X8月季的花藥培養(yǎng)

1、專題三 植物的組織培養(yǎng)技術(shù)課題課題2 2 月季的花藥培養(yǎng)月季的花藥培養(yǎng)秋水仙秋水仙素處理素處理花藥離花藥離體培養(yǎng)體培養(yǎng)單倍體育種單倍體育種AABBaabbPAaBbF1AAbbABAbaBab單倍體單倍體植株植株AABBAAbbaaBBaabb原理：原理：細(xì)胞的全能性細(xì)胞的全能性植株矮小，高度不育植株矮小，高度不育月季月季( (Rosa chinensis Jacq.) )玫瑰玫瑰(Rosa rugosa Thunb.)一年多生，花朵較大，花一年多生，花朵較大，花莖光滑、莖上刺少而粗，莖光滑、莖上刺少而粗，香味寡淡，果實(shí)圓形。香味寡淡，果實(shí)圓形。一年一生，花朵較小，花一年一生，花朵較小，花莖有

2、剛毛、莖上刺多而小，莖有剛毛、莖上刺多而小，香味濃郁，果實(shí)扁圓形。香味濃郁，果實(shí)扁圓形。被子植物：被子植物：種子種子有果皮和種皮有果皮和種皮包被的植物。包被的植物。被子植物和裸子植物被子植物和裸子植物裸子植物：裸子植物：種子種子沒(méi)有果皮沒(méi)有果皮，但有種皮但有種皮包被的植物。包被的植物。實(shí)例：向日葵、梨、月季等實(shí)例：向日葵、梨、月季等開(kāi)花并結(jié)果的植物開(kāi)花并結(jié)果的植物。實(shí)例：松、杉、柏等。實(shí)例：松、杉、柏等。花的結(jié)構(gòu)花絲：花絲：輸送輸送營(yíng)養(yǎng)營(yíng)養(yǎng)花藥：花藥：囊狀結(jié)構(gòu)囊狀結(jié)構(gòu)，內(nèi)有很多花粉，內(nèi)有很多花粉( (細(xì)胞）細(xì)胞）2 2、花粉母細(xì)胞、花粉母細(xì)胞(小孢子母細(xì)胞小孢子母細(xì)胞) 花粉花粉( (未成熟未

3、成熟) ) 即：即：?jiǎn)伪扼w的生殖細(xì)胞單倍體的生殖細(xì)胞3 3、發(fā)育階段：、發(fā)育階段：四分體時(shí)期、單核期、雙核期四分體時(shí)期、單核期、雙核期（一）被子植物的花粉發(fā)育（一）被子植物的花粉發(fā)育1 1、雄蕊、雄蕊基礎(chǔ)知識(shí)基礎(chǔ)知識(shí)減數(shù)分裂減數(shù)分裂花粉管細(xì)胞核花粉管細(xì)胞核生殖生殖細(xì)胞細(xì)胞核核花粉發(fā)育過(guò)程圖花粉發(fā)育過(guò)程圖小孢小孢子母子母細(xì)胞細(xì)胞花粉花粉母細(xì)母細(xì)胞胞4 4個(gè)小個(gè)小孢子孢子減減數(shù)數(shù)分分裂裂 小孢子小孢子四分四分體體時(shí)期時(shí)期單核居中期單核居中期單核靠邊期單核靠邊期雙核期雙核期有絲分裂有絲分裂2 2個(gè)精子個(gè)精子有絲分裂有絲分裂營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞單核期單核期生殖細(xì)胞生殖細(xì)胞1 1花粉母細(xì)花粉母細(xì)胞胞（2n2

4、n）4 4個(gè)小孢子個(gè)小孢子( (小孢子四分體小孢子四分體) )（n n）減分減分有分有分1 1個(gè)花粉管細(xì)胞核個(gè)花粉管細(xì)胞核（n n）1 1個(gè)生殖細(xì)胞核個(gè)生殖細(xì)胞核（n n）有分有分2 2個(gè)精子個(gè)精子單核居中期單核居中期（n n）單核靠邊期單核靠邊期（n n）即即4 4個(gè)單倍體細(xì)胞個(gè)單倍體細(xì)胞雙雙核核期期單核期單核期基因型相同基因型相同雌蕊的結(jié)構(gòu)雌蕊的結(jié)構(gòu)（二）產(chǎn)生花粉植株（二）產(chǎn)生花粉植株( (單倍體植株單倍體植株) )的兩種途徑的兩種途徑花粉花粉花粉花粉胚狀體胚狀體愈傷組織愈傷組織叢芽叢芽生根生根移栽移栽脫分化脫分化分化分化再分化再分化誘導(dǎo)誘導(dǎo)脫分化脫分化說(shuō)明：說(shuō)明：兩種途徑之間并沒(méi)有絕對(duì)的

5、界限，主要取兩種途徑之間并沒(méi)有絕對(duì)的界限，主要取決于培養(yǎng)基中決于培養(yǎng)基中激素的種類及其濃度的配比激素的種類及其濃度的配比?；A(chǔ)知識(shí)基礎(chǔ)知識(shí)花粉花粉花粉花粉胚狀體胚狀體愈傷組織愈傷組織叢芽叢芽生根生根移栽移栽脫分化脫分化分化分化再分化再分化誘導(dǎo)誘導(dǎo)脫分化脫分化基礎(chǔ)知識(shí)基礎(chǔ)知識(shí)胚狀體胚狀體( (體細(xì)胞胚或花粉胚）體細(xì)胞胚或花粉胚）組織培養(yǎng)過(guò)程中，某些組織培養(yǎng)過(guò)程中，某些離體的體細(xì)胞或花粉細(xì)胞離體的體細(xì)胞或花粉細(xì)胞轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)變變成的成的與胚非常相似的結(jié)構(gòu)與胚非常相似的結(jié)構(gòu)。( (也具有胚芽、胚根、胚軸也具有胚芽、胚根、胚軸等結(jié)構(gòu)）等結(jié)構(gòu)）胚狀體的發(fā)育過(guò)程和正常胚類似。胚狀體的發(fā)育過(guò)程和正常胚類似。（二）產(chǎn)

6、生花粉植株（二）產(chǎn)生花粉植株( (單倍體植株單倍體植株) )的兩種途徑的兩種途徑（三）影響花藥培養(yǎng)的因素（三）影響花藥培養(yǎng)的因素 1 1、材料的選擇、材料的選擇 此外，此外，親本親本生長(zhǎng)條件生長(zhǎng)條件、材料低溫預(yù)處理材料低溫預(yù)處理、接種密度接種密度等等 2 2、培養(yǎng)基的組成、培養(yǎng)基的組成 從從花藥花藥所處時(shí)期看：所處時(shí)期看： 從從花粉花粉發(fā)育時(shí)期看：發(fā)育時(shí)期看： 從從花蕾花蕾開(kāi)放程度看：開(kāi)放程度看：初花期初花期( (花期早期花期早期) )的花藥的花藥單核期單核期( (單核靠邊期單核靠邊期) )的花粉的花粉完全未開(kāi)放的花蕾完全未開(kāi)放的花蕾為什么花瓣松動(dòng)會(huì)給材料的消毒帶來(lái)為什么花瓣松動(dòng)會(huì)給材料的消毒

7、帶來(lái)困難？困難？為什么為什么選擇完全未開(kāi)放的花蕾作花藥選擇完全未開(kāi)放的花蕾作花藥離體培養(yǎng)的材料離體培養(yǎng)的材料？花瓣松動(dòng)，微生物可能侵入到花花瓣松動(dòng)，微生物可能侵入到花藥藥，給消毒帶來(lái)困難。，給消毒帶來(lái)困難。2 2、含菌少、易消毒、含菌少、易消毒1 1、可挑選到單核期的花藥、可挑選到單核期的花藥實(shí)驗(yàn)操作1 1、材料的選取、材料的選取2 2、材料的消毒、材料的消毒3 3、接種和培養(yǎng)、接種和培養(yǎng)4 4、鑒定和篩選鑒定和篩選1 1、材料、材料選取選取通過(guò)通過(guò)鏡檢鏡檢確定確定花粉花粉是否處于適宜的發(fā)育期是否處于適宜的發(fā)育期： 最常用的方法最常用的方法：醋酸洋紅法醋酸洋紅法( (將細(xì)胞核染成紅色）將細(xì)胞核

8、染成紅色） 某些植物的花粉某些植物的花粉細(xì)胞核不易著色細(xì)胞核不易著色：焙花青焙花青- -鉻礬法鉻礬法， 將將花粉細(xì)胞核染成花粉細(xì)胞核染成藍(lán)黑色藍(lán)黑色。 從花藥的時(shí)期看：從花藥的時(shí)期看： 從花粉發(fā)育期看：從花粉發(fā)育期看： 從花蕾開(kāi)程度看：從花蕾開(kāi)程度看：選擇適宜的月季花藥選擇適宜的月季花藥初花期的花藥初花期的花藥單核期的花粉單核期的花粉完全未開(kāi)放的花蕾完全未開(kāi)放的花蕾2 2、材料的消毒、材料的消毒花花蕾蕾（7070酒精酒精）約約30s30s（無(wú)菌水）（無(wú)菌水）清洗清洗（無(wú)菌吸水紙）（無(wú)菌吸水紙） 吸干水分吸干水分（0.10.1氯氯化汞溶液化汞溶液）（無(wú)菌水）（無(wú)菌水）沖洗沖洗提示：提示： 用于培

9、養(yǎng)花藥的花蕾，用于培養(yǎng)花藥的花蕾，外面有花萼、花瓣保護(hù)，外面有花萼、花瓣保護(hù)，通常處于無(wú)菌狀態(tài)通常處于無(wú)菌狀態(tài)，所以只需將整個(gè)花蕾消毒即可。，所以只需將整個(gè)花蕾消毒即可。思考：思考：月季花蕾的消毒與菊花外植體的消毒相比，二月季花蕾的消毒與菊花外植體的消毒相比，二者有何不同？者有何不同？ 在酒精消毒前，花藥不需要預(yù)先用流水沖洗、洗在酒精消毒前，花藥不需要預(yù)先用流水沖洗、洗衣粉洗滌和軟刷刷洗。衣粉洗滌和軟刷刷洗。 在在無(wú)菌條件下無(wú)菌條件下除去除去花蕾的花蕾的萼片和花瓣萼片和花瓣，取出花藥取出花藥b b、要徹底去除花絲、要徹底去除花絲取出花藥后取出花藥后立即立即接種于培養(yǎng)基上，每瓶接種花藥接種于培養(yǎng)

10、基上，每瓶接種花藥7-107-10個(gè)。個(gè)。剝?nèi)』ㄋ巹內(nèi)』ㄋ巃 a、盡量不損傷花藥、盡量不損傷花藥接種接種注意：注意：3 3、接種和培養(yǎng)、接種和培養(yǎng)溫度控制在溫度控制在2525左右左右，不需要光照。，不需要光照。幼小植株形成幼小植株形成后才需要光照后才需要光照。 培養(yǎng)培養(yǎng)培養(yǎng)培養(yǎng)20-3020-30天天后后，花藥，花藥分裂形成分裂形成愈傷組織或胚狀體愈傷組織或胚狀體l 若形成胚狀體若形成胚狀體：一個(gè)花藥會(huì)產(chǎn)生大量幼小植株，：一個(gè)花藥會(huì)產(chǎn)生大量幼小植株，必必須盡快將幼小植株分開(kāi)，須盡快將幼小植株分開(kāi)，分別移植到新的培養(yǎng)基上。分別移植到新的培養(yǎng)基上。l 若形成愈傷組織若形成愈傷組織：應(yīng)及時(shí)將愈傷組織

11、：應(yīng)及時(shí)將愈傷組織轉(zhuǎn)移到分化轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基上培養(yǎng)基上，以便進(jìn)一步分化出再生植株，以便進(jìn)一步分化出再生植株在花藥培養(yǎng)中，特別是通過(guò)在花藥培養(yǎng)中，特別是通過(guò)愈傷組織愈傷組織形成的花形成的花粉植株，染色體組的數(shù)目常常會(huì)發(fā)生改變。粉植株，染色體組的數(shù)目常常會(huì)發(fā)生改變。（主要原因是營(yíng)養(yǎng)核和生殖核融合造成的主要原因是營(yíng)養(yǎng)核和生殖核融合造成的）4 4、鑒定和篩選、鑒定和篩選菊花組織培養(yǎng)與月季花藥離體培養(yǎng)的比較菊花組織培養(yǎng)與月季花藥離體培養(yǎng)的比較比較項(xiàng)目比較項(xiàng)目菊花菊花組織培養(yǎng)組織培養(yǎng)月季月季花藥離體培養(yǎng)花藥離體培養(yǎng)原理原理植物激素植物激素染色體倍染色體倍性的鑒定性的鑒定材料材料培養(yǎng)結(jié)果培養(yǎng)結(jié)果 細(xì)胞的全能性細(xì)胞的全能性體細(xì)胞體細(xì)胞花藥花藥( (花粉）花粉）正常植株正常植株單倍體植株單倍體植株不必添加不必添加需要添加需要添加不需要不需要需要需要Thanks!提示：提示：二核花粉粒二核花粉粒：成熟的花粉粒中，只含花粉管細(xì)胞