干擾素釋放試驗ppt

1、 Y-干擾素釋放試驗的臨床應(yīng)用 Y干擾素釋放試驗(interferon1 release assays）， IGRA是檢測結(jié)核分枝桿菌(MTB)特異性抗原刺激T細(xì)胞產(chǎn)生的Y干擾素，以判斷是否存在MTB的感染。IGRAs可彌補PPD試驗的不足，目前多個國家已將其用于診斷MTB潛伏感染(1atent tuberculosis infection，LTBI)，我國部分醫(yī)院也已常規(guī)開展此項檢測IGRAs通過檢測全血或分離自全血的單核細(xì)胞在MTB特異性抗原刺激下產(chǎn)生的干擾素，判斷受試者是否感染MTB再次遇到同類抗原時可產(chǎn)干擾素受到MTB抗原刺激致敏的T細(xì)胞目前國際上較成熟的IGRAs有2種：(1)全血法

2、：采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測全血中致敏T細(xì)胞再次受到MTB特異性抗原刺激后釋放的1干擾素水平，稱之為全血檢測或結(jié)核感染T細(xì)胞免疫檢測；(2)細(xì)胞法：采用酶聯(lián)免疫斑點技(ellzymelinkedimmunospot assay，ELISPOT)測定在MTB特異性抗原刺激下，外周血單個核細(xì)胞中能夠釋放1一干擾素的效應(yīng)T細(xì)數(shù)量，稱之為細(xì)胞檢測或結(jié)核感染T細(xì)胞檢測。上述2種檢測方法的原理類似，檢測技術(shù)和操作程序略有不同，均采用MTB的RDl區(qū)基因編碼抗原多肽作為特異性抗原，主要相對分子質(zhì)量為6 000的早期分泌抗原靶(ESAT-6)和相對分子質(zhì)量為10 000的培養(yǎng)濾液蛋白(CFP一10

3、)抗原或抗原多肽T-SPOTT-SPOT試驗試驗干擾素干擾素檢測陰性檢測陰性干擾素干擾素檢測陽性檢測陽性TB抗原多肽T細(xì)胞活化T細(xì)胞 干擾素30IGRAs的結(jié)核特異免疫抗原 SAT-6和CFP一10主要存在于MTB復(fù)合群，而在卡介苗和大多數(shù)NTM中缺失，因此IGRAs的特異度較好。 但ESAT-6和CFP10也存在于少數(shù)幾種NTM中，如堪薩斯分枝桿菌、海分枝桿菌、蘇爾加分枝桿菌、轉(zhuǎn)黃分枝桿菌和胃分枝桿，故IGRAs陽性不能排除上述幾種NTM感染的可能。PPD試驗與IGRAs的對比PPD試驗作為診斷MTB感染的傳統(tǒng)方法，具有操作簡便、成本低廉的特點，至今仍廣泛使用，但該方法使用的PPD抗原成分復(fù)

4、雜，易受卡介苗接種和非結(jié)核分枝桿菌(nontuberculosismyeobacterium，NTM)的影響，特異度較低，且對人免疫缺陷病毒(HIV)感染及重癥疾病患者等免疫功能受損人群的敏感度不足。薈萃分析結(jié)果顯示，在HIV感染人群中，IGRAs的敏感度并未高于PPD試驗，但IGRAs(尤其是細(xì)胞檢測)受CD4+T細(xì)胞數(shù)量的影響小于PPD試驗，這可能因為IGRAs檢測過程已對單個核細(xì)胞數(shù)量進行了標(biāo)準(zhǔn)化，即在檢測程序上消除了淋巴細(xì)胞數(shù)量減少對檢測結(jié)果的影響PPD陽性對以下情況無法區(qū)分 卡介苗預(yù)防接種 非結(jié)核分枝桿菌感染 LIBI 活躍結(jié)核病 結(jié)核病治愈、自愈后IGRAs陽性 卡介苗預(yù)防接種 大

5、多數(shù)非結(jié)核分枝桿菌感染 LIBI 活躍結(jié)核病 結(jié)核病治愈、自愈后2010年 全國結(jié)核病流行病抽樣調(diào)查結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群 77.1%，非結(jié)核分枝桿菌22.9%2010年廣州結(jié)核病流行病抽樣調(diào)查：非結(jié)核分枝桿菌19.3%，且其中前5位IGRAs為陰性的IGRAs的敏感性和特異性 美國FDA認(rèn)證臨床實驗數(shù)據(jù)： 經(jīng)培養(yǎng)確診的結(jié)核病患者樣本183例 敏感性95.6%（175183） 306例入伍新兵 特異性97.1%（297 306） 對活動性結(jié)核病的輔助診斷：PPD試驗和IGRAs均無法區(qū)分LTBI和活動性結(jié)核病患者。國內(nèi)IGRAs的研究數(shù)據(jù)顯示其敏感度和特異度差別較大，敏感度為53一98，特異度為6

6、090(或以上)，但多數(shù)文獻報道的敏感度和特異度70，提示IGRAs的特異度優(yōu)于PPD試驗。IGRA用于診斷肺結(jié)核：深圳第三人民醫(yī)院的結(jié)果例數(shù)例數(shù)（n）ELISPOT(+) n (%)結(jié)核患者24461846（75.47） 急性播散型肺結(jié)核5851（87.93） 繼發(fā)性肺結(jié)核18381389（75.97） 結(jié)核性胸膜炎538428（79.55） 結(jié)核性腦膜炎5940（67.80） 其他肺外結(jié)核356275（77.25）陳舊性肺結(jié)核5624（42.86）健康對照42265（14.20）新發(fā)肺結(jié)核密切接觸者384136（35.4）IGRAs檢測活動性結(jié)核病的敏感度高于TSTIGRAs敏感性還未高到

7、陰性可以排除結(jié)核病的程度存在假陰性，陰性并不能排除結(jié)核病IGRAs檢測結(jié)核疑似病例的特異性不高IGRAs不能區(qū)分活動性肺結(jié)核和潛伏期結(jié)核感染（陽性不一定是活動性肺結(jié)核）存在假陰性，陰性并不能排除結(jié)核病IGRAs陽性時不能肯定診斷，陰性時不能排除診斷WHO不推薦中、低收入國家在診斷活躍結(jié)核感染時使用IGRAs中國的國情適用IGRAs嗎？中國結(jié)核病發(fā)病率高WHO不推薦中、低收入國家在診斷活躍結(jié)核感染時使用IGRAsY-干擾素釋放試驗在中國應(yīng)用的建議我國一方面是結(jié)核病高負(fù)擔(dān)國家，但又與低收入國家在結(jié)核病控制經(jīng)費投入、結(jié)核病流行特點、卡介苗接種以及NTM感染等方面存在顯著不同IGRAs可以有 考慮到我

8、國肺結(jié)核患者中菌陰肺結(jié)核所占比例較高，在診斷這類患者缺乏細(xì)菌學(xué)依據(jù)時，IGRAs可發(fā)揮其輔助作用 應(yīng)用于活動性結(jié)核病的輔助診斷 應(yīng)用于LTBI診斷中IGRAs用于體液或組織標(biāo)本？ 近幾年來國內(nèi)有IGRAs(僅限于ELISPOT方法)輔助診斷結(jié)核性胸膜炎和結(jié)核性腹膜炎等肺外結(jié)核的報道，其中采用胸腔積液和腹水等體液或組織標(biāo)本檢測的IGRAs的敏感度和特異度高達(dá)90以上，采用血液標(biāo)本檢測時IGRAs則并未顯示出優(yōu)勢。 此類研究報道數(shù)量不多，病例數(shù)也不足， 且國家食品藥品監(jiān)督管理總局批準(zhǔn)的IGRAs僅限于血液樣本的檢測，即IGRAs對體液或組織標(biāo)本的研究尚未經(jīng)過充分驗證，不能得出可靠的結(jié)論。IGRAs

9、對兒童結(jié)核病的輔助診斷 兒童結(jié)核病的臨床癥狀不典型，重癥及肺外結(jié)核病比例較高，且結(jié)核病患兒的細(xì)菌載量低，咳嗽反射和氣管纖毛運動能力差，病原學(xué)檢查陽性率很低，PPD試驗和IGRAs聯(lián)合診斷有一定的輔助作用。IGRAs在LTBI診斷中的應(yīng)用 1活動性肺結(jié)核患者密切接觸者和醫(yī)務(wù)工作者中LTBI的診斷 2IGRAs在HIV感染等免疫抑制或缺陷患者LTBI診斷中的應(yīng)用活動性肺結(jié)核患者密切接觸者和醫(yī)務(wù)工作者中LTBI的診斷 1.PPD試驗和IGRAs均可用于LTBI的診斷和追蹤，若考慮到PPD試驗檢測結(jié)果可能受卡介苗接種或NTM影響時，可對PPD試驗陽性者進一步采用IGRAs幫助確認(rèn)；(2)不宜采用IGR

10、As對大范圍人群進行LTBI篩查；(3)PPD試驗仍是在健康人群中動態(tài)篩查LTBI的首選。 (1)對HIV感染人群進行LTBI篩查，單用PPD試驗的敏感度不高，應(yīng)單用IGRAs或聯(lián)合使用PPD試驗，在方法選擇上優(yōu)先考慮細(xì)胞檢測技術(shù)。 (2)自身免疫性疾病和器官移植患者在接受糖皮質(zhì)激素或TNF-拮抗劑治療前，應(yīng)單用IGRAs或聯(lián)合使用PPD試驗篩查LTBI。除HIV感染者外，類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等自身免疫性疾病、器官移植等免疫功能受損患者及糖尿病等特殊患者，因其自身原因，或接受糖皮質(zhì)激素或腫瘤壞死因子 TNF拮抗劑等免疫抑制藥物治療導(dǎo)致免疫功能缺陷，這類患者是LTBI發(fā)展為結(jié)核病的高風(fēng)險人群，對這類患者也有必要進行LTBI篩查。應(yīng)行IGRAs和PPD檢測的6種情況（WHO 2015） HIV陽性者 肺結(jié)核病人的接觸者 擬進行抗TNF治療的患者 擬透析的患者 擬行器官及造血細(xì)胞移植者 矽肺患者結(jié)語(1)IGRAs可用于診斷MTB感染，但不能區(qū)分活動性結(jié)核病和LTBI，也不能準(zhǔn)確預(yù)測LTBI發(fā)展為活動性結(jié)核病的風(fēng)險(2