桂林醫(yī)學(xué)院天然藥物教研室

1、生藥學(xué)生藥學(xué)總總 論論 桂林醫(yī)學(xué)院天然藥物教研室桂林醫(yī)學(xué)院天然藥物教研室真實(shí)性真實(shí)性有效性有效性安全性安全性生藥學(xué)的基本理論與基本方生藥學(xué)的基本理論與基本方法法內(nèi)容內(nèi)容生藥質(zhì)量的評價(jià)方法生藥質(zhì)量的評價(jià)方法 生藥學(xué)總論生藥學(xué)總論 內(nèi)容內(nèi)容一、總論的學(xué)習(xí)內(nèi)容一、總論的學(xué)習(xí)內(nèi)容 *經(jīng)典理化鑒定方法經(jīng)典理化鑒定方法二、中成藥的鑒定二、中成藥的鑒定 *DNA分子鑒定分子鑒定 *養(yǎng)陰清肺丸的鑒定養(yǎng)陰清肺丸的鑒定 *生藥學(xué)生藥學(xué) 原植物形態(tài)特征原植物形態(tài)特征性狀特征性狀特征*DNA分子分子特征特征顯微特征顯微特征定性分析定性分析定量分析定量分析有害物質(zhì)限量有害物質(zhì)限量（重金屬、農(nóng)殘、毒性成分）（重金屬、農(nóng)殘

2、、毒性成分）真真 偽偽優(yōu)劣優(yōu)劣定義定義方法方法直接將生藥切片或粉末置載直接將生藥切片或粉末置載玻片上，滴加試液，加蓋玻玻片上，滴加試液，加蓋玻片在顯微鏡下觀察產(chǎn)生的結(jié)片在顯微鏡下觀察產(chǎn)生的結(jié)晶、沉淀或顏色。晶、沉淀或顏色。生藥的提取物置載玻片上，生藥的提取物置載玻片上，滴加試液，加蓋玻片在顯微滴加試液，加蓋玻片在顯微鏡下觀察反應(yīng)。鏡下觀察反應(yīng)。顯微化學(xué)定位顯微化學(xué)定位一、微量升華的原理及方法一、微量升華的原理及方法二、在鑒定中的應(yīng)用二、在鑒定中的應(yīng)用熒光分析法在生藥鑒定中的應(yīng)用熒光分析法在生藥鑒定中的應(yīng)用定性分析定性分析紫外分析儀法紫外分析儀法1、觀察生藥整體、觀察生藥整體2、觀察生藥的新鮮斷

3、面或飲片、觀察生藥的新鮮斷面或飲片3、觀察生藥粉末、觀察生藥粉末4、直接觀察生藥的某種溶劑浸、直接觀察生藥的某種溶劑浸 出液出液5、將生藥提取液滴于濾紙上，、將生藥提取液滴于濾紙上， 揮干溶劑觀察揮干溶劑觀察6、生藥提取液與化學(xué)試劑作用、生藥提取液與化學(xué)試劑作用 后產(chǎn)生熒光后產(chǎn)生熒光 7、多重觀察、多重觀察 日光法日光法熒光顯微鏡法熒光顯微鏡法熒光光譜法熒光光譜法定量分析：熒光分光光度法、薄層熒光掃描法定量分析：熒光分光光度法、薄層熒光掃描法薄層色譜薄層色譜操作：選擇吸附劑操作：選擇吸附劑 制備薄層板制備薄層板 點(diǎn)樣點(diǎn)樣 定性參數(shù)的選測定定性參數(shù)的選測定 顯色顯色 展開展開 （比移值（比移值R

4、f、相對比移值、相對比移值Rst）應(yīng)用：定性分析應(yīng)用：定性分析 定量分析定量分析 以以RfRf做定性的依據(jù)，因影響做定性的依據(jù)，因影響RfRf因素多，需用標(biāo)準(zhǔn)因素多，需用標(biāo)準(zhǔn) 對照品作對照。在兩種或兩種以上展開系統(tǒng)種展開，對照品作對照。在兩種或兩種以上展開系統(tǒng)種展開， 若樣品中斑點(diǎn)的若樣品中斑點(diǎn)的RfRf值與標(biāo)準(zhǔn)對照品的值與標(biāo)準(zhǔn)對照品的RfRf值勻相同可基值勻相同可基 本肯定二者為同一化合物。本肯定二者為同一化合物。定性鑒別定性鑒別用標(biāo)準(zhǔn)物用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)對照別質(zhì)對照別標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)對照品對照品對照藥材對照藥材用相對比用相對比移值鑒別移值鑒別用文字描用文字描述鑒別述鑒別 原點(diǎn)中心至斑點(diǎn)中心的距離原點(diǎn)中心至

5、斑點(diǎn)中心的距離Rst = 原點(diǎn)中心至參考物質(zhì)斑點(diǎn)中心的距離原點(diǎn)中心至參考物質(zhì)斑點(diǎn)中心的距離定量鑒別定量鑒別n分兩類：n一是將待測物從薄層板洗拖后，選擇適宜的方法測定（洗脫法）；n二是薄層展開后，用薄層掃描儀在薄層板上測定被分離組分的含量（薄層掃描法）。n洗脫法分四步進(jìn)行：n待測組分的分離n斑點(diǎn)定位n斑點(diǎn)的收集及洗脫n測定（多采用UV及可見光分光度法）HPLCHPLC 可用于定性和定量，色譜圖中各色譜峰可用于定性和定量，色譜圖中各色譜峰的保留時間、色譜峰相對百分峰面積及的保留時間、色譜峰相對百分峰面積及主要色譜峰的主要色譜峰的UVUV吸收光譜，均可作為生吸收光譜，均可作為生藥真實(shí)性鑒定的指紋資料

6、。藥真實(shí)性鑒定的指紋資料。 是生藥及制是生藥及制劑質(zhì)量分析常用的方法。劑質(zhì)量分析常用的方法。 一切物質(zhì)都會對可見光及不可見光中的某些波長的一切物質(zhì)都會對可見光及不可見光中的某些波長的光線產(chǎn)生吸收。不過其吸收的程度是不同的。即物質(zhì)對不光線產(chǎn)生吸收。不過其吸收的程度是不同的。即物質(zhì)對不同波長的光線表現(xiàn)出不同的吸收能力，物質(zhì)的這一特性稱同波長的光線表現(xiàn)出不同的吸收能力，物質(zhì)的這一特性稱為選擇吸收。為選擇吸收。 物質(zhì)對光線的選擇吸收反映了它們分子內(nèi)部結(jié)構(gòu)的差物質(zhì)對光線的選擇吸收反映了它們分子內(nèi)部結(jié)構(gòu)的差異。也就是說，通過研究物質(zhì)得分子吸收光譜，就可以鑒異。也就是說，通過研究物質(zhì)得分子吸收光譜，就可以鑒

7、別物質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)。這是分光光度法對生藥進(jìn)行定性鑒別別物質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)。這是分光光度法對生藥進(jìn)行定性鑒別的依據(jù)。的依據(jù)。 物質(zhì)吸收光子能量的強(qiáng)度，不僅取決于物質(zhì)的分子結(jié)物質(zhì)吸收光子能量的強(qiáng)度，不僅取決于物質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)，而且還與被光子所作用的物質(zhì)的分子數(shù)目，即物質(zhì)的構(gòu)，而且還與被光子所作用的物質(zhì)的分子數(shù)目，即物質(zhì)的濃度有關(guān)。這是分光光度法對生藥進(jìn)行定量鑒別的依據(jù)。濃度有關(guān)。這是分光光度法對生藥進(jìn)行定量鑒別的依據(jù)。分光光度法在生藥定性分析中的應(yīng)用分光光度法在生藥定性分析中的應(yīng)用原理：同種生藥的光譜具有一定的穩(wěn)定性及重現(xiàn)性原理：同種生藥的光譜具有一定的穩(wěn)定性及重現(xiàn)性 不同種類生藥的光譜各不相同不同種類生

8、藥的光譜各不相同方法：方法：UVUV分光光度法分光光度法比較光譜的一致性（與對照藥材比較；比較光譜的一致性（與對照藥材比較； 與文獻(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)光譜核對）與文獻(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)光譜核對）比較導(dǎo)數(shù)光譜的一致性（用于比較導(dǎo)數(shù)光譜的一致性（用于UVUV光譜光譜 不易區(qū)分）不易區(qū)分）比較光譜的特征吸收（常用特征數(shù)據(jù)：比較光譜的特征吸收（常用特征數(shù)據(jù)： 最大吸收波長和吸光度比值）最大吸收波長和吸光度比值） 電子光譜，輻射波長電子光譜，輻射波長200-400200-400nmnm，儀器為，儀器為UVUV分光光度計(jì)選分光光度計(jì)選擇性不如擇性不如 IRIR。主要用于定量及。主要用于定量及物理常數(shù)測定物理常數(shù)測定IRIR分光光度法

9、分光光度法 振轉(zhuǎn)光譜，輻射波長振轉(zhuǎn)光譜，輻射波長2.5 - 15m2.5 - 15m。具特征峰多、專屬性強(qiáng)。具特征峰多、專屬性強(qiáng)（特別是在（特別是在 7-15m7-15m一段稱指紋圖譜，峰多且尖銳）、用試樣量少一段稱指紋圖譜，峰多且尖銳）、用試樣量少快速簡便。用于生藥真?zhèn)舞b別及結(jié)構(gòu)鑒定?？焖俸啽?。用于生藥真?zhèn)舞b別及結(jié)構(gòu)鑒定。方法：方法：1 1、樣品的處理：直接粉末法、溶劑提取法、樣品的處理：直接粉末法、溶劑提取法 2 2、制片：壓片法、涂片法、制片：壓片法、涂片法 3 3、光譜分析：不需要確定光譜中各主要吸收峰的歸屬，、光譜分析：不需要確定光譜中各主要吸收峰的歸屬， 只在只在4000-400c

10、m 4000-400cm 范圍內(nèi)比較光譜的差異。范圍內(nèi)比較光譜的差異。 A A、在某一波數(shù)處，一方有明顯吸收峰，另一方無。、在某一波數(shù)處，一方有明顯吸收峰，另一方無。 B B、在某一波數(shù)內(nèi)，兩吸收峰的形狀強(qiáng)度有明顯不同。、在某一波數(shù)內(nèi)，兩吸收峰的形狀強(qiáng)度有明顯不同。 C C、被鑒別雙方在指紋區(qū)的特征不同。、被鑒別雙方在指紋區(qū)的特征不同。 上述三種，只要有其中一種就可做出鑒別結(jié)論。上述三種，只要有其中一種就可做出鑒別結(jié)論。-1應(yīng)用舉例應(yīng)用舉例 包括相對密度、旋光度、折光率、凝點(diǎn)、熔點(diǎn)等。對于油包括相對密度、旋光度、折光率、凝點(diǎn)、熔點(diǎn)等。對于油脂類、揮發(fā)油類及樹脂類藥材的真實(shí)性和純度鑒別具有特別重

11、脂類、揮發(fā)油類及樹脂類藥材的真實(shí)性和純度鑒別具有特別重要的意義。要的意義。相對密度相對密度熔點(diǎn)熔點(diǎn)區(qū)別或檢區(qū)別或檢查生藥的查生藥的純雜程度純雜程度區(qū)別或檢區(qū)別或檢查生藥的查生藥的純雜程度純雜程度測定含量測定含量折光率折光率區(qū)別不同區(qū)別不同的油類或的油類或檢查生藥檢查生藥純雜程度純雜程度旋光度、凝點(diǎn)旋光度、凝點(diǎn)解決形態(tài)鑒定的某些局限；解決形態(tài)鑒定的某些局限； 同屬多來源藥材的鑒別同屬多來源藥材的鑒別 道地藥材的鑒別等道地藥材的鑒別等特點(diǎn)：穩(wěn)定性、多樣性、化學(xué)穩(wěn)定性方法：RFLP、PCR、RAPD等應(yīng)用：植物分類、中藥材鑒別、道地生藥鑒定PCR (Polymerase chain reaction)PCR fragmentsInterested DNA sequencesPrimerPrimerExtracts Genomic DNADNA sequencing尋找特征性基因?qū)ふ姨卣餍曰騈oImagePCR-RFLPDNA Chi