普洱茶黃酮類物質對D-galactose誘導氧化應激大鼠GSH-Px活性影響的研究

1、. 科類 農科 編號（學號）2010312657 本科生畢業(yè)論文（設計）普洱茶黃酮類物質對D-galactose誘導氧化應激大鼠GSH-Px活性影響的研究Studies of the effects of flavonoid in puer tea on the GSH-Px activity in oxidative stress rats induced by D-galactose 李銀麗指導教師： 侯 艷 職稱： 講 師 云南農業(yè)大學 昆明 650201 學 院： 龍潤普洱茶學院 專 業(yè)： 茶學 （茶藝茶道方向） 年級： 2010級 論文（設計）提交日期： 2014年4月答辯日期： 2

2、014年5月 答辯委員會主任： 呂才有 云南農業(yè)大學 2014年5月普洱茶黃酮類物質對D-galactose誘導氧化應激大鼠 GSH-Px活性影響的研究 李銀麗（云南農業(yè)大學，龍潤普洱茶學院，昆明，650201）摘 要【目的】探討普洱茶黃酮類物質對D-galactose誘導氧化應激大鼠GSH-Px活性的影響；【方法】以由D-galactose誘導引起的氧化損傷試驗大鼠為模型動物，造模成功的試驗大鼠隨機分為陽性（D-galactose模型）對照組、藥物組，50%乙醇洗脫物（低、中、高劑量）組，30%乙醇洗脫物（低、中、高劑量）組，10%乙醇洗脫物（低、中、高劑量）組，加上為陰性（正常）對照組共1

3、2組，每組12只（雌雄各半）。持續(xù)分別給予蒸餾水、Vitamin E水溶液（混懸液）、普洱茶黃酮類物質乙醇洗脫物50%（低、中、高）、30%（低、中、高）10%（低、中、高）、蒸餾水。連續(xù)灌喂28天后犧牲實驗動物，測定試驗大鼠心、肝、腎與腦組織中谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）的活性。【結果】與正常對照組(Vehicle group)相比，D-galactose誘導氧化應激模型組大鼠主要臟器（心，肝、腦與腎）組織中GSH-Px活性顯著降低。藥物對照組（Vitamin E）與模型組比較，大鼠臟器（心，肝、腦與腎）組織中GSH-Px活性顯著升高（P0.001）。普洱茶黃酮類提取物50%，30%和

4、10%的乙醇洗脫物均具有增加D-galactose誘導氧化應激模型大鼠主要臟器（心，肝、腦與腎）組織中GSH-Px活性的作用（P0.01），并具有劑量-效應關系，且三種物質的作用相當?！窘Y論】普洱茶黃酮類物質具有增加氧化應激大鼠GSH-Px活性的作用。 關鍵詞:普洱茶，黃酮類物質；抗氧化；GSH-Px；大鼠Studies of the effects of flavonoid in puer tea on the GSH-Px activity in oxidative stress rats induced by D-galactoseLi yin li (Yunnan Agricultur

5、al University;College of Long-run Pu-erh tea；Kunming 650201)ABSTRACT 【OBJECTIVE】 To investigate the effects of flavonoid in puer tea on the GSH-Px activity in oxidative stress rats induced by D-galactose. 【METHODS】 In this study, we used oxidative stress rats as animal model, the successfully e

6、stablished experimental rats models were randomly divided as positive control group, drug group (Vitamin E), 50% ethanolic elution groups (include high , middle and low three dosage groups), 30% ethanolic elution groups (include high , middle, 

7、low three dosage groups ), 10% ethanolic elution group (include high ,middle, low three dosage groups) and negtive group with 12 rats in each group. Each group rats were given by gavage with distilled water, Vitamin E, h

8、igh, middle, low doses of 50% ethanolic elution, high, middle,  low doses of 30% ethanolic elution and high , middle,  low doses of 10% ethanolic elution, and distilled water respectively. The heart, liver, kidney and brain of rats wer

9、e obtained 4 weeks later, in which the vitality of  GSH-Px were detected.The vitality of GSH-Px in main organs of oxidative stress rats significantly reduced,Compared with normal control group.The vitality of GSH-Px in main o

10、rgans of drug group rats significantly increased, Compared with positive control group(P0.001). The flavonoids in Pu'er tea(50% ,30% and 10%ethanolicelution) could improve the activity of GSH-Px  in main organs of oxidative

11、60;stress rats（P0.01) , and showed a significant dose response relationship, and these three elutions serve the same function.【CONCLUSION】Flavonoids in puer tea have significant effect on increasing the GSH-Px activity in oxidative stress rats induced by

12、D-galactose. Key words: the flavonoidson of Pu-Erh Tea； antioxidatio；D-galactose；Rats ：16 洱茶黃酮類物質對D-galactose誘導氧化應激大鼠GSH-Px活性影響的研究1 引言1.1 普洱茶的概述及其研究現(xiàn)狀 普洱茶是以云南省一定區(qū)域內的云南大葉種曬青毛茶為原料，經(jīng)過后發(fā)酵加工成的散茶和緊壓茶1。普洱茶屬于黑茶類,產于云南省西雙版納、思茅和臨滄等地,自古以來即在普洱集散,因而得名2,是我國的特種茶類 3。渥堆發(fā)酵是普洱茶的特征工序，對普洱茶的保健功效起著關鍵作用4。研究表明，普洱茶具有抗氧化5

13、、減肥9、暖胃助消化10、抗癌11、健齒護牙12、降壓13、防治糖尿病、提高免疫力、生津止渴、醒酒解毒、降血脂6、降血糖7、抗突變、防癌及防治心血管疾病等功能。普洱茶藥理作用的主要成分是茶多酚、茶色素和茶多糖等8。茶葉中的多酚類包括黃烷醇類、黃酮類、黃酮醇類、花青素類、花白素類；酚酸及縮酚酸類等多種結構類型的酚類化合物3。1.2 氧化應激的概述 從生物學角度來看，人體的生命活動是由難以計數(shù)的酶促氧化還原反應組成的。例如機體所需能量的產生，是在細胞當中的“發(fā)電廠”線粒體中的一系列氧化還原反應產生的。在其反應過程中，不可避免地產生大量的“中間產物”。這些“中間產物”就是所謂的“自由基”。即帶有未成

14、對電子的分子基團，反應活性極高?？晒羧梭w當中任何的分子，因而，這種物質常被稱為“有害垃圾”。在正常情況下，這些“有害垃圾”或“自由基”可被細胞中的環(huán)衛(wèi)系統(tǒng)“抗自由基”分子消除掉。當機體的垃圾清理系統(tǒng)能力不足或功能紊亂時，這些垃圾就會在人體中沉積。這些“垃圾”可沉積到皮膚，人體皮膚便會出現(xiàn)“老年斑”；當這些“垃圾”沉積到心臟時，人體可出現(xiàn)心悸、心慌與氣短。當這些“垃圾”堆積到腦組織時，就可出現(xiàn)學習記憶的障礙，如失眠、健忘等。當這些“垃圾”沉積到腎組織中時，人體便會出現(xiàn)腎功能的損害，如出現(xiàn)蛋白尿甚至血尿等。所謂的“氧化應激”（Oxidative Stress，OS），其實就是機體在遭受各種有害刺

15、激時，體內活性氧自由基(reactive oxygen species，ROS）和活性氮自由基（reactive nitrogen species，RNS）產生過多，氧化程度超出氧化物的清除，氧化系統(tǒng)和抗氧化系統(tǒng)失衡，從而導致組織損傷。即體內“有害垃圾”的產生與“垃圾清除”失衡。垃圾產生大于垃圾清理，結果導致組織的損傷。大量資料證明，炎癥、腫瘤、衰老、血液病，以及心、肝、肺、皮膚等各方面疑難疾病的發(fā)生機理與體內自由基過多積累或清除自由基能力下降有著密切的關系。自由基和活性氧的生成，主要來自體外、體內各種因素，體外因素主要是各種各樣環(huán)境因素中的自由基進入到體內，特別重要的是大氣污染物質、藥物、紫

16、外線、放射線等；體內自由基的產生系統(tǒng)主要有：活性化的巨噬細胞，白血球(嗜中性白細胞、嗜酸性白細胞、嗜堿性細胞、淋巴細胞、單核細胞)，細胞內微粒(線粒體、細胞核膜、微粒體等)，氧化金屬蛋白質(氧合血紅蛋白)，酶類(黃嘿吟氧化酶、叫睬胺氧添加酶等)，身體內物質的自動氧化(兒茶酚胺、硫醇化合物等)等。因此，降低自由基危害的途徑也有兩條：一是，利用內源性自由基清除系統(tǒng)清除體內多余自由基；二是，發(fā)掘外源性抗氧化劑自由基清除劑，阻斷自由基對人體的入侵。 1.3 普洱茶黃酮類物質的概述 黃酮類(Flavone)物質是自然界廣泛存在的一類黃色色素，茶葉中黃酮類物質約為茶葉干重的3%-4%。相關試驗表明，黃酮類

17、物質能通過其所含的酚羥基結構與自由基反應而達到可有效清除羥自由基和體內自由基,實現(xiàn)抗氧化作用，且其清除自由基的能力大于維生素C和維生素E12。此外，黃酮類物質還作為一種天然的抗氧化劑，以其安全、高效地防止油脂及其制品氧化和酸敗，保證含油食品的感官品質和營養(yǎng)價值，延長保存期而受到人們的關注13。黃酮類基本結構是2-苯基色原酮（2-Phenylchromone），現(xiàn)在則泛指兩個具有酚羥基的苯環(huán)（A與B環(huán)）通過中央三碳原子相互連接而成的一系列化合物。黃酮具有較高的藥用價值,黃酮類物質具有：抗菌作用；抗病毒作用；抗過敏作用；抗衰老作用；抗腫瘤及降血脂等多種生物活性14。1.4 研究目的和意義綜上所述，

18、自由基與多種疾病的關系，已愈來愈被重視，自由基生物醫(yī)學的發(fā)展使得探尋高效低毒的自由基清除劑天然抗氧化劑成為生物化學和醫(yī)藥學的研究熱點?？寡趸徽J為是茶葉保健抗癌的最重要機理。對普洱茶中活性物質具有抗氧化作用的研究越來越深入，而普洱茶黃酮類物質是否具有抗氧化作用，以及其抗氧化作用是如何發(fā)揮的還鮮見報道?；钚匝踝杂苫殡S代謝而產生，因而氧化應激損傷隨時都會發(fā)生。為了應對時時刻刻都會產生的損傷，人類和動物在進化中發(fā)展了多重防線。除了SOD以外，生物細胞中還存在谷胱甘肽過氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px) 抗損傷系統(tǒng)，只是它們的分工不同?；钚匝踝杂苫鵕OS經(jīng)過SOD

19、酶的催化，轉化為過氧化氫（H2O2），H2O2再經(jīng)過GSH-Px的催化轉化為水和分子氧。實驗研究顯示，GSH-Px活性隨衰老的下降，與多器官的抗損傷能力下降有關。國際上的生物學家做了一些有趣的實驗，發(fā)現(xiàn)單純增加SOD的活性，并不能顯著地對抗衰老，而同時增加GSH-Px的活性，則顯著延長衰老動物的健康壽命。因此，本次試驗采用柱層析法以不同乙醇濃度（50%，30%，10%）洗脫液獲得的普洱茶黃酮類物質為原料，以由D-galactose誘導引起的氧化損傷試驗大鼠為模型動物，對其持續(xù)分別經(jīng)口灌胃普洱茶黃酮類物質50%（高、中、低）、30%（高、中、低）、10%（高、中、低）4周后，犧牲試驗動物，測定其

20、主要臟器（心，肝、腦與腎）組織中谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）的活性，并確定其劑量-效應關系。揭示普洱茶黃酮類物質的抗氧化作用, 為普洱茶的抗氧化功能評價提供理論依據(jù)。2 研究材料與方法2.1 實驗時間與地點本試驗自2013年10月1日至2014年1月25日進行為期四個月的動物飼養(yǎng)試驗。動物飼養(yǎng)試驗是在動科院小動物房養(yǎng)殖4房間進行，生化指標的測定是在動科院牧醫(yī)樓衛(wèi)檢實驗室進行。2.2研究材料2.2.1受試樣品：普洱茶黃酮類物質50%、30%和10%的乙醇洗脫物：由云南農業(yè)大學普洱茶學院李家華老師提供。所有提供的化合物避光密閉，4保存。 對照藥物：采用經(jīng)過國際上證明用于抗氧化應激有效的藥物，

21、Vitamin E膠囊（美國Spring valley International Vitamin Corporation Freehold公司，Catalog. No：WMT644596，Lot. No:000020, NJ07728 USA），規(guī)格：400I.U./per soft gel。2.2.2試驗動物 8周齡，SPF級SD大鼠，雌雄各半，體重180.0-220.0g。購于北京大學醫(yī)學部實驗動物中心。動物許可證號：SCXK-2009。動物置于12h/12h明暗交替環(huán)境，自由進食。所有動物實驗操作均按北京實驗動物管理條例執(zhí)行。2.2.3動物飼料、墊料 基礎飼料：由昆明醫(yī)學院動物實驗中心

22、提供，配方見表1。表1 基礎飼料配方Tab. 1 Basic feed formula成 分配 比（g/kg）配 比（g/kg）配 比（g/kg）玉米350鹽5麥麩250菜油5豆粕250礦物添加劑1魚粉80復合維生素0.3酵母20蛋氨酸1.3骨粉20賴氨酸0.7乳清粉10魚肝油0.5動物墊料：購于昆明醫(yī)學院實驗動物中心。2.2.4主要試劑: 牛血清白蛋白（Bovine serum albumin）：美國AMRESCO公司產品（目錄：0332。批號：3271C266）；考馬斯蛋白測定試劑盒（Coomassie Bradford Protein Assay Kit, microplate assa

23、ys）：美國熱科皮爾斯生物技術產品（目錄：23200,，批號： NH172158）谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）測定試劑盒（Cat No：A005-1）：南京建成生物工程研究所提供；西門子尿十項干化學檢測試紙：西門子醫(yī)療診斷公司（目錄號：8566001；批號：209044）2.2.5實驗儀器:實驗鼠籠、灌胃器具：蘇杭實驗動物設備廠；80-1/2低速離心機：常州市華普達教學儀器有限公司；80-2電動離心機：常州市普達教學儀器有限公司；HH-6數(shù)顯恒溫水浴鍋：常州市華普達教學儀器有限公司；20µL 微量采血管：安徽赫爾生物醫(yī)學檢驗科技有限公司；XW-80A旋渦混合器：上海精科實業(yè)有限

24、公司；Epppendorf-4910單道微量可調移液器：德國Epppendorf公司；SUNRISE 酶標儀：奧地利 GmbH公司；AU2700全自動生化分析儀：貝克曼庫爾特商貿(中國)有限公司。其他：磨口瓶、秒表、注射器、剪刀、移液管、燒杯、玻璃勻漿器、手術刀等。2.3方法2.3.1 動物實驗原理D-galactose供給過量，超常產生活性氧，打破了受控于遺傳模式的活性氧產生與消除的平衡狀態(tài)，引起試驗小鼠氧化效應后，采用供試樣品進行為期4周的干預，測定試驗小鼠相應的抗氧化指標，評價受試物的抗氧化能力。2.3.2 實驗動物選擇參照中華人民共和國衛(wèi)生部2003年頒布的保健食品檢驗與評價技術規(guī)范和

25、國際公認動物模型，根據(jù)所評價的功能性實驗動物要求，選擇168只(雌雄各半)外形符合健康標準的SPF級近交系SD大鼠為試驗對象，體重在180g-220g之間。2.3.3 動物飼養(yǎng)管理大鼠同室每籠4只，雌雄分籠飼養(yǎng)。動物飼養(yǎng)條件為室溫：22±2，濕度：45-60%，12小時明暗交替。籠具、墊料應舒適、衛(wèi)生、無毒和安全。每2天換一次墊料，飲水瓶定期換水消毒，飼養(yǎng)房間定時用白醋或消毒劑消毒，房間定時通風，使其保持一個良好的飼養(yǎng)環(huán)境。2.3.4 過氧化模型的建立 試驗大鼠適應性喂養(yǎng)1周后，隨機挑選12只（6只雌性，6只雄性）試驗大鼠為陰性對照組。其余156只大鼠，每天按照每100g大鼠體重，皮

26、下注射10% 0.1ml的D-半乳糖（D-galactose，100mg/kg.bw）溶液，連續(xù)6周；陰性對照組給予等容量的生理鹽水。第6周末，留取新鮮尿液，用西門子尿十項干化學檢測試紙，對新鮮尿液中的蛋白、紅細胞進行初步快速檢測。以評價D-Glactose導致的腎組織的氧化應激損傷程度（以腎組織作為評價心、肝、腦等內臟損傷的標志物-biomarker）。選取造模成功的大鼠，即血清MDA水平較正常對照大鼠顯著增高，蛋白尿陽性（+以上），鏡下血尿陽性（+以上）的大鼠，隨機分組進行下一步試驗。2.3.5 實驗動物分組及劑量確定造模成功的試驗大鼠隨機分為陽性（D-Glactose模型）對照組、藥物組

27、，50%乙醇洗脫物（低、中、高劑量）組，30%乙醇洗脫物（低、中、高劑量）組，10%乙醇洗脫物（低、中、高劑量）組，加上為陰性（正常）對照組共12組，每組12只（雌雄各半）。普洱茶黃酮類提取物低、中、高劑量按照人體推薦量折算為大鼠灌胃量的5倍，10倍,20倍，即為20 mg/kg.bw、40 mg/kg.bw、80 mg/kg.bw；對于藥物對照組的大鼠，每日灌喂Vitamin E水溶液（混懸液），依據(jù)人的臨床劑量，按照國際通用的換算方式（human equivalent dose），換算為大鼠的試驗劑量為：41.3I.U./kg。如表2所示：表2 實驗大鼠分組和劑量設計Tab 2 Exper

28、imental group and feed composition實驗組別實驗動物數(shù)量（只）飼料組成普洱茶灌胃劑量（mg/kg.bw）藥物組灌胃劑量（I.U./kg.bw）陰性（正常）對照組D-Galactose vs Vehicle12基礎飼料蒸餾水-陽性（D-半乳糖模型）對照組D-Glactose12基礎飼料蒸餾水-藥物干預組Vitamin E12基礎飼料-41.350%乙醇洗脫物低劑量干預組50%-Low Vs D-alactose12基礎飼料20-50%乙醇洗脫物中劑量干預組50%-Medium Vs D-alactose12基礎飼料40-50%乙醇洗脫物高劑量干預組50%-High

29、 Vs D-alactose12基礎飼料80-30%乙醇洗脫物低劑量干預組30%-Low Vs D-alactose12基礎飼料20-30%乙醇洗脫物中劑量干預組30%-Medium Vs D-alactose12基礎飼料40-30%乙醇洗脫物高劑量干預組30%-High Vs D-alactose12基礎飼料80-10%乙醇洗脫物低劑量干預組10%-Low Vs D-alactose12基礎飼料20-10%乙醇洗脫物中劑量干預組10%-Medium Vs D-alactose12基礎飼料40-10%乙醇洗脫物高劑量干預組10%-High Vs D-alactose12基礎飼料80-2.3.6

30、 給藥方法及時間根據(jù)每組實驗動物的平均體重，將制備的受試樣品分別按設計劑量，每日定時經(jīng)口灌胃，除陰性對照組和模型組每天灌胃等體積的蒸餾水外，其他各組將不同濃度的普洱茶黃酮提取物溶于水中，按照每100g體重大鼠，灌喂1.0ml的比例進行灌胃，連續(xù)灌喂28天，結束后即犧牲大鼠。2.3.7 生長指標檢測 實驗周期28/天，每日觀察大鼠活動情況及皮毛狀況，每周稱量體重根據(jù)體重每周調整灌胃劑量，并記錄攝食量。2.3.8 普洱茶對過氧化實驗大鼠心、肝、腎和腦組織中GSH-Px活性影響的檢測喂養(yǎng)28天后，12h禁食不禁水，犧牲大鼠，摘取心臟、肝臟腎臟和腦組織，并制備10%組織勻漿，步驟如下： （1）取各組織

31、1g，在冰冷的生理鹽水中漂洗，除去血液，濾紙吸干后放于小燒杯中。用移液管取預冷的勻漿介質（0.86%的生理鹽水）6ml于燒杯中，用剪刀將組織剪碎，并將小燒杯置于冰面上操作。（2）將剪碎的組織倒入研缽中，用移液管吸取3ml生理鹽水沖洗殘留在燒杯上的組織，一起倒入玻璃勻漿器中，左手持勻漿管將下端插入冰水混合物的器皿中，右手將搗桿垂直插入套管中，上下轉動數(shù)十次（6-8min），充分研碎，使組織勻漿化。（3）將制備好的10%的勻漿分裝于兩個10ml的離心管中，2500r/min離心15分鐘，離心好以后取上清液分裝于1.5ml的離心管中，并放于-20條件下儲存待測。用于測定其GSH-Px活性，測定方法均

32、按照說明書進行操作。2.4 數(shù)據(jù)處理 數(shù)據(jù)顯示為均值±標準差（Mean±S.D.），不同組別的比較采用one way ANOVA with T-test統(tǒng)計學檢驗, 統(tǒng)計學檢驗采用Microsoft excel 軟件完成。3 結果與分析3.1普洱茶黃酮類提取物對D-galactose誘導氧化應激大鼠心肌中谷胱甘肽超氧化物歧化酶（GSH-Px）活性的影響 圖1. 普洱茶提取物對D-galactose誘導氧化應激模型大鼠心肌組織GSH-Px活性影響注：圖柱代表均數(shù)±標準差，下表均同。圖1顯示，與正常對照組(Vehicle group)相比，D-galactose誘導氧

33、化應激模型組大鼠心肌GSH-Px活性顯著降低（P0.001）。藥物對照組（Vitamin E）與模型組比較，心肌GSH-Px活性顯著升高（P0.001）。與模型組比較，50%乙醇洗脫物的中劑量（Medium dose，40mg/kg/day ) 和高劑量組（High dose，80mg/kg/day）大鼠心肌中GSH-Px的活性均顯著增加（P0.05-0.001）；30%和10%乙醇洗脫物的高劑量組（High dose，80mg/kg/day）心肌中GSH-Px的活性均顯著增加（P0.01），并具有劑量-效應關系。3.2 普洱茶黃酮類提取物對D-galactose誘導氧化應激大鼠肝組織中谷胱甘

34、肽超氧化物歧化酶（GSH-Px）活性的影響圖2. 普洱茶黃酮類提取物對D-galactose誘導氧化應激模型大鼠肝肌組織GSH-Px活性的影響圖2顯示，與正常對照組(Vehicle group)相比，D-galactose誘導氧化應激模型組大鼠肝組織GSH-Px活性顯著降低（P0.001 )。藥物對照組（Vitamin E）與模型組比較，肝組織GSH-Px活性顯著升高（P0.001 )。與模型組比較，50%和乙醇洗脫物中劑量（Medium dose，40mg/kg/day ) 和高劑量（High dose，80mg/kg/day）大鼠肝組織的GSH-Px活性顯著增加（P0.01-0.001）；

35、30%乙醇洗脫物各劑量組大鼠肝組織的GSH-Px活性均顯著增加（P0.001），并具有劑量-效應關系。3.3 普洱茶黃酮類提取物對D-galactose誘導氧化應激大鼠腦組織中谷胱甘肽超氧化物歧化酶（GSH-Px）活性的影響圖3. 普洱茶提取物對D-galactose誘導氧化應激模型大鼠腦組織GSH-Px活性影響圖3顯示，與正常對照組(Vehicle group)相比，D-galactose誘導氧化應激模型組大鼠腦組織GSH-Px活性顯著降低（P0.001）。藥物對照組（Vitamin E）與模型組比較，腦GSH-Px活性顯著升高（P0.001）。與模型組比較，50%，30%和10%乙醇洗脫物

36、高劑量（High dose，80mg/kg/day）大鼠腦組織的GSH-Px活性均顯著增加（P0.001），并具有劑量-效應關系。3.4普洱茶黃酮類提取物對D-galactose誘導氧化應激大鼠腎組織中谷胱甘肽超氧化物歧化酶（GSH-Px）活性的影響圖4. 普洱茶提取物對D-galactose誘導氧化應激模型大鼠腎組織GSH-PX活性影響圖4顯示，與正常對照組(Vehicle group)相比，D-galactose誘導氧化應激模型組大鼠腎組織GSH-PX活性顯著降低（P0.001）。藥物對照組（Vitamin E）與模型組比較，腎GSH-PX活性顯著升高（P0.001）。與模型組比較，50%

37、乙醇洗脫物中劑量（Medium dose，40mg/kg/day ) 和高劑量（High dose，80mg/kg/day）大鼠腎組織的GSH-Px活性顯著增加（P0.001）；30%乙醇洗脫物高劑量（High dose，80mg/kg/day）普大鼠腎組織的GSH-PX活性顯著增加（P0.001）；10%乙醇洗脫物中劑量（Medium dose，40mg/kg/day ) 和高劑量（High dose，80mg/kg/day）大鼠腎組織的GSH-PX活性顯著增加（P0.05-0.01），并具有劑量-效應關系。4.討論衰老是人類生命過程中無法避免的自然規(guī)律，自由基學說是近年來對衰老機制研究中極

38、為活躍的領域，該理論由Harman D15提出,已得到醫(yī)學界的普遍認同。機體的主要器官（心、肝、腦和腎）組織出現(xiàn)衰老現(xiàn)都會伴隨有自由基含量的增加。GSH-Px可以抑制和阻斷自由基反應，降低自由基產物丙二醛（MDA）的生成。SOD則能與GSH-Px產生協(xié)同作用，促使自由基迅速清除。因此，體內GSH-Px、SOD的活性反應了機體清除自由基的能力，是評價抗衰老藥物的重要指標之一。而MDA是動物體內脂質過氧化反應的終產物，其含量能客觀反應機體組織細胞的過氧化程度和自由基的產生情況。本試驗結果顯示，灌胃普洱黃酮類物質50%、30%、10%的乙醇洗脫物的高劑量組和中劑量組，動物主要器官（心、肝、腦和腎）組

39、織中谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）的活性均顯著增加（P0.01）；低劑量組谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）的活性增加不顯著。普洱茶黃酮類物質的乙醇洗脫物的濃度越高，GSH-Px的活性越強。說明不同濃度的乙醇洗脫所得到的普洱茶黃酮類物質均具有抗氧化作用，并具有良好的劑量-效應關系，其作用機制還有待進一步研究。5結論普洱茶黃酮類提取物50%，30%和10%的乙醇洗脫物均具有增加D-galactose誘導氧化應激模型大鼠主要臟器（心，肝、腦與腎）組織中GSH-Px活性的作用，并具有劑量-效應關系，且三種物質的作用相當，揭示普洱茶黃酮類物質具有良好的抗氧化作用。參考文獻1 方祥, 李斌, 陳棟,