雙皮奶實(shí)驗(yàn)設(shè)計(改)

1、雙皮奶質(zhì)量檢驗(yàn)序號檢驗(yàn)項目技術(shù)要求檢測方法備注1感官符合產(chǎn)品明示執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的方法2凈含量多次測量取平均值3水分符合行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)GB 5009.3-20104蛋白質(zhì)符合行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)GB 5009.5-20105脂肪符合行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)GB 5413.3-20106蔗糖符合行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)GB 5413.5-2010還原糖GBT 5009.7-2008 7鉛符合標(biāo)準(zhǔn)GB19644GB 5009.12-20108黃曲霉毒素M1符合標(biāo)準(zhǔn)GB19644GB 5413.37-20109菌落總數(shù)符合標(biāo)準(zhǔn)GB19644GB 4789.2-201010大腸菌群符合標(biāo)準(zhǔn)GB19644GB/T 4789.3-200311霉菌符合

2、標(biāo)準(zhǔn)GB19644GB 478915-201012致病菌符合標(biāo)準(zhǔn)GB19644GB 4789.4-2010 沙門氏菌檢驗(yàn)GB 4789.5-2012 志賀氏菌檢驗(yàn) GB 4789.10-2010 金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)GB/T 4789.11-2003 溶血性鏈球菌檢驗(yàn)13三聚氰胺應(yīng)符合中華人民共和國衛(wèi)生部、中華人民共和國工業(yè)和信息化部、中華人民共和國農(nóng)業(yè)部、國家工商行政管理總局、國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局公告，2008年第25號的規(guī)定。GB/T 22388-2008 原料乳與乳制品中三聚氰胺檢測方法14包材符合標(biāo)準(zhǔn)GB 9685-2008看標(biāo)簽實(shí)驗(yàn)一 感官分析實(shí)驗(yàn)一、實(shí)驗(yàn)原理：將學(xué)生作為經(jīng)驗(yàn)型評價

3、員，向評價員介紹試驗(yàn)樣品的特性，簡單介紹該樣品的生產(chǎn)工藝過程和主要原料，使大家對該樣品有一個大概了解，小組討論后選定幾個能表達(dá)該類產(chǎn)品的特征名詞，并確定強(qiáng)度等級范圍，通過品嘗后，統(tǒng)一大家的認(rèn)識，然后分組進(jìn)行獨(dú)立感官檢驗(yàn)。 二、制作方法 1、傳統(tǒng)做法： 1.1材料： 一大碗牛奶（400ml左右），蛋清二只，白砂糖二勺（或者不放糖放煉乳，這樣會更香純）。 1.2做法： 1) 先把牛奶倒到鍋中剛煮開即可（燒久了會破壞蛋白質(zhì)，也結(jié)不起奶皮了），然后再倒入大碗，這時可以看到牛奶表面結(jié)起一層皺皺的奶皮。- 2) 拿一個空的大碗中放入二只蛋清（蛋清蛋黃分離的方法想必大家都會的，就不多說了）、二勺糖，攪勻至糖

4、溶解（不要打太久，否則變蛋泡了)- 3) 等牛奶稍涼后，用筷子把奶皮刺破，再將牛奶慢慢倒入裝有蛋清的大碗，攪拌均勻，再沿碗邊緩緩倒回留有奶皮的大碗，可以看到奶皮會自己浮起來。- 4) 最后將牛奶放入鍋中隔水蒸十分鐘左右，用筷子從中間刺入，沒有牛奶流出說明全部凝結(jié)起來了。 2、工廠化生產(chǎn)： 2.1配料表： 白砂糖、食用葡萄糖、植脂末、（淀粉糖粉、氫化植物油、酪朊酸鈉、食用香精、穩(wěn)定劑340ii、乳化劑471、抗結(jié)劑551）、食品添加劑（ 食用膠、牛奶香精） 2.2做法： 取速融雙皮奶一包置于碗內(nèi)，用90度100度熱開水約120毫升定向攪拌均勻，然后放置38分鐘，即可凝結(jié)成為風(fēng)味獨(dú)特的雙皮奶。雙皮

5、奶的風(fēng)味特性評定1、用5點(diǎn)法數(shù)字標(biāo)度感覺特性強(qiáng)度特征感覺順序強(qiáng) 度（ 1-5分）色 澤香 氣奶 味甜 度彈 性細(xì) 膩 度甜 膩 度余味滯 留 度綜合印象評估（高中低）這里的彈性是雙皮奶入口后的咀嚼性。2、用7點(diǎn)法進(jìn)行喜好程度標(biāo)度很喜歡-喜歡-略喜歡-即不喜歡也不討厭-略不喜歡-不喜歡-很不喜歡-實(shí)驗(yàn)二 凈含量的測定 一：實(shí)驗(yàn)原理參考JJF 1070-2005 定量包裝商品凈含量計量檢驗(yàn)規(guī)則對雙皮奶進(jìn)行凈含量的測定PP5為聚丙烯塑料，由于結(jié)構(gòu)規(guī)整而高度結(jié)晶化，故熔點(diǎn)高達(dá)167,耐熱，制品可用蒸汽消毒是其突出優(yōu)點(diǎn)。密度0.90g/cm3,是最輕的通用塑料。耐腐蝕，抗張強(qiáng)度30MPa，聚丙烯具有許多

6、優(yōu)良特性：1、相對密度小，僅為0.89-0.91，是塑料中最輕的品種之一。2、良好的力學(xué)性能，除耐沖擊性外，其他力學(xué)性能均比聚乙烯好，成型加工性能好。3、具有較高的耐熱性，連續(xù)使用溫度可達(dá)110-120。4、化學(xué)性能好，幾乎不吸水，與絕大多數(shù)化學(xué)藥品不反應(yīng)。5、質(zhì)地純凈，無毒性。6、電絕緣性好。7、聚丙烯制品的透明性比高密度聚乙烯制品的透明性好。 二：實(shí)驗(yàn)要求操作的時候需要戴手套。 三：實(shí)驗(yàn)儀器及材料電子天平（0.01g）、恒溫干燥箱（120）、一次性手套或乳膠手套、隔熱手套、干燥皿 四：操作方法戴上手套，電子天平調(diào)水平稱量盒裝雙皮奶的質(zhì)量M1將雙皮奶倒出并清洗包裝盒用蒸餾水潤洗包裝盒將包裝盒

7、放進(jìn)120的恒溫干燥箱中干燥1h戴上隔熱手套將恒溫干燥箱包裝盒取出并放入干燥盒內(nèi)冷卻將干燥盒中的包裝盒取出并用電子天平測量其質(zhì)量M2重復(fù)測量 取平均值 五：計算M2M1M雙皮奶的凈含量實(shí)驗(yàn)三 食品中水分的測定 一、食品中水分測定的意義食品工廠可按原料中的水分含量進(jìn)行物料衡算。如鮮奶含水量87.5%，用這種奶生產(chǎn)奶粉（是2.5%含水量）需要多少牛奶才能生產(chǎn)一噸奶粉（71出奶粉率）。像這樣類似的物料衡算，均可以用水分測定的依據(jù)進(jìn)行。這也可對生產(chǎn)進(jìn)行指導(dǎo)管理。又例如生產(chǎn)面包，100斤面需用多少斤水，要是先進(jìn)行物料衡算。面團(tuán)的韌性好壞與水分有關(guān)，加水量多面團(tuán)軟，加水量少面團(tuán)硬，做出的面包體積不大，影響

8、經(jīng)濟(jì)效益。 二、實(shí)驗(yàn)原理利用食品中水分的物理性質(zhì)，在101.3 kPa（一個大氣壓），溫度101 105 下采用揮發(fā)方法測定樣品中干燥減失的重量，包括吸濕水、部分結(jié)晶水和該條件下能揮發(fā)的物質(zhì)，再通過干燥前后的稱量數(shù)值計算出水分的含量。 三、試劑和材料 除非另有規(guī)定，本方法中所用試劑均為分析純。 3.1 鹽酸：優(yōu)級純。 3.2 氫氧化鈉（NaOH）：優(yōu)級純。 3.3 鹽酸溶液（6 mol/L）：量取50 mL鹽酸，加水稀釋至100 mL。 3.4 氫氧化鈉溶液（6mol/L）：稱取24 g氫氧化鈉，加水溶解并稀釋至100 mL。 3.5 海砂：取用水洗去泥土的海砂或河砂，先用鹽酸（3.3）煮沸0

9、.5 h，用水洗至中性，再用氫氧化 鈉溶液（3.4）煮沸0.5 h，用水洗至中性，經(jīng)105 干燥備用。 四、儀器和設(shè)備 4.1 扁形鋁制或玻璃制稱量瓶。 4.2 電熱恒溫干燥箱。 4.3 干燥器：內(nèi)附有效干燥劑。 4.4 天平：感量為0.1 mg。 五、操作步驟5.1 固體試樣：取潔凈鋁制或玻璃制的扁形稱量瓶，置于101 105 干燥箱中，瓶蓋斜支于瓶邊，加熱1.0 h，取出蓋好，置干燥器內(nèi)冷卻0.5 h，稱量，并重復(fù)干燥至前后兩次質(zhì)量差不超過2 mg，即為恒重。將混合均勻的試樣迅速磨細(xì)至顆粒小于2 mm，不易研磨的樣品應(yīng)盡可能切碎，稱取2 g10 g試樣（精確至0.0001 g），放入此稱量

10、瓶中，試樣厚度不超過5 mm，如為疏松試樣，厚度不超過10 mm，加蓋，精密稱量后，置101 105 干燥箱中，瓶蓋斜支于瓶邊，干燥2 h4 h后，蓋好取出，放入干燥器內(nèi)冷卻0.5 h后稱量。然后再放入101 105 干燥箱中干燥1 h左右，取出，放入干燥器內(nèi)冷卻0.5 h后再稱量。并重復(fù)以上操作至前后兩次質(zhì)量差不超過2 mg，即為恒重。注：兩次恒重值在最后計算中，取最后一次的稱量值。5.2 半固體或液體試樣：取潔凈的稱量瓶，內(nèi)加10 g海砂及一根小玻棒，置于101 105 干燥箱中，干燥1.0 h后取出，放入干燥器內(nèi)冷卻0.5 h后稱量，并重復(fù)干燥至恒重。然后稱取5 g10 g試樣（精確至0

11、.0001 g），置于蒸發(fā)皿中，用小玻棒攪勻放在沸水浴上蒸干，并隨時攪拌，擦去皿底的水滴，置101 105 干燥箱中干燥4 h后蓋好取出，放入干燥器內(nèi)冷卻0.5 h后稱量。以下按5.1自“然后再放入101 105 干燥箱中干燥1 h左右”起依法操作。 六、分析結(jié)果的表述試樣中的水分的含量按式（1）進(jìn)行計算。式中：X 試樣中水分的含量，單位為克每百克（g/100g)；m1 稱量瓶(加海砂、玻棒)和試樣的質(zhì)量，單位為克（g）；m2 稱量瓶(加海砂、玻棒)和試樣干燥后的質(zhì)量，單位為（g）；m3 稱量瓶(加海砂、玻棒)的質(zhì)量，單位為克（g）。水分含量1 g/100 g時，計算結(jié)果保留三位有效數(shù)字；水分

12、含量1 g/100 g時，結(jié)果保留兩位有效數(shù)字。在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的5 %。實(shí)驗(yàn)四 蛋白質(zhì)測定 一、實(shí)驗(yàn)原理測定步驟：取樣消化蒸餾滴定計算測定樣品中蛋白含搿的定氮儀是根據(jù)凱氏原理而設(shè)計制造的，儀器主要有樣品的消化和蒸餾二個操作步驟組成，前半個過程操作由消化爐來進(jìn)行，后半個工作過程操作由蒸餾器來完成，最終從滴定液中計算出被測樣品的蛋白質(zhì)含量。自動凱氏定氮儀，消化爐部分采用了井式電熱爐芯加熱，提高了消化熱效應(yīng)。樣品消化時，在消化管內(nèi)注入適量H2SO4和樣品，并將催化劑硒片放入管內(nèi)（加入硒片可加速樣品的消化煮解過程，縮短消化時間），消化過程中逸出的S02

13、等有害氣體由消化爐上的排氣裝置排污管經(jīng)抽氣三通流水產(chǎn)生負(fù)壓而排入下水道，可有效地抑制有害氣體的外逸，省略了實(shí)驗(yàn)室中安裝毒氣通風(fēng)櫥；整個消化試樣經(jīng)45分鐘左右即可完成消化煮解過程。蒸餾器工作用水采用自來水，儀器工作時由于蒸發(fā)爐水位的上升使電極產(chǎn)生電流而使水加熱產(chǎn)生蒸汽，通過壓力蒸汽對消煮過的樣品進(jìn)行蒸餾，使消化過程中產(chǎn)生的硫酸銨轉(zhuǎn)化成氨并與硼酸反應(yīng)生成硼酸氫銨，一個樣品的蒸餾過程7分鐘左右即可完成蒸餾過呈的工作。 二、實(shí)驗(yàn)試劑濃硫酸(2)40%氫氧化鈉溶液(3)4%硼酸吸收液甲基紅-溴甲酚綠混合指示劑(5)0.05M/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液催化劑：曬粉（定氮高效催化劑）或曬+無水硫酸鈉 (1:1000)

14、 三、儀器凱氏自動定氮儀。四、操作步驟1、樣品消化：稱取經(jīng)粉碎通過40目60目寸拭樣0.5g-lg（視含氮量而定）無損地置入已經(jīng)洗滌烘干的試管中加催化荊一片和l0mL硫酸。將消化管分別加入消化架各個孔內(nèi)，然后置于消化爐上，然后開啟抽吸泵水閥，使抽吸泵處于吸氣狀態(tài)。接通電源，在加熱初始階段，須注意觀測，防止拭樣因急沸而飛濺。（初化時，電壓澗至180V-200V溫度不易太高）。2、蒸餾：自動定氮儀蒸餾時堿液及蒸餾水采用電磁泵加液置入方法，因?yàn)楸苊饬嘶钊新┮含F(xiàn)象，NaOH、H2O注入接口，用橡膠管套入后分別置于NaOH、H2O盛器同內(nèi)，加液時按面版上相應(yīng)開關(guān)，液體經(jīng)電磁泵自動流入消化管內(nèi)，注入毫升

15、數(shù)視標(biāo)尺所注位置而定。按下蒸汽開關(guān)，蒸發(fā)爐內(nèi)水由冷卻水接口通過冷凝管，經(jīng)平穩(wěn)器慢慢流入，由于蒸發(fā)爐水位不斷上升，使電極板之間電流逐步增加，水溫經(jīng)過電板加熱而上升，但由于初態(tài)時水溫較低，水溫迅速上升，蒸汽尚未能馬上產(chǎn)生，電流急劇增加，造成熔絲管急裂，待電流表指向5A時即釋放蒸汽開關(guān)，待指針回落到零時，再按蒸汽開關(guān)，反復(fù)幾次。等蒸汽正常噴出，電流表固定在4-5A時，即可開始正常蒸餾。在250mL三角接受瓶中加入4%硼酸吸收液50mL和2-3滴混合指示劑，將改瓶套在蒸餾器的接收管上，并且讓管口浸沒在硼酸吸收液中。扳動蒸餾托盤架把需要蒸餾的消化管固定在蒸餾器托盤架上，然后按面版上NaOH、H2O開關(guān)，

16、分別向消化管注入蒸餾水及NaOH溶液，然后開啟蒸汽開關(guān)，向試督內(nèi)注入蒸汽、進(jìn)行蒸餾。待接受瓶液面高于150mld時將接收瓶下移，使接收管離開液面、用H2O沖洗出氣口，繼續(xù)蒸餾半分鐘，然后取下接收瓶，待滴定之用。3、滴定：取出吸收瓶，立即用0.05M鹽酸標(biāo)準(zhǔn)液滴定至灰紅色，半分鐘內(nèi)不褪色即為滴定終點(diǎn)。同時作一空白試驗(yàn)。 五、計算計算含氮量：樣品的粗蛋白質(zhì)含量為：上兩式中 N樣品中的含氮量(%)；X樣品中的粗蛋白質(zhì)含量(%)；M標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液的摩爾濃度（mol/L）；V空白滴定所消耗的標(biāo)準(zhǔn)酸溶液的量(m1)；V2樣液滴定所消耗的標(biāo)準(zhǔn)酸溶液的量(mL)；W樣品的重量(g);0.0141M鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液I

17、mL相當(dāng)于氮的克數(shù)。F氯換算為蛋白質(zhì)的系數(shù)。蛋白質(zhì)中的氮含量一般為1517.6%，按平均值16%計算，以含氮量乘以6.25即為蛋白質(zhì)的量。乳制品的F為6.38，面粉為5.70，玉米、高梁為6.24，花生為5.46，米為5.95，大豆及其制品為5，71，肉與肉制品為6，25，大麥、小米、燕麥、裸麥為5.83，芝麻、向日葵為5.30。 五、注意事項 消化時若有氣體外溢，加大抽取泵水的流速。 NaOH溶液因長期不用，管里容易產(chǎn)生粘固現(xiàn)象，每天工作完畢把NaOH外接皮管，移入蒸餾水瓶內(nèi)，抽洗幾次，待下一次使用時，在蒸餾時須排出l00mLNaOH，以防稀釋NaOH，影響測定誤差。 每次拭樣蒸餾結(jié)束，必須

18、迅速取下消化管，防止消化管液體倒吸置蒸發(fā)爐P內(nèi)腐蝕電極板。實(shí)驗(yàn)五 脂肪的測定 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康闹臼窃u價乳品質(zhì)量好壞的重要衛(wèi)生學(xué)指標(biāo)，測定乳制品中脂肪方法較多，有哥特里羅紫法、蓋勃氏法、巴布科克氏法等，其中哥特里羅紫法是目前國標(biāo)方法中使用范圍較廣、穩(wěn)定性較好的方法。但對脂肪中酸奶的測定不適用。國標(biāo)法中要求采用蓋勃氏法，蓋勃氏法所用蓋勃氏乳脂計很難購買到，這就限制了某些樣品的正常監(jiān)督檢測。為此，我們對乳制品中脂肪采用了羅紫-哥特里法。 二、實(shí)驗(yàn)原理本法是乳品脂肪測定公認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn)法。適用于能在堿性溶液中溶解或至少能形成均勻混懸膠體的樣品，除牛乳、奶油外，也適用于溶解度良好的乳粉。至于已結(jié)塊的乳粉，用本法

19、測定時，其結(jié)果往往偏低。乙醚不能從牛乳或其他液體食品中直接抽取脂肪。需先用堿處理，使酪蛋白鈣鹽溶解，并降低其吸附力，才能使脂肪球與乙醚混合。在乙醇和石油醚存在下，使乙醇溶解物留存在溶液內(nèi)，加入石油醚則可使乙醚不與水混溶，而只抽出脂肪和類脂化合物。石油醚的存在可使分層清晰。將醚層分離并將醚除去后，即可得出脂肪含量。 三、實(shí)驗(yàn)試劑1、氫氧化銨（氨水）：化學(xué)純；2、96%乙醇：化學(xué)純：3、乙醚：化學(xué)純；4、石油醚；化學(xué)純(餾程30-60 C)。 四實(shí)驗(yàn)儀器索氏脂肪抽提器。 五、操作方法稱取樣品1.00-5.00g，置于小燒杯中，加水至l0mL，再加氫氧化銨l0mL，用玻璃棒攪拌成勻乳狀，倒入l00m

20、L具塞量筒中（若為液體樣品如牛乳，可直接吸取l0mL于量筒中，加氫氧化銨1.25mL，充分搖勻。置于60水浴中加溫5 min，再搖動2 min）。用I0mL乙醇分?jǐn)?shù)次洗滌燒杯，洗液并入量筒中，加塞震搖。再以25mL乙醚洗滌燒杯，并入量筒中，加塞震蕩1 min，再用25mL石油醚洗滌燒杯，并入量筒中，加塞震蕩1min。靜置約30min，待分層清晰后，用長吸管將上層醚層吸出，經(jīng)干燥濾紙濾入已知重量的脂肪瓶中。再加1:1的乙醚-石油醚混合液l0mL于量筒中，不經(jīng)震蕩，靜置5min，再將醚層吸出，濾入上述脂肪瓶中O女再加乙醇2mL、乙醚15mL于量筒中，振搖0.5min，再加石油醚15mL（或混合醚3

21、0mL），靜置，待分層清晰后吸出，濾入同一脂肪瓶中。重復(fù)上述操作1次（從女號處開始）。將脂肪瓶內(nèi)混合醚液在水浴上蒸餾回收，所得脂肪在100-105烘箱中烘2h，冷卻后稱重。按下式計算脂肪含量：式中 G脂肪瓶中剩余物重(g); W樣品的重量(g)。100WG%）脂肪（實(shí)驗(yàn)六 還原糖測定 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?此實(shí)驗(yàn)是為了檢測雙皮奶中的還原糖，由于雙皮奶中只含有蔗糖和乳糖，且乳糖含量較少，所以測的的結(jié)果基本可看作蔗糖的含量。 二、實(shí)驗(yàn)原理 樣品經(jīng)除去蛋白質(zhì)后，在加熱條件下，直接滴定標(biāo)定過的堿性酒石酸銅液（斐林試劑），以次甲基藍(lán)作指示劑，根據(jù)樣品液消耗體積，計算還原糖量。 三、實(shí)驗(yàn)試劑 1）斐林氏甲液：稱取

22、15g硫酸銅(CuS04-5H:O)及O05g次甲基藍(lán)，溶于水中并稀釋至1000mL。 2）斐林氏乙液：稱取50g酒石酸鉀鈉及75g氫氧化鈉，溶于水中，再加入4g亞鐵氰化鉀，完全溶解后，用水稀釋至1000mL，貯存于橡膠塞玻璃瓶內(nèi)。 3）乙酸鋅溶液：稱取21，9g乙酸鋅，加3mL冰乙酸，加水溶解并稀釋至l00mL。 4）10.6%亞鐵氰化鉀溶液。 5）鹽酸 6）葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液：精密稱取1.0000g經(jīng)過98100干燥至恒量的純葡萄糖，加水溶解后加入5mL鹽酸，并以水稀釋至1000mL。此溶液每毫升相當(dāng)于1 mg葡萄糖。 四、操作步驟1、樣品處理乳類、乳制品及含蛋白質(zhì)的食品：稱取約2，5-5g固

23、體樣品（吸取25-50mL液體樣品），置于250mL容量瓶中，加50mL水，搖勻。邊搖邊慢慢加入5mL乙酸鋅溶液及5mL亞鐵氰化鉀溶液，加水至刻度，混勻。靜置30min，用干燥濾紙過濾，棄去初濾液，濾液備用（注意：乙酸鋅可去除蛋白質(zhì)、鞣質(zhì)、樹脂等，使它們形成沉淀，經(jīng)過濾除去。如果鈣離子過多時，易與葡萄糖、果糖生成絡(luò)合物，使滴定速度緩慢，從而結(jié)果偏低，可向樣品中加入草酸粉，與鈣結(jié)合，形成沉淀并過濾）。2、標(biāo)定斐林氏液溶液吸取5.OmL斐林氏甲液及5OmL乙液，置于150mL錐形瓶中【注意，甲液與乙液混合可生成氧化亞銅沉淀，應(yīng)將甲液加入乙液，使開始生成的氧化亞銅沉淀重溶】，加水10mL，加入玻璃珠

24、2粒，從滴定管滴加約9mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液，控制在2min內(nèi)加熱至沸，趁沸以每2s 1滴的速度繼續(xù)滴加葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液，直至溶液藍(lán)色剛好退去并出現(xiàn)淡黃色為終點(diǎn)，記錄消耗的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液總體積，平行操作3份，取其平均值，計算每lOmL(甲、乙液各5mL)斐林氏液相當(dāng)于葡萄糖的質(zhì)量(mg)【注意：還原的次甲基藍(lán)易被空氣中的氧氧化，恢復(fù)成原來的藍(lán)色，所以滴定過程中必須保持溶液成沸騰狀態(tài)，并且避免滴定時間過長】。3、樣品溶液預(yù)測：吸取5.0mL斐林氏甲液及5.0mL乙液，置于150mL錐形瓶中，加水l0mL，加入玻璃珠2粒，控制在2min內(nèi)加熱至沸，趁沸以先快后慢的速度，從滴定管中滴加樣品溶液，并保持溶液

25、沸騰狀態(tài)，待溶液顏色變淺時，以每秒1滴的速度滴定，直至溶液藍(lán)色退去，出現(xiàn)亮黃色為終點(diǎn)。如果樣品液顏色較深，滴定終點(diǎn)則為藍(lán)色退去出現(xiàn)明亮顏色（如亮紅），記錄消耗樣液的總體積【注意：如果滴定后樣品液的顏色變淺后復(fù)又變深，說明滴定過量，需重新滴定】。4、樣品溶液的測定吸取5.0mL斐林氏甲液及5.0mL乙液，置于150mL錐形瓶中，加水10mL，加入玻璃珠2粒，在2min內(nèi)加熱至沸，快速從滴定管中滴加比預(yù)測體積少1mL的樣品溶液，然后趁沸繼續(xù)以每2sl滴的速度滴定直至終點(diǎn)。記錄消耗樣液的總體積，同法平行操作2-3份，得出平均消耗體積。五、計算式中： X樣品中還原糖的含量（以葡萄糖計），%； ml0m

26、L斐林試劑相當(dāng)于還原糖（以葡萄糖計）的質(zhì)量，mg; V測定時平均消耗樣品溶液的體積，mL: M樣品質(zhì)量，g。 六、注意事項1）本方法測定的是一類具有還原性質(zhì)的糖，包括葡萄糖、果糖、乳糖、麥芽糖等，只是結(jié)果用葡萄糖或其他轉(zhuǎn)化糖的方式表示，所以不能誤解為還原糖=葡萄糖或其他糖。但如果已知樣品中只含有某一種糖，如乳制品中的乳糖則可以認(rèn)為還原糖=某糖。2）分別用葡萄糖、果糖、乳糖、麥芽糖標(biāo)準(zhǔn)品配制標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定等量同一費(fèi)林氏液，所消耗標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積有所不同。證明即便同是還原糖，在物化性質(zhì)上仍有所差別，所以還原糖的結(jié)果只是反映樣品整體情況，并不完全等于各還原糖含量之和。如果已知樣品只含有某種還原糖，則應(yīng)以

27、該還原糖作標(biāo)準(zhǔn)品，結(jié)果為該還原糖的含量。如果樣品中還原糖的成分未知，或?yàn)槎喾N還原糖的混合物，則以某種還原糖作標(biāo)準(zhǔn)品，結(jié)果以該還原糖計，但不代表該糖的真實(shí)含量。1001000250VMmX實(shí)驗(yàn)七鉛的檢測 一、實(shí)驗(yàn)原理試樣經(jīng)酸熱消化后，在酸性介質(zhì)中，試樣中的鉛與硼氫化鈉(NaBH4)或硼氫化鉀(KBH4)反應(yīng)生成揮發(fā)性鉛的氫化物(PbH4)。以氬氣為載氣，將氫化物導(dǎo)人電熱石英原子化器中原子化，在特制鉛空心陰極燈照射下，基態(tài)鉛原子被激發(fā)至高能態(tài)；在去活化回到基態(tài)時，發(fā)射出特征波長的熒光，其熒光強(qiáng)度與鉛含量成正比，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)系列進(jìn)行定量。 二、實(shí)驗(yàn)試劑2.1硝酸十高氯酸(4+1)混合酸：分別量取硝酸40

28、0 mL，高氯酸100 mL，混勻2.2鹽酸溶液(1+1)：量取250 mL鹽酸倒入250 mL水中，混勻。2.3草酸溶液(10 g/L)：稱取1.0g草酸，加入溶解至100 mL，混勻。2.4鐵氰化鉀K。Fe( CN)。溶液(100 g/L)，稱取10.0g鐵氰化鉀，加水溶解并稀釋至100 mL，混勻2.5氫氧化鈉溶液(2 g/L)：稱取2.0 9氫氧化鈉，溶于1L水中，混勻。2.6硼氫化鈉NaBH4溶液(10 g/L)：稱取5.0g硼氫化鈉溶于500 mL氫氧化鈉溶液(2 g/L)中，混勻，用前現(xiàn)配。2.7鉛標(biāo)準(zhǔn)儲備液(l.0mg/mL)1)。2.8 鉛標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液(1.0g/mL)，精確吸

29、取鉛標(biāo)準(zhǔn)儲備液(1.0mg/mL)逐級稀釋至1.0g/mL。 三、實(shí)驗(yàn)儀器1、雙道原于熒光光度計或同類儀器。2、計算機(jī)系統(tǒng)及編碼鉛空心陰極燈3、電熱板。 四、分析步驟1、試樣消化濕消解：稱取固體試樣0.20 g2.00 g，液體試樣2.00 g(或mL)10. 00 g(或mL)置于50 mL100 mL消化容器中（錐形瓶），然后加入硝酸十高氯酸(4+1)混合酸5 mL10 mL搖勻浸泡，放置過夜次日置于電熱板上加熱消解，至消化液呈淡黃色或無色（如消解過程色澤較深，稍冷補(bǔ)加少量硝酸繼續(xù)消解，稍冷加入20 mL水再繼續(xù)加熱趕酸，至消解液0.5 mLI.0 mL止，冷卻后用少量水轉(zhuǎn)入25 mL容量

30、瓶中，并加入鹽酸(1+1) 0.5 mL，草酸溶液(10 g/L) 0.5 mL，搖勻，再加入鐵氰化鉀(100 g/L)1.0 mL，用水準(zhǔn)確稀釋定容至25 mL，搖勻，放置30 min后測定。同肘做試劑空白。2、標(biāo)準(zhǔn)系列制備取25 mL的容量瓶7支，依次準(zhǔn)確加入鉛標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液(1.00g/mL) 0.00、0.125、0.25、0.50、0.75、1. 00、1.25 mL(各相當(dāng)于鉛濃度0.0、5.0、10.0、200、300、40.0、50.0 mg/mL)，用少量水稀釋后，加入鹽酸(1+ 1)0.5mL草酸(IC) g/L) 0.5 mL搖勻再加入鐵氰化鉀溶液(100 g/L) 1.0m

31、L，用水稀釋至刻度，搖勻。放置30 min后待測。3、測定3.1、儀器參考條件負(fù)高壓：323 V；鉛空心陰極燈電流，75 mA;原子化器，爐溫750800，爐高：8 mm;氬氣流速：載氣800 mL/min，屏蔽氣：1 000 mL/min；加還原劑時間:7_0 s；讀數(shù)時間：15 s；延遲時間：0.0 s；測量方式：標(biāo)準(zhǔn)曲線法I讀數(shù)方式：蜂面積，進(jìn)樣體積；2.0 mL。3.2、濃度測量方式設(shè)定好儀器的最佳條件，逐步將爐溫升至所需溫度，穩(wěn)定10 min- 20 min后開始測量，連續(xù)用標(biāo)準(zhǔn)系列的零管進(jìn)樣，待讀數(shù)穩(wěn)定之后，轉(zhuǎn)入標(biāo)準(zhǔn)系列的測量，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，轉(zhuǎn)入試樣測量，分別測定試樣空白和試樣消化

32、液，每測不同的試樣前都應(yīng)清洗進(jìn)樣器，試樣測定結(jié)果按式(2)計算。3.3、儀器自動計算結(jié)果測量方式設(shè)定好儀器的最佳條件，在試樣參數(shù)畫面，輸入以下參數(shù)，試樣質(zhì)量或體積(g或mL)，稀釋體積(mL)，并選擇結(jié)果的濃度單位，逐步將爐溫升至所需溫度，穩(wěn)定后測量，連續(xù)用標(biāo)準(zhǔn)系列的零管進(jìn)樣，待讀數(shù)穩(wěn)定后，轉(zhuǎn)入標(biāo)準(zhǔn)系列測量，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，在轉(zhuǎn)入試樣測量之前，先進(jìn)入空白值測量狀態(tài)，用試樣空白消化液進(jìn)樣，讓儀器取其均值作為扣除的空白值。隨后即可依次測定試樣溶液，測定完畢后，選擇“打印報告”即可將測定結(jié)果自動打印。 五、結(jié)果計算 試樣中鉛含量按式(2)進(jìn)行計算。 式中 X試樣中鉛含量，單位為毫克每千克或毫克每升(m

33、g/kg或mg/L)； C試樣消化液測定濃度，單位為納克每毫升(ng/mL)I C0試劑空白液i魁定濃度，單位為納克每毫升(ng/mL)； m試樣質(zhì)量或體積，單位為克或毫升(g或mL) V試樣消化液總體積，單位為毫升(mL)。 計算結(jié)果保留三位有效數(shù)字。實(shí)驗(yàn)八 黃曲霉毒素M1 的測定本實(shí)驗(yàn)按GB 5413.37-2010所述方法進(jìn)行檢測標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了乳和乳制品中黃曲霉毒素M1 的測定方法。標(biāo)準(zhǔn)第一法適用于乳和乳制品中黃曲霉毒素M1 的測定；試劑和材料除非另有規(guī)定，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T 6682 規(guī)定的一級水。4.1 甲酸（HCOOH）。4.2 乙腈 (CH3CN)：色譜純。4.3

34、 石油醚（CnH2n+2）：沸程為30 60 。4.4 三氯甲烷（CHCl3）。4.5 氮?dú)猓杭兌?9.9 %。4.6 黃曲霉毒素M1標(biāo)準(zhǔn)樣品：純度98%。4.7 乙腈-水溶液(1+4)：在400 mL水中加入100 mL乙腈。4.8 乙腈-水溶液(1+9)：在450 mL水中加入50 mL乙腈。4.9 0.1 % 甲酸水溶液：吸取1 mL 甲酸（4.1），用水稀釋至1000 mL。4.10 乙腈-甲醇溶液（50+50）：在500 mL乙腈中加入500 mL甲醇。4.11 氫氧化鈉溶液（0.5 mol/L）：稱取2 g氫氧化鈉溶解于100 mL水中。4.12 空白基質(zhì)溶液分別稱取與待測樣品基質(zhì)

35、相同的、不含所測黃曲霉毒素的陰性試樣8份于100 mL燒杯中。以下操作按6.1試液提取和6.2 凈化步驟進(jìn)行。合并所得8份試樣的純化液，用0.22 m 微孔濾膜的一次性濾頭（5.23）過濾。棄去前0.5 mL濾液，接取少量濾液供液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測。獲得色譜質(zhì)譜圖后，對照附錄A 中的圖A.2，在相應(yīng)的保留時間處，應(yīng)不含黃曲霉毒素M1。剩余濾液轉(zhuǎn)移至棕色瓶中，在-20 電冰箱內(nèi)保存，供配制標(biāo)準(zhǔn)系列溶液使用。4.13 黃曲霉毒素M1標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液：分別稱取標(biāo)準(zhǔn)品黃曲霉毒素M1 0.10 mg（精確至0.01 mg），用三氯甲烷（4.4）溶解定容至10 mL。此標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為0.01 mg/mL。溶

36、液轉(zhuǎn)移至棕色玻璃瓶中后，在-20 電冰箱內(nèi)保存，備用。4.14 黃曲霉毒素M1標(biāo)準(zhǔn)系列溶液：吸取黃曲霉毒素M1 標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液（4.13）10 L于10 mL容量瓶中，用氮?dú)鈱⑷燃淄榇抵两?，空白基質(zhì)溶液（4.12）定容至刻度，所得濃度為10 ng/mL的M1標(biāo)準(zhǔn)中間溶液。再用空白基質(zhì)溶液（4.12）將黃曲霉毒素M1標(biāo)準(zhǔn)中間溶液稀釋為0.5 ng/mL、0.8 ng/mL、1.0 ng/mL、2.0 ng/mL、4.0 ng/mL、6.0 ng/mL、8.0 ng/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)工作液。儀器和設(shè)備1 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，帶電噴霧離子源。2 色譜柱：ACQUITY UPLC HSS T31，柱

37、長100 mm，柱內(nèi)徑2.1 mm；填料粒徑1.8 m，或同等性能的色譜柱。3 天平：感量為0.001 g和0.00001 g。4 勻漿器。5 超聲波清洗器。6 離心機(jī)：轉(zhuǎn)速6000 轉(zhuǎn)/分鐘。7 50 mL具塞PVC離心管。8 水浴:溫控30 士2 ，50 士2 ，溫度范圍25 60 。9 容量瓶:100 mL。10 玻璃燒杯:250 mL，50 mL。11 帶刻度的磨口玻璃試管:5 mL，10 mL，20 mL。12 移液管:1.0 mL，2.0 mL和50.0 mL。13 玻璃棒。14 10目圓孔篩。15 250 mL分液漏斗。16 100 mL圓底燒瓶。17 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。18 pH計：

38、精度為0.01。19 250 mL具塞錐形瓶。20 免疫親和柱：針筒式 3 mL。21 10 mL和50 mL一次性注射器。22 固相萃取裝置（帶真空系統(tǒng)）。23 一次性微孔濾頭：帶0.22 m微孔濾膜（水相系）。分析步驟試液提取凈化液相色譜參考條件質(zhì)譜參考條件定性試樣測定空白試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制定量測定分析結(jié)果的表述實(shí)驗(yàn)操作較復(fù)雜詳情看實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)書實(shí)驗(yàn)九 菌落總數(shù)測定 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康木淇倲?shù)測定是用來判定食品被細(xì)菌污染的程度及衛(wèi)生質(zhì)量，它反映食品在生產(chǎn)過程中是否符合衛(wèi)生要求，以便對被檢樣品做出適當(dāng)?shù)男l(wèi)生學(xué)評價。菌落總數(shù)的多少在一定程度上標(biāo)志著食品衛(wèi)生質(zhì)量的優(yōu)劣。 二、設(shè)備和材料除微生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)滅菌

39、及培養(yǎng)設(shè)備外，其他設(shè)備和材料如下：1、恒溫培養(yǎng)箱：36 1 ，30 1 。2、冰箱：2 5 。3、恒溫水浴箱：46 1 。4、天平：感量為0.1 g。5 、均質(zhì)器。6 、振蕩器。7 、無菌吸管：1 mL（具0.01 mL 刻度）、10 mL（具0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸頭。8、 無菌錐形瓶：容量250 mL、500 mL。9、 無菌培養(yǎng)皿：直徑90 mm。10、 pH 計或pH 比色管或精密pH 試紙。11 、放大鏡或/和菌落計數(shù)器。三、檢驗(yàn)程序 四、操作步驟 1 樣品的稀釋1.1 固體和半固體樣品：稱取25 g 樣品置盛有225 mL 磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌均質(zhì)杯內(nèi)，8000

40、 r/min10000 r/min 均質(zhì)1 min2 min，或放入盛有225 mL 稀釋液的無菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打1 min2 min，制成1:10 的樣品勻液。1.2 液體樣品：以無菌吸管吸取25 mL 樣品置盛有225 mL 磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌錐形瓶（瓶內(nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無菌玻璃珠）中，充分混勻，制成1:10 的樣品勻液。36 1 48 h2 h檢 樣25 g(mL)樣品+225 mL 稀釋液，均質(zhì)10倍系列稀釋選擇2 個3 個適宜稀釋度的樣品勻液，各取1 mL 分別加入無菌培養(yǎng)皿內(nèi)培養(yǎng)。計數(shù)各平板菌落數(shù)計算菌落總數(shù)每皿中加入15 mL20 mL平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基，混勻

41、，報告。1.3 用1 mL 無菌吸管或微量移液器吸取1:10 樣品勻液1 mL，沿管壁緩慢注于盛有9 mL 稀釋液的無菌試管中（注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面），振搖試管或換用1 支無菌吸管反復(fù)吹打使其混合均勻，制成1:100 的樣品勻液。1.4 按6.1.3 操作程序，制備10 倍系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋一次，換用1 次1 mL 無菌吸管或吸頭。1.5 根據(jù)對樣品污染狀況的估計，選擇2 個3 個適宜稀釋度的樣品勻液（液體樣品可包括原液），在進(jìn)行10 倍遞增稀釋時，吸取1 mL 樣品勻液于無菌平皿內(nèi)，每個稀釋度做兩個平皿。同時，分別吸取1 mL 空白稀釋液加入兩個無菌平皿內(nèi)作空白對照。

42、1.6 及時將 15 mL20 mL 冷卻至 46 的平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基（可放置于 46 1 恒溫水浴箱中保溫）傾注平皿，并轉(zhuǎn)動平皿使其混合均勻。 2 培養(yǎng).2.1 待瓊脂凝固后，將平板翻轉(zhuǎn)，36 1 培養(yǎng)48 h2 h。水產(chǎn)品 30 1 培養(yǎng) 72 h3 h。.2.2 如果樣品中可能含有在瓊脂培養(yǎng)基表面彌漫生長的菌落時，可在凝固后的瓊脂表面覆蓋一薄層瓊脂培養(yǎng)基（約4 mL），凝固后翻轉(zhuǎn)平板，按6.2.1 條件進(jìn)行培養(yǎng)。 3 菌落計數(shù)可用肉眼觀察，必要時用放大鏡或菌落計數(shù)器，記錄稀釋倍數(shù)和相應(yīng)的菌落數(shù)量。菌落計數(shù)以菌落形成單位（colony-forming units，CFU）表示。.3.1

43、選取菌落數(shù)在30 CFU300 CFU 之間、無蔓延菌落生長的平板計數(shù)菌落總數(shù)。低于30 CFU 的平板記錄具體菌落數(shù)，大于300 CFU 的可記錄為多不可計。每個稀釋度的菌落數(shù)應(yīng)采用兩個平板的平均數(shù)。3.2 其中一個平板有較大片狀菌落生長時，則不宜采用，而應(yīng)以無片狀菌落生長的平板作為該稀釋度的菌落數(shù)；若片狀菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均勻，即可計算半個平板后乘以2，代表一個平板菌落數(shù)。3.3 當(dāng)平板上出現(xiàn)菌落間無明顯界線的鏈狀生長時，則將每條單鏈作為一個菌落計數(shù)。 五、結(jié)果與報告 1 菌落總數(shù)的計算方法 1.1 若只有一個稀釋度平板上的菌落數(shù)在適宜計數(shù)范圍內(nèi)，計算兩個平板菌落

44、數(shù)的平均值，再將平均值乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)，作為每g（mL）樣品中菌落總數(shù)結(jié)果。 1.2 若有兩個連續(xù)稀釋度的平板菌落數(shù)在適宜計數(shù)范圍內(nèi)時，按公式（1）計算： 式中： N樣品中菌落數(shù)； C平板（含適宜范圍菌落數(shù)的平板）菌落數(shù)之和； n1第一稀釋度（低稀釋倍數(shù)）平板個數(shù)； n2第二稀釋度（高稀釋倍數(shù)）平板個數(shù)； d稀釋因子（第一稀釋度）。實(shí)驗(yàn)十 大腸菌群計數(shù) 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?大腸菌群分布較廣，在溫血動物糞便和自然界廣泛存在。調(diào)查研究表明，大腸菌群細(xì)菌多存在于溫血動物糞便、人類經(jīng)?；顒拥膱鏊约坝屑S便污染的地方，人、畜糞便對外界環(huán)境的污染是大腸菌群在自然界存在的主要原因。糞便中多以典型大腸桿菌為主，而外

45、界環(huán)境中則以大腸菌群其他型別較多。 大腸菌群是評價食品衛(wèi)生質(zhì)量的重要指標(biāo)之一，目前已被國內(nèi)外廣泛應(yīng)用于食品衛(wèi)生工作中。 二、設(shè)備和材料除微生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設(shè)備外，其他設(shè)備和材料如下：1、 恒溫培養(yǎng)箱：36 1 。2 、冰箱：2 5 。3 、恒溫水浴箱：46 1 。4 、天平：感量0.1 g。5 、均質(zhì)器。6 、振蕩器。7 、無菌吸管：1 mL（具0.01 mL 刻度）、10 mL（具0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸頭。8 、無菌錐形瓶：容量500 mL。9 、無菌培養(yǎng)皿：直徑90 mm。10 、pH 計或pH 比色管或精密pH 試紙。11 、菌落計數(shù)器。 三、培養(yǎng)基和試劑1 、月桂

46、基硫酸鹽胰蛋白胨（Lauryl Sulfate Tryptose，LST）肉湯：見附錄A 中A.1.2、 煌綠乳糖膽鹽（Brilliant Green Lactose Bile，BGLB）肉湯：見附錄A 中A.2。3 、結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂（Violet Red Bile Agar，VRBA）：見附錄A 中A.3。4 、磷酸鹽緩沖液：見附錄A 中A.4。5 、無菌生理鹽水：見附錄A 中A.5。6 、無菌1 mol/L NaOH：見附錄A 中A.6。7 、無菌1 mol/L HCl：見附錄A 中A.7。四、檢驗(yàn)程序 五、操作步驟1 樣品的稀釋1.1 固體和半固體樣品：稱取25 g 樣品,放入盛有

47、225 mL 磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌均質(zhì)杯內(nèi),8000 r/min10000 r/min 均質(zhì)1 min2 min,或放入盛有225 mL 磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打1 min2 min，制成1:10 的樣品勻液。1.2 液體樣品：以無菌吸管吸取25 mL 樣品置盛有225 mL 磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌錐形瓶（瓶內(nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無菌玻璃珠）中，充分混勻，制成1:10 的樣品勻液。1.3 樣品勻液的pH 值應(yīng)在6.57.5 之間，必要時分別用1 mol/L NaOH 或1 mol/L HCl 調(diào)節(jié)。1.4 用1 mL 無菌吸管或微量移液器吸取1:10 樣

48、品勻液1 mL，沿管壁緩緩注入9 mL 磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌試管中（注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面），振搖試管或換用1 支1 mL 無菌吸管反復(fù)吹打，使其混合均勻，制成1:100 的樣品勻液。1.5 根據(jù)對樣品污染狀況的估計，按上述操作，依次制成十倍遞增系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋1 次，換用1 支1 mL 無菌吸管或吸頭。從制備樣品勻液至樣品接種完畢，全過程不得超過15 min。.2 初發(fā)酵試驗(yàn)每個樣品，選擇3個適宜的連續(xù)稀釋度的樣品勻液（液體樣品可以選擇原液），每個稀釋度接種3管月桂基硫酸鹽胰蛋白胨（LST）肉湯，每管接種1mL（如接種量超過1 mL，則用雙料LST肉湯），36

49、1 培養(yǎng)24 h2 h，觀察倒管內(nèi)是否有氣泡產(chǎn)生，24 h2 h產(chǎn)氣者進(jìn)行復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)，如未產(chǎn)氣則繼續(xù)培養(yǎng)至48 h2 h，產(chǎn)氣者進(jìn)行復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)。未產(chǎn)氣者為大腸菌群陰性。3 復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)用接種環(huán)從產(chǎn)氣的LST肉湯管中分別取培養(yǎng)物1環(huán)，移種于煌綠乳糖膽鹽肉湯（BGLB）管中，36 1培養(yǎng)48 h2 h，觀察產(chǎn)氣情況。產(chǎn)氣者，計為大腸菌群陽性管。4 大腸菌群最可能數(shù)（MPN）的報告按6.3確證的大腸菌群LST陽性管數(shù)，檢索MPN表（見附錄B），報告每g（mL）樣品中大腸菌群的MPN值。實(shí)驗(yàn)十一 霉菌計數(shù) 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?乳制品在加工、儲運(yùn)過程中極易受霉菌污染，飼料一旦霉變，不僅其營養(yǎng)價值會降低，適口性差

50、，而且霉菌毒素會直接危害人類的健康，甚至導(dǎo)致死亡，因此霉菌及霉菌毒素污染所造成的損失已引起人們的高度重視。霉菌不是一個分類學(xué)上的名稱，而是某些絲狀真菌的俗稱，指在基質(zhì)上長成具有絨毛狀、棉絮狀或蜘蛛網(wǎng)狀的菌絲體的真菌，一般泛指毛霉、根霉、曲霉、青霉、鐮刀菌等屬真菌。近年來世界各國紛紛制訂霉菌及霉菌毒素的限量標(biāo)準(zhǔn)，同時加強(qiáng)對霉菌檢測技術(shù)的研究，并不斷完善該項技術(shù)。 二、設(shè)備和材料除微生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設(shè)備外，其他設(shè)備和材料如下：1 、冰箱：2 5 。2 、恒溫培養(yǎng)箱： 28 1 。3 、均質(zhì)器。4 、恒溫振蕩器。5 、顯微鏡：10100。6 、電子天平：感量0.1 g。7 、無菌錐形瓶:容量

51、500 mL、250 mL。8 、無菌廣口瓶：500 mL。9 、無菌吸管：1 mL(具0.01 mL 刻度)、10 mL(具0.1 mL 刻度)。10 、無菌平皿：直徑90 mm。11 、無菌試管: 10 mm75 mm。12 、無菌牛皮紙袋、塑料袋。 三、培養(yǎng)基和試劑1、 馬鈴薯-葡萄糖-瓊脂培養(yǎng)基：見附錄A 中A.1。2 、孟加拉紅培養(yǎng)基：見附錄A 中A.2。四、檢驗(yàn)程序 五、操作步驟1 、樣品的稀釋1.1、 固體和半固體樣品：稱取25 g 樣品至盛有225 mL 滅菌蒸餾水的錐形瓶中，充分振搖，即為1:10稀釋液?；蚍湃胧⒂?25 mL 無菌蒸餾水的均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打2min

52、，制成1:10 的樣品勻液。1.2 、液體樣品：以無菌吸管吸取25 mL 樣品至盛有225 mL 無菌蒸餾水的錐形瓶（可在瓶內(nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無菌玻璃珠）中，充分混勻，制成1:10 的樣品勻液。1.3 、取1 mL 1:10 稀釋液注入含有9 mL 無菌水的試管中, 另換一支1 mL 無菌吸管反復(fù)吹吸,此液為1:100 稀釋液。1.4 、按5.1.3 操作程序，制備10 倍系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋一次，換用1 次1 mL 無菌吸管。1.5、 根據(jù)對樣品污染狀況的估計，選擇2 個3 個適宜稀釋度的樣品勻液（液體樣品可包括原液），在進(jìn)行10 倍遞增稀釋的同時，每個稀釋度分別吸取1 mL 樣品勻液

53、于2 個無菌平皿內(nèi)。同時分別取1 mL樣品稀釋液加入2 個無菌平皿作空白對照。1.6 、及時將15 mL20 mL 冷卻至46 的馬鈴薯-葡萄糖-瓊脂或孟加拉紅培養(yǎng)基(可放置于461恒溫水浴箱中保溫)傾注平皿，并轉(zhuǎn)動平皿使其混合均勻。2 、培養(yǎng)待瓊脂凝固后，將平板倒置，281培養(yǎng)5d，觀察并記錄。3 、菌落計數(shù)肉眼觀察，必要時可用放大鏡，記錄各稀釋倍數(shù)和相應(yīng)的霉菌和酵母數(shù)。以菌落形成單位（colonyforming units，CFU）表示。選取菌落數(shù)在10 CFU150 CFU 的平板，根據(jù)菌落形態(tài)分別計數(shù)霉菌和酵母數(shù)。霉菌蔓延生長覆蓋整個平板的可記錄為多不可計。菌落數(shù)應(yīng)采用兩個平板的平均數(shù)

54、。 六、結(jié)果與報告 1、 計算兩個平板菌落數(shù)的平均值，再將平均值乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)計算。1.2 、若所有平板上菌落數(shù)均大于150 CFU，則對稀釋度最高的平板進(jìn)行計數(shù)，其他平板可記錄為多不可計，結(jié)果按平均菌落數(shù)乘以最高稀釋倍數(shù)計算。1.3 、若所有平板上菌落數(shù)均小于10 CFU，則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計算。1.4 、若所有稀釋度平板均無菌落生長，則以小于1 乘以最低稀釋倍數(shù)計算；如為原液，則以小于1計數(shù)。 2 、報告2.1 、菌落數(shù)在100 以內(nèi)時，按“四舍五入”原則修約，采用兩位有效數(shù)字報告。2.2 、菌落數(shù)大于或等于100 時，前3 位數(shù)字采用“四舍五入”原則修約后，取前2

55、 位數(shù)字，后面用0 代替位數(shù)來表示結(jié)果；也可用10 的指數(shù)形式來表示，此時也按“四舍五入”原則修約，采用兩位有效數(shù)字。2.3 、稱重取樣以CFU/g 為單位報告，體積取樣以CFU/mL 為單位報告，報告或分別報告霉菌和/或酵母數(shù)。實(shí)驗(yàn)十二：致病菌金黃色葡萄球菌 GB 4789.10-2010溶血性鏈球菌 GB/T 4789.11-2003沙門氏菌 GB 4789.4-2010志賀氏菌 GB 4789.5-2012金黃色葡萄球菌 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?金黃色葡萄球菌在自然界中無處不在，空氣、水、灰塵及人和動物的排泄物中都可找到。因此，食品受到污染的機(jī)會很多。美國疾病控制中心報告，由金黃色葡萄球菌引起的感染占

56、第二位，僅次于大腸桿菌。金黃色葡萄球菌腸毒素是個世界性衛(wèi)生難題，在美國由金黃色葡萄球菌腸毒素引起的食物中毒，占整個細(xì)菌性食物中毒的33%，加拿大則更多，占到45%，中國金黃色葡萄球菌引起的食物中毒事件也時有發(fā)生。設(shè)備和材料除微生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設(shè)備外，其他設(shè)備和材料如下：2.1 恒溫培養(yǎng)箱：36 1 。2.2 冰箱：2 5 。2.3 恒溫水浴箱：37 65 。2.4 天平：感量0.1 g。2.5 均質(zhì)器。2.6 振蕩器。2.7 無菌吸管：1 mL（具0.01 mL 刻度）、10 mL（具0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸頭。2.8 無菌錐形瓶：容量100 mL、500 mL。2.9 無

57、菌培養(yǎng)皿：直徑90 mm。2.10 注射器：0.5 mL。2.11 pH 計或pH 比色管或精密pH 試紙。培養(yǎng)基和試劑 3.1 10 %氯化鈉胰酪胨大豆肉湯：見附錄A 中A.1。 3.2 7.5 %氯化鈉肉湯：見附錄A 中A.2。 3.3 血瓊脂平板：見附錄A 中A.3。 3.4 Baird-Parker 瓊脂平板：見附錄A 中A.4。 3.5 腦心浸出液肉湯(BHI) ：見附錄A 中A.5。 3.6 兔血漿：見附錄A 中A.6。 3.7 稀釋液：磷酸鹽緩沖液：見附錄A 中A.7。 3.8 營養(yǎng)瓊脂小斜面：見附錄A 中A.8。 3.9 革蘭氏染色液：見附錄A 中A.9。 3.10 無菌生理鹽

58、水：見附錄A 中A.10溶血性鏈球菌 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?溶血性鏈球菌在自然界中分布較廣，存在于水、空氣、塵埃、糞便及健康人和動物的口腔、鼻腔、咽喉中，可通過直接接觸、空氣飛沫傳播或通過皮膚、粘膜傷口感染，被污染的食品如奶、肉、蛋及其制品也會對人類進(jìn)行感染。上呼吸道感染患者、人畜化膿性感染部位常成為食品污染的污染源。一般來說，溶血性鏈球菌常通過以下途徑污染食品： 1、食品加工或銷售人員口腔、鼻腔、手、面部有化膿性炎癥時造成食品的污染； 2、食品在加工前就已帶菌、奶?；蓟撔匀橄傺谆蛐笄菥植炕摃r，其奶和肉尸某些部位污染； 3、熟食制品因包裝不善而使食品受到污染。 設(shè)備和材料 3.1 冰箱：04。 3.2

59、恒溫培養(yǎng)箱：361。 3.3恒溫水浴鍋：36土1。 3.4顯微鏡：10X100X 3.5均質(zhì)器或滅菌乳缽。 3.6離心機(jī)：4 000 r/min。 3.7架盤藥物天平；0g500 g，精確至0.50。 3.8滅菌試管：10 mm100 mm、16 mm160 mrn。 3.9滅菌吸管，1 mL(具0.01 mL刻度)、5 mL、10 rnL(具o1 mL刻度) 3. 10滅菌錐形瓶：100 mL。 3. 11滅菌培養(yǎng)皿：直徑90 mm。 3. 12滅菌棉簽、鑷子等。 培養(yǎng)基和試劑 4.1 葡萄糖肉浸液肉湯：按GB/T 4789. 28-2003中4.1規(guī)定。在肉浸液肉湯內(nèi)加入1%葡萄糖。 4.

60、2 肉浸液肉湯，按GB/T 4789. 28-2003中4.1規(guī)定。 4.3匹克氏肉湯：按GB/T 4789. 28-2003中4.62規(guī)定。 4.4血瓊脂平板：按GB/T 4789. 28-2003中4.6規(guī)定。 4.5人血漿 4.6 0. 25%氯化鈣。 4.7 0. 85%滅菌生理鹽水。 4.8桿菌肽藥敏紙片（含0.04單位）。沙門氏菌 實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?沙門菌能引起人類的傷寒、副傷寒和食物中毒，也能感染動物。感染動物的沙門菌，也可由不同的方式污染食品，是重要的腸道致病菌。沙門菌分布極廣、種類繁多，1983年底已有2107個菌型，至1997年已有2435個菌型（血清型）被承認(rèn)。至2007年公布