月季花藥培養(yǎng)

1、 花中皇后月季又稱花中皇后月季又稱“月月紅月月紅”，自然花期自然花期5至至11月月，開花連續(xù)不斷開花連續(xù)不斷 ，通常扦插就可以成活通常扦插就可以成活。 課題課題2 2 月季的花藥培養(yǎng)月季的花藥培養(yǎng)知識回顧 單倍體育種的過程？單倍體育種的過程？花藥離體培養(yǎng)（花藥離體培養(yǎng)（N）單倍體植株（單倍體植株（N）秋水仙素處理，秋水仙素處理，使染色體數(shù)加倍使染色體數(shù)加倍植株（植株（2N）正常植株（正常植株（2N）1 1、被子植物定義：、被子植物定義：凡是種子有果皮包被著，凡是種子有果皮包被著，胚珠有子房壁包被著的植物，就叫做被子植物胚珠有子房壁包被著的植物，就叫做被子植物一、被子植物和裸子植物一、被子植物和

2、裸子植物2 2、裸子植物定義：、裸子植物定義：凡是胚珠裸露，外面沒有凡是胚珠裸露，外面沒有子房壁包被，種子外面沒有果皮包被的植物稱子房壁包被，種子外面沒有果皮包被的植物稱為裸子植物為裸子植物實(shí)例：玉米、大豆、梨、杏實(shí)例：玉米、大豆、梨、杏實(shí)例：松、杉、柏實(shí)例：松、杉、柏花的結(jié)構(gòu)花的結(jié)構(gòu)花托花托花萼花萼花瓣花瓣雄蕊雄蕊花藥花藥花絲花絲雌蕊雌蕊柱頭柱頭花柱花柱子房子房花絲花絲花藥：花藥：囊狀結(jié)構(gòu)，內(nèi)有很多花粉囊狀結(jié)構(gòu)，內(nèi)有很多花粉1 雄蕊雄蕊一、基礎(chǔ)知識一、基礎(chǔ)知識2 花粉的概念花粉的概念:由由花粉母細(xì)胞花粉母細(xì)胞經(jīng)過經(jīng)過減數(shù)分裂減數(shù)分裂形成形成的的單倍體的生殖細(xì)胞單倍體的生殖細(xì)胞.被子植物花粉的

3、發(fā)育過程被子植物花粉的發(fā)育過程小孢子母細(xì)胞小孢子母細(xì)胞減數(shù)分裂減數(shù)分裂4個(gè)小孢子個(gè)小孢子(小孢子四分體時(shí)期小孢子四分體時(shí)期)小孢子小孢子(單核居中期單核居中期) 小孢子小孢子(單核靠邊期單核靠邊期)小孢子小孢子 生殖細(xì)胞核生殖細(xì)胞核+花粉管細(xì)胞核花粉管細(xì)胞核有絲分裂有絲分裂（花粉粒的雙核期）（花粉粒的雙核期）生殖細(xì)胞將再進(jìn)行一次有絲分裂，形成兩個(gè)精子生殖細(xì)胞將再進(jìn)行一次有絲分裂，形成兩個(gè)精子注意注意：二核花粉粒二核花粉粒：成熟的花粉粒中，只含花粉管細(xì)胞核：成熟的花粉粒中，只含花粉管細(xì)胞核和生殖細(xì)胞核。（精子在花粉管中形成）和生殖細(xì)胞核。（精子在花粉管中形成）三核花粉粒三核花粉粒：有些植物的花粉

4、，在成熟前，生殖細(xì)：有些植物的花粉，在成熟前，生殖細(xì)胞進(jìn)行一次有絲分裂，形成兩個(gè)精子，這樣的花粉在胞進(jìn)行一次有絲分裂，形成兩個(gè)精子，這樣的花粉在成熟時(shí)，含有一個(gè)花粉管細(xì)胞核和兩個(gè)精子。成熟時(shí)，含有一個(gè)花粉管細(xì)胞核和兩個(gè)精子。例題：兩個(gè)精子和花粉管細(xì)胞核的例題：兩個(gè)精子和花粉管細(xì)胞核的基因型基因型相同相同4個(gè)小孢子個(gè)小孢子減數(shù)減數(shù)分裂分裂有絲有絲分裂分裂4個(gè)花粉管細(xì)胞核個(gè)花粉管細(xì)胞核4個(gè)生殖細(xì)胞核個(gè)生殖細(xì)胞核有絲分裂有絲分裂8個(gè)精子個(gè)精子1花粉花粉母細(xì)胞母細(xì)胞2NNNN被子植物子房的結(jié)構(gòu)被子植物子房的結(jié)構(gòu)胚珠的結(jié)構(gòu)胚珠的結(jié)構(gòu)花粉管花粉管精精 子子卵細(xì)胞卵細(xì)胞極核極核子房壁子房壁珠被珠被珠孔珠孔雌

5、蕊雌蕊 的結(jié)構(gòu)的結(jié)構(gòu)移栽移栽花藥中花藥中的花粉的花粉胚狀體胚狀體脫分化脫分化 愈傷組織愈傷組織 花藥中花藥中的花粉的花粉脫分化脫分化 分化分化 叢芽叢芽 再分化再分化 叢芽叢芽 誘導(dǎo)誘導(dǎo)生根生根體細(xì)胞胚（胚狀體）：在組織培養(yǎng)過程中，某些細(xì)胞在形態(tài)上轉(zhuǎn)體細(xì)胞胚（胚狀體）：在組織培養(yǎng)過程中，某些細(xì)胞在形態(tài)上轉(zhuǎn)變?yōu)榕c變?yōu)榕c合子發(fā)育成的胚非常相似的結(jié)構(gòu)合子發(fā)育成的胚非常相似的結(jié)構(gòu)，發(fā)育過程亦與合子胚類，發(fā)育過程亦與合子胚類似似原因：培養(yǎng)基中的激素原因：培養(yǎng)基中的激素種類種類及及濃度配比濃度配比煙草花藥培養(yǎng)煙草花藥培養(yǎng)胚狀體發(fā)育途徑胚狀體發(fā)育途徑部分花藥通過胚狀體途徑形成小植株部分花藥通過胚狀體途徑形成

6、小植株愈傷組織轉(zhuǎn)接種到再生培養(yǎng)基愈傷組織轉(zhuǎn)接種到再生培養(yǎng)基愈傷組織分化形成再生植株愈傷組織分化形成再生植株水稻花藥培養(yǎng)水稻花藥培養(yǎng)愈傷組織發(fā)育途徑愈傷組織發(fā)育途徑部分花藥產(chǎn)生愈傷組織部分花藥產(chǎn)生愈傷組織接種在平板上的水稻花藥接種在平板上的水稻花藥 1、材料的選擇、材料的選擇 不同植物的誘導(dǎo)成功率不同不同植物的誘導(dǎo)成功率不同. 同一植物的不同生理狀況也對誘導(dǎo)成功率有同一植物的不同生理狀況也對誘導(dǎo)成功率有直接的影響直接的影響. （一般選月季的初花期）（一般選月季的初花期） 合適的花粉發(fā)育期合適的花粉發(fā)育期（單核居中期與靠邊期之間）（單核居中期與靠邊期之間） 2、培養(yǎng)基的組成、培養(yǎng)基的組成（ MSM

7、S培養(yǎng)基培養(yǎng)基+ +不同比例的植物生不同比例的植物生長調(diào)節(jié)激素）長調(diào)節(jié)激素）此外，植株生長條件、材料低溫預(yù)處理、接種密度等此外，植株生長條件、材料低溫預(yù)處理、接種密度等(三三)、影響花藥培養(yǎng)的主要因素、影響花藥培養(yǎng)的主要因素注意：選擇最合適的花粉發(fā)育時(shí)期注意：選擇最合適的花粉發(fā)育時(shí)期:單核期單核期 不選擇單核期之前花藥原因：不選擇單核期之前花藥原因：花藥質(zhì)地幼嫩，容易破碎花藥質(zhì)地幼嫩，容易破碎； 不選擇單核期之后花藥原因：不選擇單核期之后花藥原因：花瓣開始松動(dòng)，給材料消毒帶來困花瓣開始松動(dòng)，給材料消毒帶來困難困難難困難； 挑選單核期花藥方法：應(yīng)當(dāng)選挑選單核期花藥方法：應(yīng)當(dāng)選擇完全未開放的花蕾，

8、微生物少，擇完全未開放的花蕾，微生物少，易消毒。易消毒?；ɑㄐ廴镄廴锎迫锎迫锘ㄋ幓ㄋ幓ǚ哿；ǚ哿＞泳泳泳幼幼?房房胚珠胚珠胚囊胚囊子房壁子房壁珠被珠被卵細(xì)胞卵細(xì)胞兩個(gè)極核兩個(gè)極核受受精精卵卵受受精精極極核核胚胚胚胚乳乳種皮種皮種種子子果皮果皮果實(shí)果實(shí)有絲分裂有絲分裂有絲分裂有絲分裂1n1n1n1n2n2n1n1n3n3n2n2n2n2n2n2n2n2n胚是一個(gè)新個(gè)體的幼體胚是一個(gè)新個(gè)體的幼體5 5、發(fā)育結(jié)果、發(fā)育結(jié)果實(shí)驗(yàn)操作實(shí)驗(yàn)操作一、材料的選取一、材料的選取二、材料的消毒二、材料的消毒三、接種和培養(yǎng)三、接種和培養(yǎng)（一）材料選取（一）材料選取 2、通過、通過鏡檢鏡檢來確定是否處于適宜的

9、發(fā)育期來確定是否處于適宜的發(fā)育期。 方法：方法：醋酸洋紅法醋酸洋紅法(將染色體染成紅色將染色體染成紅色) 焙花青焙花青-鉻礬法鉻礬法(花粉細(xì)胞核染成藍(lán)黑色花粉細(xì)胞核染成藍(lán)黑色)。1、從花藥看、從花藥看：月季的初花期：月季的初花期 從花粉看：從花粉看：單核期單核期 從花蕾看從花蕾看：完全未開放的：完全未開放的 花藥（載玻片上）花藥（載玻片上）1%的醋酸洋紅的醋酸洋紅1滴滴用鑷柄將花藥搗碎，用鑷柄將花藥搗碎，蓋上蓋玻片蓋上蓋玻片鏡檢（花粉粒的細(xì)胞核被染成紅色）鏡檢（花粉粒的細(xì)胞核被染成紅色） 花藥（在卡諾氏固定液中處理花藥（在卡諾氏固定液中處理20min）取出，置于載玻片上取出，置于載玻片上焙花青

10、鉻礬溶液染色焙花青鉻礬溶液染色蓋上蓋玻片蓋上蓋玻片鏡檢（花粉粒的細(xì)胞核鏡檢（花粉粒的細(xì)胞核被染成藍(lán)黑色）被染成藍(lán)黑色） 醋酸洋紅法染色機(jī)理醋酸洋紅法染色機(jī)理: :醋酸洋紅為醋酸洋紅為堿性染色劑堿性染色劑，而花，而花粉細(xì)胞內(nèi)有染色體，染色體主要成分是粉細(xì)胞內(nèi)有染色體，染色體主要成分是DNADNA和蛋白質(zhì)和蛋白質(zhì), ,易被堿性染料著色易被堿性染料著色染成紅色染成紅色 。 醋酸洋紅法染色機(jī)理醋酸洋紅法染色機(jī)理: :醋酸洋紅為醋酸洋紅為堿性染色劑堿性染色劑，而花，而花粉細(xì)胞內(nèi)有染色體，染色體主要成分是粉細(xì)胞內(nèi)有染色體，染色體主要成分是DNADNA和蛋白質(zhì)和蛋白質(zhì), ,易被堿性染料著色易被堿性染料著色染

11、成紅色染成紅色 。（二）材料的消毒（二）材料的消毒5 5、無菌水沖洗、無菌水沖洗3 35 5次次 花藥的外面有花萼、花瓣保護(hù)，通常處于無菌狀態(tài)花藥的外面有花萼、花瓣保護(hù)，通常處于無菌狀態(tài)1、花蕾用、花蕾用體積分?jǐn)?shù)為體積分?jǐn)?shù)為70%的酒精的酒精浸泡浸泡30秒秒2、無菌水清洗、無菌水清洗3、無菌吸水紙吸干花蕾表面的水分、無菌吸水紙吸干花蕾表面的水分4、放入、放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%的氯化汞的氯化汞溶液中溶液中24分鐘分鐘 （質(zhì)量分?jǐn)?shù)為質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的的次氯酸鈣溶液次氯酸鈣溶液或飽和漂白粉溶液或飽和漂白粉溶液）為什么花瓣松動(dòng)會給為什么花瓣松動(dòng)會給材料的消毒帶來困難？材料的消毒帶來困難？答：花

12、瓣松動(dòng)后，微答：花瓣松動(dòng)后，微生物就可能侵入到花藥，生物就可能侵入到花藥，給材料的消毒帶來困難。給材料的消毒帶來困難。為什么花瓣松動(dòng)會給為什么花瓣松動(dòng)會給材料的消毒帶來困難？材料的消毒帶來困難？（三）接種和培養(yǎng)（三）接種和培養(yǎng) 1 1 滅菌后花蕾，要在滅菌后花蕾，要在 下除去萼片和花瓣，下除去萼片和花瓣，并立即將花藥接種到培養(yǎng)基上。并立即將花藥接種到培養(yǎng)基上。 3 通常每瓶接種花藥通常每瓶接種花藥 ，溫度控制在，溫度控制在 左左右，右， 。幼小植株形成后才。幼小植株形成后才 。 2 在剝離花藥時(shí)，要盡量在剝離花藥時(shí)，要盡量 （否則接種后，否則接種后，容易從受傷部位產(chǎn)生二倍體的愈傷組織容易從受傷

13、部位產(chǎn)生二倍體的愈傷組織），同時(shí)還要徹），同時(shí)還要徹底底 ，因?yàn)榕c花絲相連的花藥不利于愈傷組織或因?yàn)榕c花絲相連的花藥不利于愈傷組織或胚狀體的形成胚狀體的形成。 一般經(jīng)過一般經(jīng)過20-30天培養(yǎng)后，會發(fā)現(xiàn)花藥開裂，長出天培養(yǎng)后，會發(fā)現(xiàn)花藥開裂，長出愈傷組織或釋放出胚狀體愈傷組織或釋放出胚狀體。將愈傷組織及時(shí)轉(zhuǎn)移到分。將愈傷組織及時(shí)轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基上，以便進(jìn)一步分化出再生植株?；囵B(yǎng)基上，以便進(jìn)一步分化出再生植株。 4 進(jìn)一步鑒定和篩選：進(jìn)一步鑒定和篩選：常常會出現(xiàn)染色體倍性的變常常會出現(xiàn)染色體倍性的變化化無菌條件無菌條件不損傷花藥不損傷花藥去除花絲去除花絲7-10個(gè)個(gè)25不需要光照不需要光照需要

14、光照需要光照主要原因是主要原因是花粉管核和花粉管核和生殖核融合生殖核融合造成的造成的課題成果評價(jià)課題成果評價(jià) 一一 選材是否恰當(dāng)選材是否恰當(dāng) 二二 無菌技術(shù)是否過關(guān)無菌技術(shù)是否過關(guān) 三三 接種是否成功接種是否成功植物組織培養(yǎng)技術(shù)與花藥培養(yǎng)技術(shù)的異同點(diǎn)：植物組織培養(yǎng)技術(shù)與花藥培養(yǎng)技術(shù)的異同點(diǎn)：項(xiàng)目項(xiàng)目相同點(diǎn)相同點(diǎn)不同點(diǎn)不同點(diǎn)植物組織植物組織培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)技術(shù)離體的植物組離體的植物組織經(jīng)脫分化形織經(jīng)脫分化形成愈傷組織，成愈傷組織，再分化成叢芽，再分化成叢芽，誘導(dǎo)出根，然誘導(dǎo)出根，然后進(jìn)行移栽。后進(jìn)行移栽。外植體為體細(xì)胞，染色體外植體為體細(xì)胞，染色體數(shù)無需加倍。數(shù)無需加倍?；ㄋ幣囵B(yǎng)花藥培養(yǎng)技術(shù)技術(shù)取材

15、為花藥，培養(yǎng)的為單取材為花藥，培養(yǎng)的為單倍體幼苗，植株弱小，高倍體幼苗，植株弱小，高度不育，必須用秋水仙素度不育，必須用秋水仙素處理，使染色體加倍，恢處理，使染色體加倍，恢復(fù)正常植株的染色體數(shù)，復(fù)正常植株的染色體數(shù)，而且為純種。而且為純種。1.1.答：答： F F2 2代紫色甜玉米的基因型組成可能為代紫色甜玉米的基因型組成可能為AasusuAasusu或或AAsusuAAsusu。 如果運(yùn)用常規(guī)育種方法，將如果運(yùn)用常規(guī)育種方法，將F F2 2代中的紫色甜玉米與代中的紫色甜玉米與白色甜玉米（白色甜玉米（aasusuaasusu）進(jìn)行測交，可以選擇出基因型為）進(jìn)行測交，可以選擇出基因型為AAsusuAAsusu純種紫色甜玉米。但這種方法比較繁瑣，耗時(shí)也純種紫色甜玉米