链蓟蛞后w石蠟，或硅消泡劑減少泡沫產(chǎn)生。n3、消化時應(yīng)注意旋轉(zhuǎn)凱氏燒瓶，將附在瓶壁上的碳粒沖下，對樣品徹底消化。若樣品不易消化至澄清透明，可將凱氏燒瓶中溶液冷卻，加入數(shù)滴過氧化氫后，再繼續(xù)加熱消化至完全。n4、硼酸吸收液的溫度不應(yīng)超過40，否則氨吸收減弱，造成檢測結(jié)果偏低。可把接收瓶置于冷水浴中。n5、在重復(fù)性條件下獲得兩次獨(dú)立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的10%七、思考題n1、預(yù)習(xí)凱氏定氮法測定蛋白質(zhì)的原理及操作。n2、蒸餾時為什么要加入氫氧化鈉溶液？加入量對測定結(jié)果有何影響？n3、在蒸汽發(fā)生瓶水中、加甲基紅指示劑數(shù)滴及數(shù)毫升硫酸的作用是什么？若在蒸餾過程中才發(fā)現(xiàn)蒸汽發(fā)生瓶中的水變?yōu)辄S色，馬上補(bǔ)加硫酸行