臨床檢驗(yàn)ABO血型鑒定

1、東莞常平醫(yī)院 臨床檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室文件編號(hào)：DGCPH-CL-SOP-07-09ABO血型鑒定版序：2005-1頁(yè)碼：第1 頁(yè)，共5 頁(yè)測(cè)定原理 根據(jù)紅細(xì)胞上有或無A抗原或和B抗原，將血型分為A型、B型、AB型及O型4種。可利用紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)，通過正、反定型準(zhǔn)確鑒定ABO血型。所謂正定型，是用已知抗A和抗B分型血清來測(cè)定紅細(xì)胞上有無相應(yīng)的A抗原或和B抗原；所謂反定型，是用已知A細(xì)胞和B細(xì)胞來測(cè)定血清中有無相應(yīng)的抗A或和抗B。 試劑和儀器 1批批檢的抗A(B型血)、抗B(A型血)及抗A十B(O型血)分型血清。 2批批檢的5 A、B及O型試劑紅細(xì)胞鹽水懸液，制備方法見本節(jié)附注； 3離心機(jī)，顯微鏡。標(biāo)本收

2、集與處理 1，受檢者血清； 2，枸緣酸鈉抗凝血或未稍取血，受檢者血液制成5 紅細(xì)胞鹽水懸液使用，制備方法見本節(jié)附注。 3，標(biāo)本出現(xiàn)中度溶血者，為不合格標(biāo)本，不能用于檢測(cè)。操作步驟 1試管法 (1) 取潔凈小試管(內(nèi)徑10mm×60mm)3支，分別標(biāo)明抗A、抗B和抗A十B，用滴管分別加抗A、抗B和抗A十B分型血清各l滴（約50 ul）于試管底部，再以滴管分別加入受檢者5紅細(xì)胞鹽水懸液1滴，混和。 (2) 另取潔凈小試管(內(nèi)徑10mm×60mm)3支，分別標(biāo)明A、B和O細(xì)胞。用滴管分別加入受檢者血清l滴于試管底部，再分別以滴管加入A、B和O型5試劑紅細(xì)胞懸液l滴，混和。 (3)

3、 立即以1000rmin離心 3 min。 (4) 將試管輕輕搖動(dòng)，使沉于管底的紅細(xì)胞浮起，先以內(nèi)眼觀察有無凝集(或溶血)現(xiàn)象。如內(nèi)眼不見凝集，應(yīng)將反應(yīng)物倒于玻片上，再以低倍鏡檢查。 (5) 觀察結(jié)果時(shí)既要看有無凝集，更要注意凝集強(qiáng)度，此有助于A、B亞型、類B或cisAB的發(fā)現(xiàn)。 東莞常平醫(yī)院 臨床檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室文件編號(hào)：DGCPH-CL-SOP-07-09ABO血型鑒定版序：2005-1頁(yè)碼：第2 頁(yè)，共5 頁(yè) (6) 凝集強(qiáng)度判斷標(biāo)準(zhǔn) 4十 紅細(xì)胞凝集成一大塊，血清清晰透明。 3十 紅細(xì)胞凝集成數(shù)小塊，血清尚清晰。 2十 紅細(xì)胞凝塊分散成許多小塊，見到游離紅細(xì)胞。 1十 肉眼可見大顆粒，周圍有

4、較多游離紅細(xì)胞。 土 鏡下可見數(shù)個(gè)紅細(xì)胞凝集在一起，周圍有很多游離紅細(xì)胞。 MF混合凝集外觀(mixed field)是指鏡下可見少數(shù)紅細(xì)胞凝集，而極大多數(shù)紅細(xì)胞仍呈分散分布。 一 表示陰性，鏡下未見凝集，紅細(xì)胞均勻分布。 2玻片法 (1) 取清潔玻片1張(或白瓷板1塊)，用蠟筆劃成方格，標(biāo)明抗-A、抗-B和抗-A十B，分別用滴管滴加抗-A、抗-B和抗-A十B分型血清 l滴于標(biāo)明的方格內(nèi)，再各加受檢者2紅細(xì)胞懸液1滴，混和。 (2) 另取潔凈玻片一張(或白瓷板1塊)，用蠟筆劃成方格，標(biāo)明A細(xì)胞、B 細(xì)胞和O細(xì)胞，用滴管各加受檢者血清1滴，再分別用滴管滴加A、B和O型試劑紅細(xì)胞懸液1滴。 (3)

5、 將玻片(或白瓷板)不斷輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)，使血清與細(xì)胞充分混勻，連續(xù)約15 min，先以肉眼觀察有無凝集(或溶血)反應(yīng)；再在低倍鏡下觀察結(jié)果。 結(jié)果判定 ABO血型正反定型結(jié)果 分型血清+受檢者紅細(xì)胞 受檢者血型 受檢者血清+試劑紅細(xì)胞 抗-A 抗-B 抗-A十B A細(xì)胞 B細(xì)胞 O細(xì)胞 十 十 A 十 十 十 B 十 一 O 十 十 十 十 十 AB 注：十為凝集；一為不凝集。 東莞常平醫(yī)院 臨床檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室文件編號(hào)：DGCPH-CL-SOP-07-09ABO血型鑒定版序：2005-1頁(yè)碼：第3 頁(yè)，共5 頁(yè)質(zhì)量控制與附注1， 分型血清必須為批批檢試劑，且在有效期內(nèi)使用；質(zhì)量性能符合要求。試劑開封后必

6、須貼上開封日期、開封人標(biāo)簽，用畢后應(yīng)放置冰箱保存，以免細(xì)菌污染。試劑開封后有效期為一周。 2， 試劑紅細(xì)胞以3個(gè)健康者同型新鮮紅細(xì)胞混和，用生理鹽水洗滌 1次，以除卻存在于血清中的抗體及可溶性抗原?；蚴褂煤细竦纳唐吩\斷紅細(xì)胞。試劑紅細(xì)胞有效期：自制的為15天，商品的為試劑有效期。試劑開封后必須貼上開封日期、開封人標(biāo)簽，用畢后應(yīng)放置冰箱保存，以免細(xì)菌污染。試劑開封后有效期為一周。 3， 生理鹽水啟用后，有效期為二周。4， 所有試劑在開封或使用時(shí)，必須檢查是否有變質(zhì)；凡可疑者，必須更換新的試劑進(jìn)行檢測(cè)工作。 5，試管、滴管和玻片必須清潔干燥，防止溶血。 6，操作方法應(yīng)按規(guī)定，一般應(yīng)先加血清，然后再

7、加紅細(xì)胞懸液，以便容易核實(shí)是否漏加血清。 7，按理IgM抗-A和抗-B與相應(yīng)紅細(xì)胞的反應(yīng)溫度以4為最強(qiáng)，但為了防止冷凝集現(xiàn)象的干擾，一般仍在室溫(2024)內(nèi)進(jìn)行試驗(yàn)，37可使反應(yīng)減弱。 8，離心時(shí)間不宜過長(zhǎng)或過短，速度不宜過快或過慢，以防假陽(yáng)性或假陰性結(jié)果。 9，觀察時(shí)應(yīng)注意紅細(xì)胞呈特異性凝集、繼發(fā)性凝固以及緡錢狀排列的區(qū)別。 10，判斷結(jié)果后應(yīng)仔細(xì)核對(duì)、記錄，避免筆誤。 11，對(duì)于可能存在不完全抗原的時(shí)候，應(yīng)在各反應(yīng)方加入凝聚胺試劑，以檢驗(yàn)不完全抗原的存在。12，對(duì)于可疑結(jié)果，必須更換所用的試劑，重新檢測(cè)。13，5%紅細(xì)胞懸液的配制：用生理鹽水洗滌紅細(xì)胞3次。根據(jù)下表進(jìn)行紅細(xì)胞懸液的配制。

8、懸液濃度（%） 壓積紅細(xì)胞（滴） 鹽水（滴）- 2 1 2ml(40) 5 1 0.8ml(16) 10 1 0.4ml(8) 20 1 0.2ml(4)東莞常平醫(yī)院 臨床檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室文件編號(hào)：DGCPH-CL-SOP-07-09ABO血型鑒定版序：2005-1頁(yè)碼：第4 頁(yè)，共5 頁(yè)正反定型結(jié)果不一致的原因 （一） 原因： 有技術(shù)性問題或紅細(xì)胞和血清本身的問題，常見者有以下幾種： 1， 分型血清效價(jià)太低、親和力不強(qiáng)。如抗A血清效價(jià)不高，可將A亞型誤定為O型，AB型誤定為B型。 2， 紅細(xì)胞懸液過濃或過淡，抗原抗體比例不適當(dāng)，使反應(yīng)不明顯，誤判為陰性反應(yīng)。 3， 受檢者紅細(xì)胞上抗原位點(diǎn)過少(如亞

9、型)或抗原性減弱(見于白血病或惡性腫瘤：以及類B或cisAB等。 4，受檢者血清中蛋白紊亂(高球蛋白血癥)，或?qū)嶒?yàn)時(shí)溫度過高，常引起紅細(xì)胞呈緡錢狀排列。 5，受檢者血清中缺乏應(yīng)有的抗-A及或抗B抗體，如丙種球蛋白缺乏癥。 6，各種原因引起的紅細(xì)胞溶解，誤判為不凝集。部分溶血時(shí)，可溶性血型物質(zhì)中和了相應(yīng)的抗體. 7，由細(xì)菌污染或遺傳因素引起多凝集或全凝集往往是正反定型不符的原因。 8，血清中有意外抗體，如自身抗I，常引起干擾。 9，老年人血清中抗體水平大幅度下降正反定型結(jié)果不一致的解決辦法如發(fā)現(xiàn)ABO正反定型結(jié)果不一致，先要重復(fù)作試驗(yàn)1次。嚴(yán)格執(zhí)行操作規(guī)程，使用質(zhì)量合格的試劑以及細(xì)心觀察和解釋試

10、驗(yàn)結(jié)果，就可解決明顯的問題，對(duì)一些疑難問題月必須進(jìn)一步研究。 （二）檢查步驟： 1， 另從受檢者采取l份新鮮血液標(biāo)本這樣可以糾正因污染或搞錯(cuò)樣本造成的不符合。 2，將紅細(xì)胞洗滌數(shù)次，配成5鹽水細(xì)胞懸液，用抗A、抗B、抗Al，抗A十B及抗H做試驗(yàn)可以得到其它有用的信息。 3，對(duì)受檢紅細(xì)胞作直接抗球蛋白試驗(yàn)，如結(jié)果呈陽(yáng)性，表示紅細(xì)胞已被抗體致敏。 4，用A1、A2、B、O紅細(xì)胞及自身紅細(xì)胞檢查受檢血清。如果懷疑是抗I，用O型(或ABO相合的)臍血紅細(xì)胞檢查。 5，如果試驗(yàn)結(jié)果未見凝集，應(yīng)將細(xì)胞及血清試驗(yàn)至少在室溫和4放置30min，用顯微鏡檢查核實(shí)。 6，如疑為A抗原或B抗原減弱，則可將受檢紅細(xì)胞

11、與抗A或抗B血清作吸收及放散試驗(yàn)以及受檢者唾液作A、B、H血型物質(zhì)測(cè)定。后者只對(duì)80HAB分泌型的人有用。東莞常平醫(yī)院 臨床檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室文件編號(hào)：DGCPH-CL-SOP-07-09ABO血型鑒定版序：2005-1頁(yè)碼：第5 頁(yè)，共5 頁(yè) 7，如試驗(yàn)結(jié)果紅細(xì)胞呈絹錢狀排列，加等滲鹽水l滴，混和，往往可使絹錢現(xiàn)象消失。應(yīng)注意不應(yīng)先加鹽水l滴于受檢者血清中而后和紅細(xì)胞作試驗(yàn)，以免使血清中抗體被稀釋。 8，如受檢者為A型血而疑為有類B抗原時(shí)，可用下列方法進(jìn)行鑒別(1) 觀察細(xì)胞與抗A及抗B的凝集強(qiáng)度，與抗A的反應(yīng)要比與抗B的反應(yīng)強(qiáng)。這種區(qū)別用玻片法作試驗(yàn)更為明顯。 （2） 用受檢者紅細(xì)胞與自身血清作試驗(yàn)，血清中的抗B不凝集自身紅細(xì)胞上的類B抗原。(3) 檢查唾液中是否有A、B物質(zhì)，如果是分泌型，可檢出A物質(zhì)而無B物質(zhì)。(4) 核對(duì)患者的診斷，類B抗原的形成與結(jié)腸癌、直腸癌、革蘭陰性桿菌感