DNA的粗提取與鑒定

1、學(xué)生活動(dòng)學(xué)生活動(dòng)1:一、原理分析學(xué)生活動(dòng)學(xué)生活動(dòng)2:DNA在在在NaClNaCl溶液濃度低于溶液濃度低于0.14 mol/L0.14 mol/L時(shí)，時(shí)，DNADNA的溶解度隨的溶解度隨NaClNaCl溶液濃度溶液濃度的 增 加 而 逐 漸 降 低 ； 在的 增 加 而 逐 漸 降 低 ； 在 0 . 1 4 0 . 1 4 mol/Lmol/L時(shí)，時(shí)，DNADNA溶解度最??；當(dāng)溶解度最?。划?dāng)NaClNaCl溶液濃度繼續(xù)增加時(shí)，溶液濃度繼續(xù)增加時(shí)，DNADNA的的溶解度又逐漸增大。溶解度又逐漸增大。當(dāng)氯化鈉的物質(zhì)的量濃度為 2 molL時(shí)，DNA的溶解度最大，濃度為 014 molL時(shí)，DNA的

2、溶解度最低。利用這一原理，可以使DNA在鹽溶液中溶解或析出。二、實(shí)驗(yàn)方法及注意事項(xiàng)學(xué)生活動(dòng)學(xué)生活動(dòng)3:4、如果研磨不充分，會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生怎樣的影響？此步驟獲得的濾液中可能含有哪些細(xì)此步驟獲得的濾液中可能含有哪些細(xì)胞成分？胞成分？探究活動(dòng)探究活動(dòng)4:為了純化提取的DNA需要將濾液作怎樣的進(jìn)一步處理？為什么反復(fù)地溶解與析出DNA，能夠去除雜質(zhì)？方案二和方案三的原理有什么不同？學(xué)生活動(dòng)學(xué)生活動(dòng)4: 取質(zhì)量濃度為取質(zhì)量濃度為0.1g/ml的檸檬酸鈉溶液（抗凝劑）的檸檬酸鈉溶液（抗凝劑）100ml，置于，置于燒杯中，將新鮮雞血燒杯中，將新鮮雞血180ml注入，同時(shí)用玻璃棒攪拌，以免凝血，注入，同時(shí)用玻

3、璃棒攪拌，以免凝血，然后倒入離心管中用然后倒入離心管中用1000r/min的離心機(jī)離心的離心機(jī)離心2min，此時(shí)，此時(shí)，血細(xì)胞血細(xì)胞沉淀于離心管的底部沉淀于離心管的底部，除去上清液，就可以得到雞血細(xì)胞液。，除去上清液，就可以得到雞血細(xì)胞液。問(wèn)：?jiǎn)枺禾崛‰u血中的提取雞血中的DNA時(shí)，為什么要除去血液時(shí)，為什么要除去血液中的上清液？中的上清液？實(shí)例：雞血細(xì)胞實(shí)例：雞血細(xì)胞DNA粗提取粗提取1、制備雞血細(xì)胞液、制備雞血細(xì)胞液雞血細(xì)胞液雞血細(xì)胞液答：上清液是血清，不答：上清液是血清，不含有血細(xì)胞，而含有血細(xì)胞，而DNA存存在于雞血細(xì)胞中，所以在于雞血細(xì)胞中，所以要把上清液除去。要把上清液除去。 沉淀沉

4、淀加入濃度為加入濃度為0.1g/ml的檸的檸檬酸鈉溶液（抗凝劑）：檬酸鈉溶液（抗凝劑）：防止雞血細(xì)胞液凝固。防止雞血細(xì)胞液凝固。新鮮雞血新鮮雞血2、提取雞血細(xì)胞的細(xì)胞核物質(zhì)、提取雞血細(xì)胞的細(xì)胞核物質(zhì) 將制備好的雞血細(xì)胞液將制備好的雞血細(xì)胞液5-10ml，注入燒杯中，加入蒸餾水，注入燒杯中，加入蒸餾水20ml，同時(shí)用玻璃棒沿一個(gè)方向快速攪拌，使同時(shí)用玻璃棒沿一個(gè)方向快速攪拌，使血細(xì)胞的細(xì)胞膜和核膜加速血細(xì)胞的細(xì)胞膜和核膜加速破裂破裂，過(guò)濾，取其，過(guò)濾，取其濾液濾液。過(guò)濾過(guò)濾雞血細(xì)胞液雞血細(xì)胞液加入蒸餾水加入蒸餾水20ml。目的是：使細(xì)胞吸水漲破，目的是：使細(xì)胞吸水漲破，釋放出細(xì)胞中的釋放出細(xì)胞中

5、的DNA。獲得含核物質(zhì)濾液獲得含核物質(zhì)濾液 將將NaCl加入到濾液中，使加入到濾液中，使NaCl溶液物質(zhì)的量濃度為溶液物質(zhì)的量濃度為2mol/L，攪，攪拌使其混合均勻，這時(shí)拌使其混合均勻，這時(shí)DNA在溶液中呈溶解狀態(tài)。在溶液中呈溶解狀態(tài)。3、溶解細(xì)胞核內(nèi)的、溶解細(xì)胞核內(nèi)的DNA DNA溶解液溶解液取含核物質(zhì)濾液取含核物質(zhì)濾液加入濃度氯化鈉加入濃度氯化鈉用紗布過(guò)濾，取其濾液，用紗布過(guò)濾，取其濾液，DNA溶于濾液中溶于濾液中4、過(guò)濾含有、過(guò)濾含有DNA的氯化鈉的氯化鈉濃度為濃度為2mol/l的氯的氯化鈉溶液化鈉溶液過(guò)濾過(guò)濾獲得含獲得含DNA的濾液的濾液 沿?zé)瓋?nèi)壁緩緩加入蒸餾水，同時(shí)輕輕攪拌，這時(shí)

6、會(huì)有絲狀物出沿?zé)瓋?nèi)壁緩緩加入蒸餾水，同時(shí)輕輕攪拌，這時(shí)會(huì)有絲狀物出現(xiàn)，隨著蒸餾水的加入逐漸增多，一直到現(xiàn)，隨著蒸餾水的加入逐漸增多，一直到氯化鈉濃度約為氯化鈉濃度約為0.14mol/l時(shí)時(shí)，不再繼續(xù)增加。不再繼續(xù)增加。過(guò)濾過(guò)濾6、濾取含、濾取含DNA 的黏稠物的黏稠物5、析出含、析出含DNA的黏稠物的黏稠物加入蒸餾水。加入蒸餾水。目的是：降低目的是：降低NaCI的濃的濃度，析出度，析出DNA。獲得獲得DNA的的黏稠物黏稠物(白色白色乳狀乳狀) 在溶液中加入在溶液中加入冷卻的酒精溶液冷卻的酒精溶液50ml，溶液中出現(xiàn)雜質(zhì)較少，溶液中出現(xiàn)雜質(zhì)較少的絲狀物（它的主要成分就是的絲狀物（它的主要成分就

7、是DNA）。）。7、進(jìn)一步提取含雜質(zhì)較少的、進(jìn)一步提取含雜質(zhì)較少的DNA加入冷卻的酒精加入冷卻的酒精溶液溶液50ml含含DNA的濾液的濾液析出含析出含DNA雜質(zhì)較少的雜質(zhì)較少的絲狀物絲狀物8、DNA的鑒定的鑒定 取兩支取兩支20 mL的試管，各加入濃度為的試管，各加入濃度為0.015 molL的氯化鈉溶液的氯化鈉溶液5 mL，將絲狀物放入其中一支試管中，用玻璃棒攪拌，使絲狀物溶解。，將絲狀物放入其中一支試管中，用玻璃棒攪拌，使絲狀物溶解。然后，向兩支試管中各加入然后，向兩支試管中各加入4mL的二苯胺試劑?；旌暇鶆蚝?，將試管的二苯胺試劑?；旌暇鶆蚝螅瑢⒃嚬苤糜诜兴屑訜嶂糜诜兴屑訜?5 min

8、，待試管冷卻后，觀察并且比較兩支試管中溶液，待試管冷卻后，觀察并且比較兩支試管中溶液顏色的變化。顏色的變化。 加入加入0.015氯化氯化鈉溶液鈉溶液5 mL不加入絲狀物不加入絲狀物加入加入4mL的二的二苯胺試劑苯胺試劑DNA+二苯胺二苯胺藍(lán)色藍(lán)色加入加入0.015氯化氯化鈉溶液鈉溶液5 mL加入加入絲狀物絲狀物加入加入4mL的二的二苯胺試劑苯胺試劑步驟步驟操作或加入的試劑操作或加入的試劑作用作用制備雞血細(xì)胞制備雞血細(xì)胞液液試劑：檸檬酸鈉試劑：檸檬酸鈉提取雞血細(xì)胞提取雞血細(xì)胞的細(xì)胞核物質(zhì)的細(xì)胞核物質(zhì)試劑：蒸餾水試劑：蒸餾水過(guò)濾溶解細(xì)胞核內(nèi)溶解細(xì)胞核內(nèi)的的DNA 試劑：試劑：2mol/L的的NaC

9、l溶液溶液過(guò)濾析出含析出含DNA的黏稠物的黏稠物試劑：蒸餾水試劑：蒸餾水過(guò)濾進(jìn)一步提取含進(jìn)一步提取含雜質(zhì)較少的雜質(zhì)較少的DNA試劑：冷卻的試劑：冷卻的95%酒精溶液酒精溶液鑒定鑒定試劑：二苯胺（注意：沸水?。┰噭憾桨罚ㄗ⒁猓悍兴。┓乐寡耗谭乐寡耗虧q破雞血細(xì)胞，釋漲破雞血細(xì)胞，釋放核物質(zhì)放核物質(zhì)取濾液取濾液溶解溶解DNA取濾液取濾液降低降低NaCl溶液濃度，溶液濃度，析出析出DNA取濾渣取濾渣溶解雜質(zhì)溶解雜質(zhì)檢測(cè)檢測(cè)DNA加入檸檬酸鈉溶液的目的是防止血凝固加入檸檬酸鈉溶液的目的是防止血凝固加速血細(xì)胞破裂加速血細(xì)胞破裂 溶解溶解DNA 使使2mol/L的的NaCl溶液稀釋至溶液稀釋至

10、0.14mol/L使得使得DNA最大限度地釋出最大限度地釋出 使含使含DNA的黏稠物被留在紗布上的黏稠物被留在紗布上使含使含DNA的黏稠物盡可能多的溶解于溶液中的黏稠物盡可能多的溶解于溶液中除去含除去含DNA的濾液中的雜質(zhì)的濾液中的雜質(zhì)提取提取DNA A出現(xiàn)藍(lán)色出現(xiàn)藍(lán)色 B無(wú)變化無(wú)變化2.實(shí)驗(yàn)中實(shí)驗(yàn)中NaCl的物質(zhì)的量濃度為的物質(zhì)的量濃度為2 molL和和0.14 molL對(duì)對(duì)DNA有何影響有何影響?1.在在DNA的粗提取實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，兩次向燒杯的粗提取實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，兩次向燒杯中加入蒸餾水的作用是中加入蒸餾水的作用是( )。A.稀釋血液、沖洗樣品稀釋血液、沖洗樣品B.使血細(xì)胞破裂、降低使血細(xì)胞破裂、降低NaCl濃度使?jié)舛仁笵NA析出析出C.使血細(xì)胞破裂、增大使血細(xì)胞破裂、增大DNA溶解量溶解量 D.使血細(xì)胞破裂、提取含雜質(zhì)較少的使血細(xì)胞破裂、提取含雜質(zhì)較少的DNA答：答：B答：前者是溶解答：前者是溶解DNA，后者是使，后者是使DNA析出析出3.DNA3.DNA遇二苯胺遇二苯胺( (沸水浴沸水浴) )會(huì)染成會(huì)染成( ) ( ) A. A.磚紅色磚紅色 B.B.橘黃色橘黃色 C.C.紫