植物快速繁殖專題學(xué)習(xí)

1、植物快速繁殖專題學(xué)習(xí) 基本技術(shù)陳 剛?cè)A南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 2005.5基本技術(shù)實(shí)驗(yàn)室設(shè)備及器材 培養(yǎng)基及配制 實(shí)驗(yàn)操作技術(shù) 實(shí)驗(yàn)室設(shè)備及器材 常用設(shè)備器材 超凈工作臺(tái) 紫外燈 培養(yǎng)架 滅菌鍋 電子天平 酸度計(jì) 人工氣候箱 培養(yǎng)大棚玻璃器皿 量筒、容量瓶、培養(yǎng)皿、廣口瓶、細(xì)口瓶、培養(yǎng)瓶、三角瓶、玻璃棒、移液管、滴瓶等 工具 解剖刀、鑷子、剪刀、吸耳球、封口膜、酒精燈等培養(yǎng)基及配制 培養(yǎng)基： 培養(yǎng)基成分（五大類） 植物激素配制 母液的配制 培養(yǎng)基配制程序常用培養(yǎng)基配方 MS 、 B5、 N6及各自特點(diǎn)培養(yǎng)基 培養(yǎng)基成分大致可以分為五大類，大量元素、微量元素、鐵鹽、有機(jī)成分、植物激素（生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑

2、）。 大量元素 大量元素是指氮、磷、鉀、鈣、鎂、硫等元素。其中氮是培養(yǎng)基中大量需要的。在MS培養(yǎng)基中，以銨態(tài)氮的含量為主。磷是生物必需的一種元素，也是作為能源aTP合成所不可缺少的，培養(yǎng)基中以磷酸根(P02)的形式添加，另外鉀、鈣、鎂、硫等元素，也是植物生長(zhǎng)所必需的，這些元素缺乏會(huì)產(chǎn)生缺素癥，影響酶的活性和代謝。 微量元素 微量元素是植物生命活動(dòng)不可缺少的。錳、銅、鉬、鋅等是植物生長(zhǎng)所需要的微量元素，MS培養(yǎng)基中經(jīng)常使用。 鐵鹽 鐵在合成葉綠素中起重要作用，是植物生長(zhǎng)不可缺少的金屬元素，缺鐵影響到胚的發(fā)育，阻礙子葉變綠。鐵鹽(FeSO4和FeCl2)在 pH5.2以上常成Fe(OH)2的不溶性

3、沉淀，所以常用以FeS047H20和Na2-EDTa結(jié)合成的螯合鐵。 有機(jī)成分 維生素是植物組織培養(yǎng)中經(jīng)常使用的，有維生素B1(鹽酸硫胺素)、維生素B6(鹽酸砒哆醇)、生物素、煙酸、葉酸等。肌醇對(duì)組織和細(xì)胞的繁殖、分化有促進(jìn)作用，對(duì)細(xì)胞壁的形成也有促進(jìn)作用，還可以增強(qiáng)愈傷組織的生長(zhǎng)。在組織培養(yǎng)中，大多數(shù)情況不能正常進(jìn)行光合作用，必須在培養(yǎng)基中加糖，作為碳源。同時(shí)糖的濃度對(duì)調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的滲透壓有一定作用。培養(yǎng)基中使用最普遍的是蔗糖，濃度為23。 植物激素 植物激素是植物生命活動(dòng)中不可缺少的物質(zhì)，它能促進(jìn)細(xì)胞的分裂生長(zhǎng)及誘導(dǎo)器官的分化。組織培養(yǎng)中應(yīng)用較多的有吲哚乙酸(IAA)；吲哚丁酸(IBA)、萘

4、乙酸(NAA)、2，4二氯苯氧乙酸(2，4-D)、6芐基氨基嘌呤(6-BA)、CPPU、TDZ等。 配制 母液配制順序是：1. 用靈敏度為0.1mg的天平稱取藥品。2. 往燒杯加入適量蒸餾水或無菌水。3. 將藥品放入燒杯內(nèi),并用玻璃棒攪拌使其溶解,難溶時(shí)可適當(dāng)加溫以加速溶解。4. 要待一種藥品完全溶解再加入下一種藥品5. 所加入的藥品應(yīng)依次加入，直至藥品全部加入溶解為止。6. 母液裝入相應(yīng)的瓶?jī)?nèi)，特別是有機(jī)成分的母液應(yīng)該放入4冰箱。 培養(yǎng)基配制順序1. 取燒杯或三角瓶注入一定量的蒸餾水，將各種母液按所需容積分別用移液管吸取并混合在一起，然后按要求加入一定量的激素、蔗糖后定容至一定體積。2. 用

5、1mol/L的NaOH或HCl調(diào)節(jié)pH。 3. 如制固體培養(yǎng)基，則加入1%左右的瓊脂后加熱煮沸，使其熔化。4. 分裝，可用漏斗將液狀培養(yǎng)基注入培養(yǎng)瓶，注入量視培養(yǎng)瓶容量大小而定，通常為容器的1/5左右。培養(yǎng)基配制順序5. 封瓶口。6. 高壓蒸汽滅菌。120，1.5Mpa,消毒1520min。注意壓力不能太大，時(shí)間也不宜過長(zhǎng)，否則蔗糖、有機(jī)物特別是維生素類物質(zhì)會(huì)在高溫下分解，影響培養(yǎng)基的酸堿度，瓊脂也會(huì)分解，顏色變深且不易凝固。7. 滅菌后的培養(yǎng)基可放入接種室內(nèi)靜置，讓其降溫后凝固，如需斜面可將其斜放。常用培養(yǎng)基配方 成分成分MSB5N6大量元素大量元素NH4NO3(NH4)2SO4KNO3Ca

6、Cl22H2OKH2PO4 MgSO47H2O mg/L16501900440170370 mg/L1343000150150500mg/L4632830166400185成分成分MSB5N6微量元素微量元素MnSO44H2OZnSO44H2OH3BO3KINa2MoO42H2OCuSO45H2OCoCl26H2O mg/L22.38.66.20.830.250.0250.025 mg/L10230.750.250.0250.025mg/L4.41.51.60.8成分MSB5N6鐵鹽鐵鹽Na2EDTAFeSO47H2O mg/L37.2527.85 mg/L37.2527.85mg/L37.2

7、527.85有機(jī)物質(zhì)有機(jī)物質(zhì)甘氨酸硫銨素?zé)熕猁}酸吡哆醇 肌醇 mg/L2.00.40.50.5100 mg/L1011100mg/L2.01.00.50.5特點(diǎn)1. MS培養(yǎng)基特點(diǎn)是無機(jī)鹽濃度高，有加速愈傷組織生長(zhǎng)的作用，能滿足植物組織對(duì)礦質(zhì)營(yíng)養(yǎng)的要求。銨鹽和硝酸鹽含量高，比例也比較合適，也不需要附加更多的有機(jī)附加物。是目前應(yīng)用最廣泛的一種培養(yǎng)基。特點(diǎn)2. B5培養(yǎng)基特點(diǎn)是含有較低的銨，這個(gè)成分可能對(duì)不少培養(yǎng)物生長(zhǎng)有抑制作用。從實(shí)踐中得知，有些植物在B5培養(yǎng)基中生長(zhǎng)更適宜，如雙子葉植物特別是木本植物。特點(diǎn)3. N6培養(yǎng)基的特點(diǎn)是成分簡(jiǎn)單，KNO3和(NH4)2SO4含量高且不含鉬。在國內(nèi)已廣泛

8、用于小麥、水稻及其他植物的花藥培養(yǎng)和組織培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)操作技術(shù)1. 外植體的選擇2. 外植體的滅菌3. 接種4. 培養(yǎng)5. 外植體褐化及防止6. 玻璃化及預(yù)防 外植體的選擇 外植體是指植物組織培養(yǎng)中的各種接種材料。除培養(yǎng)基成分外，決定外植體培養(yǎng)成敗的另一重要因素是外植體的來源。再有，不同品種、不同部位之間的分化能力都有巨大差別。 外植體的選擇1. 選擇合適的外植體部位 不同種類的植物以及同一植物的不同器官對(duì)誘導(dǎo)條件反應(yīng)是不一致的。在組織培養(yǎng)過程中，如何選擇合適的、最以表達(dá)全能性的部位是決定組織培養(yǎng)體系成功的前提之一。外植體的選擇2. 選擇優(yōu)良的種質(zhì) 無論是離體培養(yǎng)繁殖種苗，還是進(jìn)行生物技術(shù)研究，培

9、養(yǎng)材料的選擇都要從主要的植物入手，選取性狀優(yōu)良的種質(zhì)或特殊的基因型。對(duì)材料的選擇要有明確的目的，具有一定的代表性，以提高成功的幾率，增加其實(shí)用價(jià)值。 外植體的選擇3. 選擇健壯的植株 組織培養(yǎng)用的材料，最好從生長(zhǎng)健壯的無病蟲的植株上，選取發(fā)育正常的器官或組織。因?yàn)檫@些器官或組織代謝旺盛，再生能力強(qiáng)，培養(yǎng)后比較容易成功。此現(xiàn)象可能是由于外植體內(nèi)部的植物激素水平能夠在接種后得以維持所致。 外植體的選擇4. 選擇最適的時(shí)期 組織培養(yǎng)選擇材料時(shí)，要注意植物的生長(zhǎng)季節(jié)和植物的生長(zhǎng)發(fā)育階段。一般進(jìn)行快速繁殖時(shí)應(yīng)在植株生長(zhǎng)的最適時(shí)期取材，如選取莖尖，這樣不僅成活率高，而且生長(zhǎng)速度快，增殖率高，攜帶細(xì)菌數(shù)量較

10、少，在器官建成上也更為容易。此外，嫩葉、花蕾等攜菌量較少，容易形成愈傷組織。 外植體的選擇5. 選取適宜的大小 建立無菌材料時(shí)，取材的大小根據(jù)不同植物材料而異。材料太大易污染，也不需要；材料太小，多形成愈傷組織，甚至難于成活。一般選取培養(yǎng)材料的大小，在0.51.00cm之間。如果是胚胎培養(yǎng)或脫毒培養(yǎng)的材料，則應(yīng)更小。 外植體的滅菌 滅菌的目的是既要?dú)⑺啦牧媳砻娴娜课⑸铮忠粋Σ牧?，這要根據(jù)不同的材料，選用適當(dāng)?shù)南緞?、合適的濃度和處理時(shí)間，靈活掌握。能夠殺菌的消毒劑種類很多，但適于進(jìn)行植物材料殺菌的消毒劑種類并不多。 外植體的滅菌 常用滅菌劑的使用及其效果滅菌劑使用濃度(%)消除的難滅

11、菌時(shí)間(min)效果次氯酸鈉2易530很好次氯酸鈣9-10易530很好漂白粉飽和濃度易530很好氯化汞0.1-1較難210最好酒精7075易0.22好過氧化氫10-12最易515好溴水1-2易210很好硝酸銀1較難530好抗菌素4-50mg/L中3060較好外植體的滅菌1. 消毒步驟 用加有少許洗衣粉或洗潔精的水溶液洗12次或流水沖洗數(shù)小時(shí)7075%的酒精浸蘸幾秒鐘并搖動(dòng)0.10.2的升汞(氯化汞，HgC12)+ 0.1吐溫中-20的消毒液中浸泡35(或0.1升汞中浸泡10min) 并搖動(dòng)無菌水沖洗35次準(zhǔn)備接種。外植體的滅菌2.注意事項(xiàng)消毒時(shí)間 在酒精溶液中浸蘸的時(shí)間不能過長(zhǎng)，一般不超過30

12、秒，否則材料會(huì)嚴(yán)重脫水而死亡。在消毒液中消毒的時(shí)間隨材料的大小、忍耐力、種類和濃度而異，最好要做預(yù)備試驗(yàn)來加以確定。外植體的滅菌消毒液用量 消毒液用量一般應(yīng)是材料體積的510倍以上。消毒 消毒時(shí)一定要隨時(shí)搖動(dòng)，使材料表面盡可能全面地與消毒液接觸；消毒后的材料應(yīng)立即用無菌水清洗，并盡快切取所需外植體移入新鮮培養(yǎng)基上，減少在空氣中的暴露時(shí)間，避免材料的風(fēng)干和褐化。 外植體的接種 外植體的接種是把經(jīng)過表面滅菌后的植物材料切碎或分離出器官、組織、細(xì)胞，轉(zhuǎn)放到無菌培養(yǎng)基上的全部操作過程。整個(gè)接種過程均需無菌操作。 外植體的接種 注意事項(xiàng):1.操作人員須換經(jīng)滅菌的工作服，戴口罩。進(jìn)入接種室前，工作人員的雙

13、手必須進(jìn)行滅菌，進(jìn)行操作前再用70的酒精擦洗雙手。2.操作期間經(jīng)常用70的酒精擦拭雙手和臺(tái)面。外植體的接種 3. 在打開培養(yǎng)瓶、三角瓶或試管時(shí)，最大的污染危險(xiǎn)是管口邊沿沾染的微生物落入管內(nèi)。解決這個(gè)問題，可在打開前用火焰燒瓶口。4. 工具用后及時(shí)滅菌，避免交叉污染。5. 工作人員的呼吸也是污染的主要途徑。6. 由于空氣中有灰塵，因此在操作時(shí)，仍要注意避免灰塵的落入。培養(yǎng) 接種后的外植體應(yīng)送到培養(yǎng)室去培養(yǎng)。培養(yǎng)室的培養(yǎng)條件要根據(jù)植物對(duì)環(huán)境條件的不同需求進(jìn)行調(diào)控。其中最主要的是光照、溫度、濕度、氧氣和培養(yǎng)基的pH等。培養(yǎng) 1. 光照 光照對(duì)離體培養(yǎng)物的生長(zhǎng)發(fā)育具有重要的作用。通常對(duì)愈傷組織的誘導(dǎo)來

14、說，暗培養(yǎng)比光培養(yǎng)更合適。但器官的分化需要光照，并隨著試管苗的生長(zhǎng)，光照強(qiáng)度需要不斷地加強(qiáng)，才能使小苗生長(zhǎng)健壯，并促進(jìn)它從“異養(yǎng)”向“自養(yǎng)”轉(zhuǎn)化，以提高移植后的成活率。培養(yǎng) 2. 溫度 離體培養(yǎng)中對(duì)溫度的調(diào)控要比光照顯得更為突出。不同的植物有不同的最適生長(zhǎng)溫度，大多數(shù)植物最適溫度在2332之間。培養(yǎng)室一般所用的溫度是252。低于15或高于35，對(duì)生長(zhǎng)都是不利的。模仿自然界的晝夜溫差，夜間暗培養(yǎng)時(shí)適當(dāng)?shù)亟档蜏囟龋欣诮M培苗生長(zhǎng)健壯和誘導(dǎo)生根。 培養(yǎng) 3. 濕度 組織培養(yǎng)中的濕度影響主要有兩個(gè)方面，一是培養(yǎng)容器內(nèi)的濕度，它的濕度條件?？杀ＷC100；二是培養(yǎng)室的濕度，它的濕度變化隨季節(jié)和天氣而有很

15、大變動(dòng)。濕度過高過低都是不利的，過低會(huì)造成培養(yǎng)基失水而干枯，或滲透壓升高，影響培養(yǎng)物的生長(zhǎng)和分化；濕度過高會(huì)造成雜菌滋長(zhǎng)，導(dǎo)致大量污染。因此，要求室內(nèi)保持70一80的相對(duì)濕度。培養(yǎng) 4. 氧氣 植物組織培養(yǎng)中，外植體的呼吸需要氧氣。在液體培養(yǎng)中，振蕩培養(yǎng)是解決通氣的良好辦法。在固體培養(yǎng)中，最好采用通氣性好的瓶蓋或瓶塞。 此外，愈傷組織在培養(yǎng)基上生長(zhǎng)一段時(shí)間后，由于營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的枯竭，水分的散失，以及一些組織代謝產(chǎn)物的積累，必須將組織及時(shí)轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)基上。外植體褐變及防止 褐變是指外植體在培養(yǎng)過程中體內(nèi)的多酚氧化酶被激活，使細(xì)胞里的酚類物質(zhì)氧化成棕褐色的醌類物質(zhì)，這種致死性的褐化物不但向外擴(kuò)散致使

16、培養(yǎng)基逐漸變成褐色，而且還會(huì)抑制其他酶的活性，嚴(yán)重影響外植體的脫分化和器官分化，最后變褐而死亡的現(xiàn)象。 外植體褐變及防止 一、 褐變的原因 影響褐變的因素極其復(fù)雜，隨著植物種類、基因型、外植體的部位及生理狀況等的不同，褐變的程度也有所不同。 外植體褐變及防止 1.與基因型有關(guān) 不同植物與品種之間褐變現(xiàn)象是不同的，有人把此歸結(jié)為基因型的不同。一般來說植物材料中單寧類和多種羥酚類化合物的含量高，易引起外植體材料的嚴(yán)重褐化。多數(shù)木本植物比草本植物易引起褐化，多年生草本植物比一年生草本植物易引起褐化。外植體褐變及防止 2.與取樣外植體的年齡有關(guān) 通常幼齡部位產(chǎn)生褐化較輕，隨著組織的老齡化含醌類物質(zhì)增多

17、而褐化加重。因此，在外植體接種時(shí)常需要?jiǎng)內(nèi)[片和大葉片，尤其是以切取幼嫩的芽尖或切取頂芽分生組織(或帶少量葉原基)接種更為理想。外植體褐變及防止 3.與外植體取材時(shí)間有關(guān) 一般在春夏季，尤其是春季采取生長(zhǎng)旺盛的外植體產(chǎn)生褐化較輕，已木栓化或木質(zhì)化的枝條和處于休眠狀態(tài)的芽作為外植體時(shí)褐化嚴(yán)重。即分生部位接種后形成醌類物質(zhì)少，而分化的部位則形成醌類物質(zhì)較多。外植體褐變及防止 4.與培養(yǎng)基有關(guān)過 高的無機(jī)鹽濃度會(huì)引起棕櫚科植物外植體酚的氧化，低鹽培養(yǎng)基，尤其是Mn2+和 Cu2+離子濃度較低時(shí)，外植體的褐化程度較輕。例如油棕用MS無機(jī)鹽培養(yǎng)容易引起外植體的褐變，而用降低了無機(jī)鹽濃度的改良MS培養(yǎng)基時(shí)

18、則可減輕褐變，而且獲得愈傷組織和胚狀體。外植體褐變及防止 植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)使用不當(dāng)時(shí)，材料也容易褐變，細(xì)胞分裂素BA有刺激多酚氧化酶活性提高的作用，這一現(xiàn)象在甘蔗的組織培養(yǎng)中十分明顯。 培養(yǎng)基的PH值較低時(shí)常有利于減輕外植體的褐化。 一般在液體培養(yǎng)基和半固體培養(yǎng)基上褐化程度比在固體培養(yǎng)基上輕。外植體褐變及防止 5.培養(yǎng)條件不適宜 如溫度過高、光照過強(qiáng)、培養(yǎng)時(shí)間過長(zhǎng)等，均可使多酚氧化酶的活性提高，從而加速外植體的褐變。在咖啡組織培養(yǎng)中曾觀察到這一現(xiàn)象。外植體褐變及防止 6.材料轉(zhuǎn)移時(shí)間時(shí)間 過長(zhǎng)也會(huì)引起材料的褐變，以致全部死亡。 外植體褐變及防止 二、褐變的防止措施 1 選擇適宜的外植體及最佳培

19、養(yǎng)基 許多成功的經(jīng)驗(yàn)表明，選擇適當(dāng)?shù)耐庵搀w并建立最佳的培養(yǎng)條件是防止外植體褐變最主要的手段。外植體材料應(yīng)有較強(qiáng)的分生能力，在最適宜的細(xì)胞脫分化與再分化的培養(yǎng)條件下，使外植體處于旺盛的生長(zhǎng)狀態(tài)，便可大大減輕褐變。外植體褐變及防止 在培養(yǎng)條件的許多因子中，較為重要的是適宜的無機(jī)鹽成分、適宜的蔗糖濃度及激素水平。適宜的溫度及在黑暗條件下進(jìn)行培養(yǎng)也可顯著減少材料的褐變。如能在初始培養(yǎng)的16周內(nèi)用暗培養(yǎng)，或在150lx左右的光強(qiáng)下進(jìn)行光培養(yǎng)，可抑制酚類物質(zhì)氧化。外植體褐變及防止 2 連續(xù)轉(zhuǎn)移 對(duì)于易褐變的材料進(jìn)行連續(xù)轉(zhuǎn)移可以減輕醌類物質(zhì)對(duì)培養(yǎng)物的毒害作用。在無刺黑莓的莖尖培養(yǎng)中，接種后12d就轉(zhuǎn)入新鮮培

20、養(yǎng)基；在山月桂樹的莖尖培養(yǎng)中，接種1224h便轉(zhuǎn)入液體培養(yǎng)基，然后繼續(xù)每天轉(zhuǎn)移1次，連續(xù)7天，褐化便得到了完全控制。外植體褐變及防止 3 加抗氧化劑 在培養(yǎng)基中加入抗氧化劑，或用抗氧化劑進(jìn)行材料的預(yù)處理或預(yù)培養(yǎng)，可預(yù)防醌類物質(zhì)的形成?？寡趸瘎┌箟难?、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)和牛血清白蛋白等。在靜止的液體培養(yǎng)基中加入抗氧化劑比在固體培養(yǎng)基中加入抗氧化劑，效果要明顯得多。在倒掛金鐘莖尖培養(yǎng)中加入0.01PVP便對(duì)褐變有抑制作用。外植體褐變及防止 4 加活性炭 10.5的活性炭對(duì)吸附酚類氧化物的效果很明顯。在許多熱帶樹木的組織培養(yǎng)中均曾觀察到活性炭防止外植體褐變的明顯效果。玻璃化及預(yù)防 植物組

21、培玻璃化苗的葉和嫩梢呈水晶透明或半透明水漬狀；整株矮化腫脹、失綠；葉片皺縮成縱向卷曲，脆弱易碎；葉表缺少角質(zhì)層蠟質(zhì)，沒有功能性氣孔，不具柵欄組織，僅有海綿組織。玻璃化及預(yù)防 玻璃化苗中因其體內(nèi)含水量高，干物質(zhì)、葉綠素、蛋白質(zhì)、纖維素和酶活性降低，組織畸形，器官功能不全，分化能力降低，所以很難成活，嚴(yán)重影響組培苗繁殖率的提高。 玻璃化及預(yù)防 一、玻璃現(xiàn)象及其產(chǎn)生原因 玻璃化的起因是細(xì)胞生長(zhǎng)過程中的環(huán)境變化。試管苗為了適應(yīng)變化了的環(huán)境而呈玻璃狀。產(chǎn)生玻璃化苗的因素主要有激素濃度、瓊脂用量、溫度、離子水平、光照時(shí)間、通風(fēng)條件等。 玻璃化及預(yù)防 1.激素濃度 激素濃度增加尤其是細(xì)胞分裂素濃度提高(或細(xì)

22、胞分裂素與生長(zhǎng)素比例高)，易導(dǎo)致玻璃化苗的產(chǎn)生。產(chǎn)生玻璃化苗的細(xì)胞分裂素濃度因植物種類的不同而異。 細(xì)胞分裂素的主要作用是促進(jìn)芽的分化，打破頂端優(yōu)勢(shì)，促進(jìn)腋芽發(fā)生，因而玻璃化苗也表現(xiàn)為莖節(jié)較短、分枝較多的特點(diǎn)。使細(xì)胞分裂素增多的原因有以下幾種： 玻璃化及預(yù)防 1.培養(yǎng)基中一次性加入過多細(xì)胞分裂素，比如6BA、ZT等； 2.細(xì)胞分裂素與生長(zhǎng)素比例失調(diào)，細(xì)胞分裂素含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于生長(zhǎng)素，而使植物過多吸收細(xì)胞分裂素，體內(nèi)激素比例嚴(yán)重失調(diào)試管苗無法正常生長(zhǎng)，而導(dǎo)致玻璃化； 3.在多次繼代培養(yǎng)時(shí)愈傷組織和試管苗體內(nèi)累積過量的細(xì)胞分裂素。在初級(jí)培養(yǎng)相同的培養(yǎng)基，最初的幾代玻璃化現(xiàn)象很少，通常是繼代次數(shù)越多玻璃

23、化苗的比例越大。玻璃化及預(yù)防 2.瓊脂濃度 培養(yǎng)基中瓊脂濃度低時(shí)玻璃化苗比例增加，水浸狀嚴(yán)重，苗向上長(zhǎng)。隨著瓊脂濃度的增加，玻璃化苗比例減少，但由于硬化的培養(yǎng)基影響了養(yǎng)分的吸收，試管苗生長(zhǎng)減慢，分蘗亦減少。因此，瓊脂的濃度一定要適當(dāng)。玻璃化及預(yù)防 3.溫度 適宜的溫度可以使試管苗生長(zhǎng)良好，當(dāng)溫度低時(shí)，容易形成玻璃化苗，溫度越低玻璃化苗的比例越高。溫度高時(shí)玻璃化苗減少，且發(fā)生的時(shí)間較晚。玻璃化及預(yù)防 4.光照時(shí)間 不同的植物對(duì)光照的要求不同，滿足植物的光照時(shí)間，試管苗才能生長(zhǎng)正常。大多數(shù)植物在1012h光照下都能生長(zhǎng)良好，光照時(shí)數(shù)大于15h時(shí)，玻璃化苗的比例明顯增加。玻璃化及預(yù)防 5.通風(fēng)條件 試管苗生長(zhǎng)期間，要求有足夠的氣體交換，氣體交換的好壞取決于生長(zhǎng)量、瓶?jī)?nèi)空間、培養(yǎng)時(shí)間和瓶蓋種類。玻璃化及預(yù)防 6.離子水平 植物生長(zhǎng)需要一定的礦物質(zhì)營(yíng)養(yǎng)，如果營(yíng)養(yǎng)離子之間失去平衡，試管苗生長(zhǎng)就會(huì)受到影響。植物種類不同，對(duì)礦物質(zhì)的量、離子形態(tài)、離子間的比例要求不同。如果培養(yǎng)基中離子種類及其比例不適宜該種植物，玻璃化苗的比例就會(huì)增加。玻璃化及預(yù)防 二、預(yù)防措施 盡管玻璃化苗的出現(xiàn)已成為不少快速繁殖的中的普遍現(xiàn)象，但目前對(duì)某些植物的玻璃化已得到有效控制。玻璃化及預(yù)防 1.適當(dāng)控制培養(yǎng)基中無機(jī)營(yíng)養(yǎng)成分 大多數(shù)植物