安圖TORCH抗體親和力檢測(cè)

1、TORCH-IgG抗體抗體親和力檢測(cè)親和力檢測(cè)鄭州安圖生物工程股份有限公司鄭州安圖生物工程股份有限公司提綱提綱n抗體親和力定義抗體親和力定義nTORCH抗體親和力檢測(cè)的意義抗體親和力檢測(cè)的意義nTORCH抗體親和力檢測(cè)的現(xiàn)狀抗體親和力檢測(cè)的現(xiàn)狀n安圖安圖TORCH抗體親和力檢測(cè)試劑盒抗體親和力檢測(cè)試劑盒 抗體親和力是抗體親和力是整個(gè)抗體分子與抗原表位之間結(jié)合整個(gè)抗體分子與抗原表位之間結(jié)合強(qiáng)度，即強(qiáng)度，即抗體的結(jié)合部位與相應(yīng)抗原決定簇之間抗體的結(jié)合部位與相應(yīng)抗原決定簇之間的非共價(jià)引力與斥力之和的非共價(jià)引力與斥力之和?？贵w親和力（抗體親和力（Avidity）的定義）的定義抗體親和力成熟理論抗體親和

2、力成熟理論初次感染產(chǎn)生的抗體為低親和力抗體，隨著時(shí)間的推移，體內(nèi)初次感染產(chǎn)生的抗體為低親和力抗體，隨著時(shí)間的推移，體內(nèi)抗體逐漸成熟為高親和力的抗體，一般需要抗體逐漸成熟為高親和力的抗體，一般需要3-6個(gè)月時(shí)間。個(gè)月時(shí)間。 模板學(xué)說模板學(xué)說 （Template theory） 克隆選擇學(xué)說克隆選擇學(xué)說 （Clonal selection theory）模板學(xué)說模板學(xué)說 （Template theory）免疫系統(tǒng)在按照抗原（模版）來制造更高親和力的抗體免疫系統(tǒng)在按照抗原（模版）來制造更高親和力的抗體B體細(xì)胞高體細(xì)胞高頻突變頻突變BBBBYYYYYYYYYYBYYYYYYYYYY原發(fā)原發(fā)感染感染36

3、個(gè)月個(gè)月克隆選擇學(xué)說克隆選擇學(xué)說 （Clonal selection theory）免疫系統(tǒng)對(duì)高親和力抗體的篩選過程免疫系統(tǒng)對(duì)高親和力抗體的篩選過程TORCH抗體親和力檢測(cè)的意義抗體親和力檢測(cè)的意義n 胎兒出生缺陷的風(fēng)險(xiǎn)與原發(fā)感染胎兒出生缺陷的風(fēng)險(xiǎn)與原發(fā)感染/復(fù)發(fā)感染、感染發(fā)復(fù)發(fā)感染、感染發(fā)生的時(shí)間、孕周密切相關(guān)生的時(shí)間、孕周密切相關(guān)n 判斷原發(fā)感染或復(fù)發(fā)感染判斷原發(fā)感染或復(fù)發(fā)感染n 判斷原發(fā)感染發(fā)生的時(shí)間判斷原發(fā)感染發(fā)生的時(shí)間n TORCH規(guī)范化檢測(cè)流程的重要環(huán)節(jié)規(guī)范化檢測(cè)流程的重要環(huán)節(jié)對(duì)于巨細(xì)胞病毒對(duì)于巨細(xì)胞病毒IgM抗體陽性的樣本，需要結(jié)合抗體陽性的樣本，需要結(jié)合IgG抗體抗體親和力的結(jié)

4、果進(jìn)行分析。親和力的結(jié)果進(jìn)行分析。IgM抗體陽性，同時(shí)抗體陽性，同時(shí)IgG抗體低抗體低親和力，有較高風(fēng)險(xiǎn)。親和力，有較高風(fēng)險(xiǎn)。美國(guó)帕洛艾爾托醫(yī)療基金會(huì)弓形美國(guó)帕洛艾爾托醫(yī)療基金會(huì)弓形蟲確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室，將弓形蟲蟲確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室，將弓形蟲IgG親和親和力抗體檢測(cè)列為確認(rèn)方法之一，力抗體檢測(cè)列為確認(rèn)方法之一，用于排除假陽性及非急性感染。用于排除假陽性及非急性感染。對(duì)對(duì)IgM抗體陽性或可疑的樣本，進(jìn)行抗體陽性或可疑的樣本，進(jìn)行IgG抗體親和力檢測(cè)很有抗體親和力檢測(cè)很有價(jià)值，如果價(jià)值，如果IgG抗體為低親和力，再進(jìn)行羊水穿刺抗體為低親和力，再進(jìn)行羊水穿刺PCR檢測(cè)是檢測(cè)是合適的選擇。合適的選擇。對(duì)生殖器皰疹患者

5、的單純皰疹病毒對(duì)生殖器皰疹患者的單純皰疹病毒IgG抗體親和力檢測(cè)可以區(qū)抗體親和力檢測(cè)可以區(qū)分原發(fā)和復(fù)發(fā)感染。分原發(fā)和復(fù)發(fā)感染。使用敏感方法檢測(cè)使用敏感方法檢測(cè)TORCH IgG/IgMIgG- IgM-IgG+ IgM-IgG+ IgM+IgG- IgM+孕期衛(wèi)生教育無需進(jìn)一步檢測(cè)讓患者3周后再檢測(cè)孕期20周孕期20周IgG親和力檢測(cè)IgG親和力檢測(cè)高親和力低親和力高親和力無需進(jìn)一步檢測(cè)高度傳染性回顧性檢測(cè)前三個(gè)月樣本IgG-IgM- 和IgG-IgM+IgG+ IgM-IgG+ IgM+低親和力IgGIgG+ IgM+高親和力IgG高度傳染性復(fù)發(fā) 低傳染性高度傳染性無需進(jìn)一步檢測(cè)可進(jìn)一步檢測(cè)

6、母體病毒血癥評(píng)估：尿液PCR、血液PCR胎兒健康度評(píng)估：超聲、MRI侵入性檢測(cè)：羊膜穿刺、定量PCR超聲、MRI案例分析案例分析1Munro SC, et al. J Clin microbiol,2005,43:4713-4718使用敏感方法檢測(cè)使用敏感方法檢測(cè)TORCH IgG/IgMIgG- IgM-IgG+ IgM-IgG+ IgM+IgG- IgM+孕期衛(wèi)生教育無需進(jìn)一步檢測(cè)讓患者3周后再檢測(cè)孕期20周孕期20周IgG親和力檢測(cè)IgG親和力檢測(cè)高親和力低親和力高親和力無需進(jìn)一步檢測(cè)高度傳染性回顧性檢測(cè)前三個(gè)月樣本IgG-IgM- 和IgG-IgM+IgG+ IgM-IgG+ IgM+

7、低親和力IgGIgG+ IgM+高親和力IgG高度傳染性復(fù)發(fā) 低傳染性高度傳染性無需進(jìn)一步檢測(cè)可進(jìn)一步檢測(cè)母體病毒血癥評(píng)估：尿液PCR、血液PCR胎兒健康度評(píng)估：超聲、MRI侵入性檢測(cè)：羊膜穿刺、定量PCR超聲、MRI案例分析案例分析 2Munro SC, et al. J Clin microbiol,2005,43:4713-4718TORCH抗體親和力檢測(cè)現(xiàn)狀抗體親和力檢測(cè)現(xiàn)狀n 試劑盒檢測(cè)原理：解離劑法和抗原中和法，解離劑法是主流方法。試劑盒檢測(cè)原理：解離劑法和抗原中和法，解離劑法是主流方法。n 試劑盒檢測(cè)方法：酶聯(lián)免疫法、自動(dòng)化化學(xué)發(fā)光法，酶聯(lián)免疫法較多。試劑盒檢測(cè)方法：酶聯(lián)免疫法、

8、自動(dòng)化化學(xué)發(fā)光法，酶聯(lián)免疫法較多。n 國(guó)內(nèi)，對(duì)國(guó)內(nèi)，對(duì)TORCH親和力研究較少，僅有少量的文獻(xiàn)報(bào)道了親和力研究較少，僅有少量的文獻(xiàn)報(bào)道了IgG親和力親和力檢測(cè)的臨床意義，在臨床上還沒有得以真正運(yùn)用。檢測(cè)的臨床意義，在臨床上還沒有得以真正運(yùn)用。n 國(guó)外國(guó)外，對(duì)對(duì)TORCH IgG親和力強(qiáng)弱與感染時(shí)間的關(guān)系做了許多研究工作，親和力強(qiáng)弱與感染時(shí)間的關(guān)系做了許多研究工作，雅培，索林和梅里埃等很多廠家的抗體親和力試劑盒都獲得了雅培，索林和梅里埃等很多廠家的抗體親和力試劑盒都獲得了FDA或或CE認(rèn)證，用于認(rèn)證，用于TORCH感染的輔助診斷感染的輔助診斷。n 巨細(xì)胞病毒和弓形蟲抗體親和力檢測(cè)應(yīng)用普遍。巨細(xì)胞

9、病毒和弓形蟲抗體親和力檢測(cè)應(yīng)用普遍。n 各廠家試劑盒的檢測(cè)結(jié)果存在差異。各廠家試劑盒的檢測(cè)結(jié)果存在差異。抗體親和力檢測(cè)方法抗體親和力檢測(cè)方法通過解離劑將低親和通過解離劑將低親和力抗體解離掉。力抗體解離掉。通過中和抗原將高親通過中和抗原將高親和力抗體中和掉。和力抗體中和掉。國(guó)內(nèi)獲得批準(zhǔn)文號(hào)的產(chǎn)品及方法國(guó)內(nèi)獲得批準(zhǔn)文號(hào)的產(chǎn)品及方法廠家及項(xiàng)目名稱廠家及項(xiàng)目名稱安圖安圖DiaSorinRocheAbbottBiomerieuxCMV-IgG AVIELISA化學(xué)發(fā)光化學(xué)發(fā)光電化學(xué)發(fā)光電化學(xué)發(fā)光化學(xué)發(fā)光化學(xué)發(fā)光ELISA熒光熒光RV-IgG AVIELISA/TOX-IgG AVIELISA化學(xué)發(fā)光化學(xué)

10、發(fā)光電化學(xué)發(fā)光電化學(xué)發(fā)光化學(xué)發(fā)光化學(xué)發(fā)光ELISA熒光熒光HSV-1IgGELISA/HSV-2IgGELISA/2012年以后批準(zhǔn)上市年以后批準(zhǔn)上市國(guó)外批準(zhǔn)上市的主要廠家及方法國(guó)外批準(zhǔn)上市的主要廠家及方法巨細(xì)胞病毒親和力試劑盒檢測(cè)結(jié)果比較巨細(xì)胞病毒親和力試劑盒檢測(cè)結(jié)果比較安安圖圖標(biāo)標(biāo)桿桿Radim、Euroimmun與臨床的符合率優(yōu)于其他廠家，安圖產(chǎn)品與臨床的符合率優(yōu)于其他廠家，安圖產(chǎn)品研發(fā)以研發(fā)以Radim為參比試劑盒。為參比試劑盒。弓形蟲親和力試劑盒檢測(cè)結(jié)果比較弓形蟲親和力試劑盒檢測(cè)結(jié)果比較各廠家檢測(cè)結(jié)果差異不大各廠家檢測(cè)結(jié)果差異不大低親和力結(jié)果可能不是急性感染低親和力結(jié)果可能不是急性感

11、染高親和力結(jié)果可以排除急性感染高親和力結(jié)果可以排除急性感染 第一個(gè)國(guó)產(chǎn)第一個(gè)國(guó)產(chǎn)TORCH五項(xiàng)抗體親和力檢測(cè)試劑盒（五項(xiàng)抗體親和力檢測(cè)試劑盒（2013年獲得批準(zhǔn)文號(hào)）年獲得批準(zhǔn)文號(hào)） 國(guó)家十二五規(guī)劃國(guó)家十二五規(guī)劃 863課題項(xiàng)目之一課題項(xiàng)目之一 產(chǎn)品設(shè)計(jì)兼顧產(chǎn)品設(shè)計(jì)兼顧IgG檢測(cè)靈敏度和高值樣本檢測(cè)靈敏度和高值樣本OD值不超限值不超限 產(chǎn)品原理：解離劑法產(chǎn)品原理：解離劑法 產(chǎn)品方法：產(chǎn)品方法：ELISA 樣本稀釋：樣本稀釋： 1/100孔外稀釋孔外稀釋 反應(yīng)模式：反應(yīng)模式：30分鐘分鐘-10分鐘分鐘-30分鐘分鐘-10分鐘分鐘 加樣量：加樣量： 稀釋后樣本、對(duì)照緩沖液、解離緩沖液、酶結(jié)合物均稀

12、釋后樣本、對(duì)照緩沖液、解離緩沖液、酶結(jié)合物均100ul/孔?？?。 波長(zhǎng)設(shè)置：波長(zhǎng)設(shè)置： 450/620nm雙波長(zhǎng)讀數(shù)，如果樣本雙波長(zhǎng)讀數(shù)，如果樣本OD值值3.0，用，用405/620nm雙雙 波長(zhǎng)讀數(shù)。波長(zhǎng)讀數(shù)。 結(jié)果計(jì)算：親和力指數(shù)結(jié)果計(jì)算：親和力指數(shù)=解離緩沖液孔解離緩沖液孔OD值值/對(duì)照緩沖液孔對(duì)照緩沖液孔 OD值值100%安圖安圖TORCH抗體親和力檢測(cè)試劑盒抗體親和力檢測(cè)試劑盒123456789101112 AQLS3S7 ABQLS3S7 BCQHS4 CDQHS4 DES1S5 EFS1S5 FGS2S6 GHS2S6 H加樣模式加樣模式BIOMEX血清轉(zhuǎn)化盤血清轉(zhuǎn)化盤48份樣本

13、的親和力與份樣本的親和力與 感染時(shí)間的關(guān)系感染時(shí)間的關(guān)系BIOMEX 48份血清轉(zhuǎn)化盤的感染時(shí)間小于份血清轉(zhuǎn)化盤的感染時(shí)間小于80天，其中天，其中33份樣份樣本為本為IgG陽性，均為低親和力，靈敏度為陽性，均為低親和力，靈敏度為100%。R RV V血血清清轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)化化盤盤圖圖1：安圖試劑盒：安圖試劑盒CMV-IgG抗體親和力水平隨感染時(shí)間的變化抗體親和力水平隨感染時(shí)間的變化圖圖2：Abbott ATCHIT試劑盒試劑盒CMV-IgG抗體親和力水平隨感染時(shí)間的變化抗體親和力水平隨感染時(shí)間的變化CMVCMV血血清清轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)化化盤盤安圖試劑安圖試劑盒在感染盒在感染100天后檢天后檢測(cè)基本為測(cè)基本為高親和力高親和力Abbott ATCHIT試試劑盒在感劑盒在感染后染后120天天仍為低親仍為低親和