任務(wù)二 維生素C注射液的含量測定

1、維生素維生素C的含量測定的含量測定組別：2組組員：王鵬飛 李東 于天齊 蘇劍為什么要維生素為什么要維生素C測定的含量測定的含量？v 精密量取本品適量，用水稀釋制成每精密量取本品適量，用水稀釋制成每1ml1ml中約含中約含2020g g的溶的溶液，照肌苷項(xiàng)下的方法測定，計(jì)算，即得。液，照肌苷項(xiàng)下的方法測定，計(jì)算，即得。u 色譜分析法色譜分析法高效液相色譜法、氣相色譜法高效液相色譜法、氣相色譜法 舉例舉例維生素維生素C 注射液注射液怎么測定的含量？怎么測定的含量？一、背景知識(shí) 高效液相色譜概述 基本原理 液相色譜儀二、 HPLC儀器 高壓輸液泵 梯度淋洗裝置 進(jìn)樣裝置 高效分離柱 高效液相色譜檢測

2、器三、實(shí)驗(yàn)儀器、設(shè)備與藥品 液相色譜儀測定的檢測流程 數(shù)據(jù)采集與分析 測定測定維生素維生素C的含量的含量高效液相色譜法背景知識(shí)背景知識(shí)v概念概念v 色譜法色譜法: :利用組分在利用組分在兩相兩相間分配系數(shù)不同而進(jìn)行分離的技術(shù)。間分配系數(shù)不同而進(jìn)行分離的技術(shù)。v 高效液相色譜法（高效液相色譜法（high performance liquid chromatographyhigh performance liquid chromatography，縮寫縮寫 HPLCHPLC），又譯高效液相層析法，以前曾指高壓液相層析），又譯高效液相層析法，以前曾指高壓液相層析法（法（high pressure l

3、iquid chromatographyhigh pressure liquid chromatography），用來分離液），用來分離液體混合物，以確認(rèn)并量化各個(gè)成分的比例。體混合物，以確認(rèn)并量化各個(gè)成分的比例。高效液相色譜儀高效液相色譜儀l 檢測的分辨率和靈敏度高，檢測的分辨率和靈敏度高，分析速度快，重復(fù)性好，分析速度快，重復(fù)性好，定量精度高，應(yīng)用范圍廣。定量精度高，應(yīng)用范圍廣。l 適用于分析高沸點(diǎn)、大分適用于分析高沸點(diǎn)、大分子、強(qiáng)極性、熱穩(wěn)定性差子、強(qiáng)極性、熱穩(wěn)定性差的化合物的化合物。l 價(jià)格昂貴，要用各種填料價(jià)格昂貴，要用各種填料柱，容量小，分析生物大柱，容量小，分析生物大分子和無機(jī)離

4、子困難，流分子和無機(jī)離子困難，流動(dòng)相消耗大且有毒性的居動(dòng)相消耗大且有毒性的居多。多。背景知識(shí)背景知識(shí)特點(diǎn)：特點(diǎn)：v色譜原理色譜原理v HPLC是利用樣品中的溶質(zhì)在固定相和流動(dòng)相之間分配系數(shù)的不同，進(jìn)行連續(xù)的無數(shù)次的交換和分配而達(dá)到分離的過程。v固定相材料固定相材料v 微粒硅膠：pH范圍是 27.5，若過堿（pH8），硅膠會(huì)粉碎或溶解；若過酸（pH1），鍵合相的化學(xué)鍵會(huì)斷裂。v 優(yōu)點(diǎn)： 硅膠的強(qiáng)度大；微粒硅膠的小孔結(jié)構(gòu)和表面積易人為控制；化學(xué)穩(wěn)定性好。 基本原理基本原理 樣品易溶，且溶解度盡可能大。樣品易溶，且溶解度盡可能大。 化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，不損壞柱子。化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，不損壞柱子。 不妨礙檢測器檢

5、測，紫外波長處無吸收。不妨礙檢測器檢測，紫外波長處無吸收。 粘度低，流動(dòng)性好。粘度低，流動(dòng)性好。 易于從其中回收樣品。易于從其中回收樣品。 無毒或低毒，易于操作。無毒或低毒，易于操作。 易于制成高純度，即色譜純。易于制成高純度，即色譜純。 廢液易處理，不污染環(huán)境。廢液易處理，不污染環(huán)境。流流動(dòng)動(dòng)相相選選擇擇原原則則基本原理基本原理流動(dòng)相流動(dòng)相HPLC儀器:液液相色譜儀相色譜儀(1) (1) 高壓輸液泵高壓輸液泵主要部件之一，壓力：主要部件之一，壓力：15015035035010105 5 PaPa。為了獲得高柱效而使用粒度很小的固定相（為了獲得高柱效而使用粒度很小的固定相（1010mm），），

6、液液體的流動(dòng)相高速通過時(shí)，將產(chǎn)生很高的壓力，因此高壓、高體的流動(dòng)相高速通過時(shí)，將產(chǎn)生很高的壓力，因此高壓、高速是高效液相色譜的特點(diǎn)之一。速是高效液相色譜的特點(diǎn)之一。應(yīng)具有壓力平穩(wěn)、脈沖小、流量穩(wěn)定可調(diào)、耐腐蝕等特性應(yīng)具有壓力平穩(wěn)、脈沖小、流量穩(wěn)定可調(diào)、耐腐蝕等特性(2) (2) 梯度淋洗裝置梯度淋洗裝置外梯度外梯度: 利用兩臺(tái)高壓輸液泵，將兩利用兩臺(tái)高壓輸液泵，將兩種不同極性的溶劑按一定的種不同極性的溶劑按一定的比例送入梯度混合室，混合比例送入梯度混合室，混合后進(jìn)入色譜柱。后進(jìn)入色譜柱。內(nèi)梯度內(nèi)梯度:一臺(tái)高壓泵一臺(tái)高壓泵, 通過比例調(diào)節(jié)通過比例調(diào)節(jié)閥閥,將兩種或多種不同極性將兩種或多種不同極性

7、的溶劑按一定的比例抽入高的溶劑按一定的比例抽入高壓泵中混合。壓泵中混合。液相色譜儀液相色譜儀(3) (3) 進(jìn)樣裝置進(jìn)樣裝置 流路中為高壓力工作狀態(tài)，流路中為高壓力工作狀態(tài)， 使用耐高壓的六通閥進(jìn)樣裝置使用耐高壓的六通閥進(jìn)樣裝置 液相色譜儀液相色譜儀FLASH動(dòng)畫(4)(4)高效分離柱高效分離柱柱體為直型不銹鋼管，內(nèi)徑柱體為直型不銹鋼管，內(nèi)徑16 mm，柱長柱長540 cm。發(fā)展趨發(fā)展趨勢是減小填料粒度和柱徑以提高柱效。勢是減小填料粒度和柱徑以提高柱效。液相色譜儀液相色譜儀(5) (5) 高效液相色譜檢測器高效液相色譜檢測器紫外光度檢測器（紫外光度檢測器（UVUV）：）：最小檢測量最小檢測量1

8、010-9-9gmLgmL-1-1，對流量和溫度的波動(dòng)對流量和溫度的波動(dòng)不敏感，可用于梯度洗脫。不敏感，可用于梯度洗脫。 FLASH動(dòng)畫實(shí)驗(yàn)儀器、設(shè)備與藥品實(shí)驗(yàn)儀器、設(shè)備與藥品儀器儀器 Agilent 1100 Agilent 1100 液相色譜儀一套液相色譜儀一套試劑試劑 乙腈乙腈 水水 樣品樣品 色譜工作站界面狀態(tài)工具條上浮工具系統(tǒng)圖系統(tǒng)狀態(tài)狀態(tài)工具條上浮工具系統(tǒng)圖系統(tǒng)狀態(tài)液相色譜儀測定的檢測液相色譜儀測定的檢測流程流程儀器自檢儀器自檢打開工作打開工作站電源站電源進(jìn)樣進(jìn)樣 記錄記錄計(jì)算計(jì)算沖洗色譜柱沖洗色譜柱結(jié)束進(jìn)樣結(jié)束進(jìn)樣關(guān)閉主機(jī)關(guān)閉主機(jī)電源電源關(guān)閉關(guān)閉電腦電腦開電腦開電腦設(shè)定參數(shù)設(shè)定參數(shù)調(diào)調(diào)參數(shù)參數(shù)數(shù)據(jù)采集與分析數(shù)據(jù)采集與分析思考題思考題v1 1高效液相色譜法有高效液相色譜法有哪些特點(diǎn)？高效液相哪些特點(diǎn)？高效液相色譜儀主要由哪幾大色譜儀主要由哪幾大系統(tǒng)組成？系統(tǒng)組成？v 高效液相色譜法特點(diǎn)是速度快、分辨率高、靈敏度高、色譜柱可反復(fù)使用、樣品量少。高效液相色譜儀的系統(tǒng)由儲(chǔ)液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。v2 2在高效液相色譜中，在高效液相色譜中，為