高效液相色譜儀期間核查操作規(guī)程

1、高效液相色譜儀期間核查操作規(guī)程文件編碼：版本號：02 項 目姓 名簽 名日 期起 草審 核審 核批 準(zhǔn)生效日期分發(fā)范圍及分發(fā)號分 發(fā) 號目 錄一、目的1二、適用范圍1三、內(nèi)容1四、附件5五、變更歷史5一、 目的為了使高效液相色譜儀保持良好的運行狀態(tài)，企業(yè)內(nèi)部定期對儀器進(jìn)行校準(zhǔn)；本規(guī)程規(guī)定了公司高效液相色譜儀期間核查的項目、方法及周期，使質(zhì)量部校準(zhǔn)小組有章可循。二、 適用范圍本規(guī)程適用于公司高效液相色譜儀的期間核查工作。三、 內(nèi)容1. 制定依據(jù)1.1. 中國藥典2010年版二部1.2. 高效液相色譜法操作規(guī)程（C08-0128）1.3. 液相色譜儀檢定規(guī)程（JJG705-2002）1.4. 藥品

2、生產(chǎn)驗證指南（國家食品藥品監(jiān)督管理局）2003年版2. 通用技術(shù)要求2.1. 儀器外觀儀器上應(yīng)有儀器的名稱、型號、制造廠名、產(chǎn)品系列號等標(biāo)牌。2.2. 儀器電路系統(tǒng)儀器電源線、信號線插接緊密，各開關(guān)、按鍵、旋鈕等功能正常，指示燈靈敏，顯示器正常。3. 計量器具控制3.1. 校準(zhǔn)條件3.1.1. 環(huán)境條件a. 校準(zhǔn)室應(yīng)清潔無塵、無易燃、易爆、腐蝕性氣體，通風(fēng)良好；b. 室溫在15-30，校準(zhǔn)過程中溫度變化不超過3（對示差折光檢測器溫度變化不超過2，室內(nèi)濕度在10%-75%RH范圍內(nèi)；c. 儀器應(yīng)平穩(wěn)放在工作臺上，周圍無強烈機械震動和電磁干擾源，儀器接地良好；d. 電源電壓為（220±2

3、2）V。3.1.2. 校準(zhǔn)設(shè)備a. 秒表：分度值不大于0.1s；b. 分析天平：最大載荷應(yīng)大于220g，最小分度值應(yīng)小于0.01mg；c. 容量瓶：10ml 9個。以上計量器具需經(jīng)檢定合格3.1.3. 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)1×10-4、1×10-7萘/甲醇溶液1×10-3丙三醇/水溶液大豆油對照品（中檢所）4. 校準(zhǔn)項目、接受標(biāo)準(zhǔn)及周期（表1）表1 期間核查項目、接受標(biāo)準(zhǔn)及周期期間核查項目企業(yè)接受標(biāo)準(zhǔn)校準(zhǔn)周期外觀檢查應(yīng)符合規(guī)定6個月泵流量設(shè)定值誤差（%）2泵流量穩(wěn)定性誤差（%）2檢測器紫外、二極管陣列檢測器示差折光檢測器蒸發(fā)光散射檢測器基線噪聲5×10-4（AU）5

4、×10-4（AU）5×10-3（AU）基線漂移5×10-3（AU/h）5×10-3（AU/h）1×10-2（AU/h）波長準(zhǔn)確度±2（nm）/最小檢測濃度1×10-7（萘g/ml）5×10-6(丙三醇/水g/ml)1×10-6（大豆油g/ml）定量重復(fù)性（%）2.02.02.0定性重復(fù)性（%）1.51.51.55. 期間核查方法5.1. 外觀檢查按2.1、2.2條的要求，用目視、手動檢查5.2. 輸液系統(tǒng)檢查5.2.1. 泵流量設(shè)定值誤差Ss、流量穩(wěn)定性誤差SR檢查按下表2的要求以純化水為流動相，啟動儀器

5、，設(shè)定流量，待壓力穩(wěn)定后，在流動相出口處用事先清洗稱重過的容量瓶收集流動相，同時用秒表計時，收集表2規(guī)定時間流出的流動相，在分析天平上稱重，按式（1）、式（2）、式（3）計算Ss和SRFm=(W2-W1)/r·t 式(1)SS=F-FS/FS × 100% 式(2)SR=(Fmax-F min) /F × 100% 式(3)式中: Fm:流量實測值，ml/min ; W2:容量瓶+流動相的質(zhì)量，g; W1:容量瓶的質(zhì)量，g; r:實驗溫度下流動相的密度，g/cm3 ;FS:流量設(shè)定值，ml/min; T:收集流動相的時間，min; Fmax:同一組測量中流量最大值

6、，ml/min; Fmin:同一組測量中流量最小值，ml/min ;F: 同一組測量的算術(shù)平均值，ml/min；表2 泵流量設(shè)定值誤差Ss、流量穩(wěn)定性誤差SR的技術(shù)要求流量設(shè)定值（ml/min）0.5 1.02.0測量次數(shù)3 33流動相相收集時間(min）1055允許誤差SS3% 2%2% SR2% 2%2%5.3. 檢測器5.3.1. 紫外檢測器、二極管陣列檢測器a. 基線噪聲和基線漂移將儀器的各部分連接好，紫外檢測器波長調(diào)到254nm，流動相為100%甲醇，柱溫35，流速為1.0ml/min，吸收度范圍選擇最靈敏檔，開機，待基線穩(wěn)定后，記錄基線30分鐘，計算基線漂移和噪聲。b. 波長準(zhǔn)確度

7、通過儀器診斷軟件的波長校準(zhǔn)功能進(jìn)行測試，待測試通過后，在診斷軟件界面打印校準(zhǔn)報告。報告中線/656nm處校準(zhǔn)的真實值與656nm之間的偏差即為波長校準(zhǔn)偏差。注：波長校準(zhǔn)需要大約3.5min，在燈打開后的開始10min不能做，應(yīng)為初始漂移將干擾測量。此方法適用于agilent系列儀器c. 最小檢測濃度在（5.3.1中a）色譜條件下，注入20ul 1×10-7g/ml萘/甲醇溶液，記錄色譜圖，由色譜峰高和基線噪聲峰高，按式（4）計算最小檢測濃度CtCt=3·HN .C/H 式（4）式中：Ct:最小檢測濃度（g/ml）HN:噪聲峰高（m AU）C:樣品濃度（g/ml）H:樣品峰高

8、（m AU）d. 定量重復(fù)性和定性重復(fù)性將1×104g/ml 萘的甲醇溶液，注入高效液相色譜儀中，檢測波長254nm，流動相為100%甲醇，流速1.0ml/min，柱溫35，進(jìn)樣量20ul。重復(fù)進(jìn)樣6次，計算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）。5.3.2. 示差折光檢測器a. 基線噪聲和基線漂移采用C18色譜柱，將儀器各部分連接號，以HPLC用水為流動相，流速1ml/min，參比池充滿流動相，靈敏度選擇在最靈敏擋，接通電源，待儀器穩(wěn)定后記錄基線30min，計算基線漂移和噪聲。（試驗中應(yīng)特別注意，室溫的波動不超過2）b. 最小檢測濃度在（5.3.2中a）色譜條件下，注入20ul 1×10

9、-5g/ml丙三醇水溶液，記錄色譜圖，由色譜峰高和基線噪聲峰高，按式（4）計算最小檢測濃度Ctc. 定量重復(fù)性和定性重復(fù)性在（5.3.2中a）色譜條件下，將1×10-3g/ml丙三醇水溶液注入高效液相色譜儀中，進(jìn)樣量20ul。重復(fù)進(jìn)樣6次，計算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）。5.3.3. 蒸發(fā)光散射檢測器a. 基線噪聲和基線漂移將儀器的各部分連接好，蒸發(fā)光漂移管溫度為70，載氣流速：2.6L/min流動相為正己烷:異丙醇：冰乙酸（98.9：1:0.1），流速為0.9ml/min，開機，待系統(tǒng)平衡后，記錄基線30-40分鐘，計算基線漂移和噪聲。b. 最小檢測濃度在（5.3.3中a）色譜條件下，

10、注入10ul 1×10-6g/ml大豆油對照品溶液（流動相溶解），記錄色譜圖，由色譜峰高和基線噪聲峰高，按式（4）計算最小檢測濃度Ctc. 定量重復(fù)性和定性重復(fù)性在（5.3.3中a）色譜條件下，注入10ul 1×10-4g/ml大豆油對照品溶液（流動相溶解），重復(fù)進(jìn)樣6次，計算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）。6. 期間核查后的評估與放行6.1. 期間核查結(jié)果應(yīng)經(jīng)過審核或評估，只有期間核查結(jié)果滿足接受標(biāo)準(zhǔn)的儀器才能放行使用。6.2. 當(dāng)期間核查沒有在規(guī)定的日期前完成，或期間核查結(jié)果不合格時，儀器應(yīng)放置“停用”標(biāo)識。6.3. 當(dāng)有下列情況發(fā)生時，應(yīng)及時通知質(zhì)量部QA經(jīng)理根據(jù)公司的偏差處理程序進(jìn)行偏差調(diào)查，并對使用該儀器所產(chǎn)生的實驗數(shù)據(jù)進(jìn)行相應(yīng)評估：6.3.1. 定期期間核查結(jié)果超出接受標(biāo)準(zhǔn)；6.3.2. 超出期間核查期的儀器被使用時。6.