化妝品微生物檢驗(yàn)及安全技術(shù)規(guī)范比較

1、化妝品微生物檢驗(yàn)化妝品微生物檢驗(yàn) 化妝品因含有水分，油脂，蛋白質(zhì)，多元醇等，為微生物的生長(zhǎng)創(chuàng)造了良好的條件，造成產(chǎn)品變質(zhì)。 為了抑制微生物的繁殖和消費(fèi)者使用過(guò)程中的產(chǎn)品污染，往往在化妝品中加入防腐劑(尼珀?duì)柦鸺字?、乙酯、丙脂及苯氧乙醇?，但不能過(guò)量。 因此，化妝品一方面為微生物的生長(zhǎng)繁殖提供了良好的環(huán)境；另一方面由于防腐劑的應(yīng)用又可抑制微生物的生長(zhǎng)。 為了避免測(cè)試結(jié)果可能出現(xiàn)假陰性（實(shí)際應(yīng)該生長(zhǎng)或是污染了，由于防腐劑的存在而導(dǎo)致結(jié)果不生長(zhǎng)或是結(jié)果偏?。?，需要添加中和劑?；瘖y品中常用的中和劑樣品中：國(guó)際方法：尼泊金酯類(lèi)防腐劑的中和劑：吐溫80（30g/L）和卵磷脂(3g/L)+普通肉湯?；瘖y品

2、安全技術(shù)規(guī)范：培養(yǎng)基成分中直接有卵磷脂（1g）吐溫80（7g）。（稀釋法也能同步起到中和的效果）生產(chǎn)用水中的余氯：每125ml水樣中加入0.1mg硫代硫酸鈉。（注意添加方式和使用范圍）化妝品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)微生物檢驗(yàn)方法（2015版化妝品安全技術(shù)規(guī)范）GB/T 7918.1-1987 化妝品微生物標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法 總則 菌落總數(shù) （2015版化妝品安全技術(shù)規(guī)范）GB/T 7918.2-1987 化妝品微生物標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法 耐熱大腸菌群（2015版化妝品安全技術(shù)規(guī)范）糞大腸菌群：GB/T 7918.3-1987 化妝品微生物標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法 銅綠假單胞菌 （2015版化妝品安全技術(shù)規(guī)范）GB/T 7918.4-1

3、987 化妝品微生物標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法 綠膿桿菌 金黃色葡萄球菌 （2015版化妝品安全技術(shù)規(guī)范）GB/T 7918.5-1987 化妝品微生物標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法 金黃色葡萄球菌 霉菌和酵母菌：（2015版化妝品安全技術(shù)規(guī)范） 方法比較2007版化妝品衛(wèi)生規(guī)范與2015版化妝品安全技術(shù)規(guī)范對(duì)比：總則總則重點(diǎn)1.具有代表性。2.不少于2個(gè)包裝單位的取樣中共取10g或10mL。3.供檢樣品，應(yīng)嚴(yán)供檢樣品，應(yīng)嚴(yán)格保持原有的包裝狀態(tài)。容器不應(yīng)有破裂，格保持原有的包裝狀態(tài)。容器不應(yīng)有破裂，在檢驗(yàn)前不得打開(kāi)，防止樣品被污染。在檢驗(yàn)前不得打開(kāi)，防止樣品被污染。4.應(yīng)置于室溫陰涼干燥處，不要冷藏或冷凍。4.宜先取出部分樣

4、品做微生物檢驗(yàn)。5.嚴(yán)格上微生物無(wú)復(fù)測(cè)一說(shuō)。（可能的因素多），因此對(duì)微生物檢驗(yàn)人員要求嚴(yán)格。6.生物安全開(kāi)始重視。詳細(xì)操作步驟詳細(xì)操作步驟重點(diǎn)1.所配制培養(yǎng)基可冷藏和冷卻備用為分步驟檢測(cè)提供基礎(chǔ)。2.菌落總數(shù)和霉菌酵母菌總數(shù)a.單位CFU/g或CFU/ml。b.二位有效數(shù)字，在二位有效數(shù)字后面的數(shù)值，應(yīng)以四舍五入法計(jì)算。c.“不可計(jì)”注明稀釋度。Colony Forming Unitsd.特有的形態(tài)和培養(yǎng)特性（霉菌和酵母菌）。樣品的制備 液體樣品 膏、霜、乳劑半固體狀樣品 固體樣品樣品的制備注意事項(xiàng)無(wú)菌容器、材料及操作樣品的均一性樣品的檢驗(yàn)及保管 及時(shí)檢驗(yàn)樣品應(yīng)放在室溫陰涼干燥處樣品先進(jìn)行微生

5、物檢驗(yàn)(原料)，再做其他指標(biāo)須防止微生物的再污染和擴(kuò)散測(cè)試方法：菌落總數(shù)檢驗(yàn) 菌落總數(shù)（Aerobic bacterial count）：化妝品檢樣經(jīng)過(guò)處理，在一定條件下培養(yǎng)后（如培養(yǎng)基成分、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時(shí)間、pH值、需氧性質(zhì)等），1g（1mL）檢樣中所含菌落的總數(shù)。所得結(jié)果只包括一群本方法規(guī)定的條件下生長(zhǎng)的嗜中溫的需氧性和兼性厭氧菌落總數(shù)。 測(cè)定菌落總數(shù)便于判明樣品被細(xì)菌污染的程度，是對(duì)樣品進(jìn)行衛(wèi)生學(xué)總評(píng)價(jià)的綜合依據(jù)。 測(cè)試流程48小時(shí)出結(jié)果（30-300）：數(shù)據(jù)數(shù)據(jù)處理處理混合平板混合平板的制備的制備細(xì)菌的培細(xì)菌的培養(yǎng)養(yǎng)檢查結(jié)果、檢查結(jié)果、觀察與計(jì)數(shù)觀察與計(jì)數(shù)供試液供試液的制備的制備書(shū)寫(xiě)

6、檢驗(yàn)書(shū)寫(xiě)檢驗(yàn)記錄單記錄單TTC亦不可多加會(huì)抑制菌落生長(zhǎng) 為便于區(qū)別化妝品中的顆粒與菌落，可在每 100mL 卵磷脂吐溫 80 營(yíng)養(yǎng)瓊脂中加入 1mL 0.5的 TTC 溶液，如有細(xì)菌存在，培養(yǎng)后菌落呈紅色，而化妝品的顆粒顏色無(wú)變化。接種陽(yáng)性菌計(jì)算回收率 推薦了解： 人員培訓(xùn)能力掌握的檢驗(yàn)重要指標(biāo)。 有條件可做視具體樣品測(cè)試結(jié)果。 在膏霜類(lèi)化妝品中,微生物都是吸附或附著于顆粒狀的原料中,檢測(cè)時(shí)不易洗脫下來(lái),因此,需要驗(yàn)證檢測(cè)方法的有效性。耐熱大腸菌群 未檢出2天，檢出3-4天 耐熱大腸菌群 Thermotolerant coliform bacteria系一群需氧及兼性厭氧革蘭氏陰性無(wú)芽胞桿菌，

7、在44.5培養(yǎng)24h48h能發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸并產(chǎn)氣。 該菌主要來(lái)自人和溫血?jiǎng)游锛S便，可作為糞便污染指標(biāo)來(lái)評(píng)價(jià)化妝品的衛(wèi)生質(zhì)量, 推斷化妝品中有否污染腸道致病菌的可能。產(chǎn)酸：黃色產(chǎn)酸：黃色產(chǎn)氣：氣泡產(chǎn)氣：氣泡產(chǎn)酸產(chǎn)氣產(chǎn)酸產(chǎn)氣書(shū)寫(xiě)檢驗(yàn)書(shū)寫(xiě)檢驗(yàn)記錄單記錄單不產(chǎn)酸不產(chǎn)氣不產(chǎn)酸不產(chǎn)氣增增菌菌培培養(yǎng)養(yǎng)供試供試液的液的制備制備配培配培養(yǎng)基養(yǎng)基和稀和稀釋液釋液檢查檢查結(jié)果結(jié)果判斷判斷44.544.50.50.524-24-48h48h分離培養(yǎng)分離培養(yǎng)蛋白胨水蛋白胨水培養(yǎng)培養(yǎng)最終結(jié)最終結(jié)果判斷果判斷44.544.50.50.5 24242h2h靛基質(zhì)靛基質(zhì)特特征征菌菌落落36361 1 1824h1824h雙倍膽鹽

8、乳糖雙倍膽鹽乳糖EMBEMB瓊脂瓊脂液面玫瑰紅色液面玫瑰紅色紫黑色紫黑色糞大腸菌群檢查流程圖糞大腸菌群檢查流程圖鏡檢鏡檢結(jié)果報(bào)告銅綠假單胞菌 未檢出2天，檢出4天 銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa）屬于假單胞菌屬，為革蘭氏陰性桿菌，氧化酶陽(yáng)性，能產(chǎn)生綠膿菌素。此外還能液化明膠，還原硝酸鹽為亞硝酸鹽，在 421條件下能生長(zhǎng)。 該菌對(duì)人有致病力，可使傷處化膿，引起敗血癥等。在自然界中分布甚廣，空氣、水、土壤最終結(jié)最終結(jié)果判斷果判斷增增菌菌培培養(yǎng)養(yǎng)供試供試液的液的制備制備書(shū)寫(xiě)檢驗(yàn)書(shū)寫(xiě)檢驗(yàn)記錄單記錄單分分離離純純化化無(wú)菌落或無(wú)特征菌落無(wú)菌落或無(wú)特征菌落配培配培養(yǎng)基養(yǎng)基和稀和稀

9、釋液釋液革蘭染色、鏡檢革蘭染色、鏡檢 氧化酶試驗(yàn)氧化酶試驗(yàn) 綠膿菌素試驗(yàn)綠膿菌素試驗(yàn)生化試驗(yàn)生化試驗(yàn) 硝酸鹽還原試驗(yàn)硝酸鹽還原試驗(yàn) 4242生長(zhǎng)試驗(yàn)生長(zhǎng)試驗(yàn) 明膠液化試驗(yàn)明膠液化試驗(yàn)銅綠假單胞菌檢查流程圖銅綠假單胞菌檢查流程圖SCDLPSCDLP培養(yǎng)基培養(yǎng)基十六烷三甲基十六烷三甲基溴化銨瓊脂溴化銨瓊脂3636111824h1824h3636111824h1824h特征菌落特征菌落灰白色、扁灰白色、扁平、周?chē)衅?、周?chē)兴苄运{(lán)綠水溶性藍(lán)綠色素色素鏡檢鏡檢十六烷三甲基溴化銨平板十六烷三甲基溴化銨平板SCDLP培養(yǎng)基培養(yǎng)基黃綠色黃綠色菌膜菌膜灰白色灰白色濕潤(rùn)濕潤(rùn)氧化酶試驗(yàn)氧化酶試驗(yàn)粉紅粉紅/紫紅色

10、紫紅色綠膿菌素試驗(yàn)綠膿菌素試驗(yàn)鹽酸層呈粉紫色鹽酸層呈粉紫色氯仿層呈藍(lán)綠色氯仿層呈藍(lán)綠色硝酸鹽還原產(chǎn)氣試驗(yàn)硝酸鹽還原產(chǎn)氣試驗(yàn)N2明膠液化明膠液化試驗(yàn)試驗(yàn)明膠培養(yǎng)基（高層）明膠培養(yǎng)基（高層）明膠液化明膠液化結(jié)果報(bào)告被檢樣品經(jīng)增菌分離培養(yǎng)后，經(jīng)證實(shí)為革蘭氏陰性桿菌，氧化酶及綠膿菌素試驗(yàn)皆為陽(yáng)性者，即可報(bào)告被檢樣品中檢出銅綠假單胞菌；如綠膿菌素試驗(yàn)陰性而液化明膠、硝酸鹽還原產(chǎn)氣和42生長(zhǎng)試驗(yàn)三者皆為陽(yáng)性時(shí)，仍可報(bào)告被檢樣品中檢出銅綠假單胞菌。金黃色葡萄球菌未檢出2天，檢出3天金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）為革蘭氏陽(yáng)性球菌，呈葡萄狀排列，無(wú)芽胞，無(wú)莢膜，能分解甘露醇，血漿凝

11、固酶陽(yáng)性。該菌是葡萄球菌中對(duì)人類(lèi)致病力最強(qiáng)的一種，能引起人體局部化膿性病灶，嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致敗血癥。革蘭染色、鏡檢革蘭染色、鏡檢 生化試驗(yàn)生化試驗(yàn): :血漿凝固酶試驗(yàn)血漿凝固酶試驗(yàn) 甘露醇發(fā)酵試驗(yàn)甘露醇發(fā)酵試驗(yàn)最終結(jié)最終結(jié)果判斷果判斷增增菌菌培培養(yǎng)養(yǎng)供試供試品的品的處理處理書(shū)寫(xiě)檢驗(yàn)書(shū)寫(xiě)檢驗(yàn)記錄單記錄單分分離離純純化化無(wú)菌落或無(wú)特征菌落無(wú)菌落或無(wú)特征菌落配培配培養(yǎng)基養(yǎng)基和稀和稀釋液釋液363611363611SCDLPSCDLP培養(yǎng)基或培養(yǎng)基或7.5%NaCl7.5%NaCl肉湯肉湯24242h hBaird ParkersBaird Parkers或血瓊脂或血瓊脂2448h2448h特征菌落特征菌

12、落金黃色葡萄球菌檢查流程圖金黃色葡萄球菌檢查流程圖鏡檢鏡檢耐鹽分耐鹽分Baird ParkersBaird Parkers平板平板灰灰/黑色黑色血漿凝固酶試驗(yàn)血漿凝固酶試驗(yàn)血漿凝塊血漿凝塊液態(tài)血漿液態(tài)血漿甘露醇高鹽瓊脂結(jié)果報(bào)告凡在上述選擇平板上有可疑菌落生長(zhǎng)，經(jīng)染色鏡檢，證明為革蘭氏陽(yáng)性葡萄球菌，并能發(fā)酵甘露醇產(chǎn)酸，血漿凝固酶試驗(yàn)陽(yáng)性者，可報(bào)告被檢樣品檢出金黃色葡萄球菌。霉菌和酵母菌 霉菌和酵母菌數(shù)測(cè)定（Determination of molds and yeast count）化妝品檢樣在一定條件下培養(yǎng)后，1g或1mL化妝品中所污染的活的霉菌和酵母菌數(shù)量，藉以判明化妝品被霉菌和酵母菌污染程

13、度及其一般衛(wèi)生狀況。 本方法根據(jù)霉菌和酵母菌特有的形態(tài)和培養(yǎng)特性，在虎紅培養(yǎng)基上，置282培養(yǎng)5d，計(jì)算所生長(zhǎng)的霉菌和酵母菌數(shù)。（5-50）革蘭氏染色檢驗(yàn)結(jié)果正確的保證 設(shè)備方面： 恒溫培養(yǎng)設(shè)備 高壓滅菌器（驗(yàn)證） 超凈工作臺(tái)（生物安全柜） 均質(zhì)器(旋渦混合器) 天平（0.1g） 顯微鏡（可要可不要無(wú)硬性要求）壓力滅菌器的檢定（強(qiáng)檢）出廠合格證：只是表示該儀器設(shè)備符合出廠標(biāo)準(zhǔn)。安全需要強(qiáng)檢（安全閥和壓力表）。至于溫度性能緊急時(shí)可以用廠家校準(zhǔn)證書(shū)替代。問(wèn)題1：量值得傳遞過(guò)程？結(jié)論？量值溯源過(guò)程？常規(guī)潔凈工作臺(tái)？ 試劑要求： 無(wú)菌容器（？）及溶液； 試劑充足； 空間充分（10平方米2人操作）； 培養(yǎng)基的制備（有效期的確認(rèn)）與質(zhì)量控制（促生長(zhǎng)與回收率的驗(yàn)證）推薦項(xiàng)；目前大部分微生物實(shí)驗(yàn)室 人員操作方面： 無(wú)菌操作，避免污染； 一定專(zhuān)業(yè)技術(shù)或工作經(jīng)驗(yàn)（招聘與外部審核時(shí)） 相互協(xié)作； 測(cè)試結(jié)果的證明。 日常維護(hù)： 設(shè)備的計(jì)量與保證； 超凈臺(tái)及時(shí)清潔與殺菌（操作前后半小時(shí)）； 檢驗(yàn)后材料的及時(shí)處理； 環(huán)境衛(wèi)生（沉降菌的檢測(cè)每周）。油性樣品如何處理稀釋液生理鹽水-極性溶劑、液體石蠟-非極性溶劑、吐溫80-非離子型表面活性劑，分子一端是親水基團(tuán)，一端是親油基團(tuán)，常用作增溶劑和油/水乳化劑。決定了加入的順序。問(wèn)題2微生物許可檢驗(yàn)項(xiàng)目問(wèn)題3注： 指甲