朗伯-比爾定律的偏離及理論解釋

1、.郎伯-比爾定律為UV-Vis定量的基本公式，適用的前提是：1.入射光為單色平行光，2.吸收發(fā)生在均勻介質(zhì)中，3.吸收物質(zhì)及溶劑互不作用。干擾因素包括：雜散光或復(fù)合光引起的負偏移，非平行光引起的正偏移，化學(xué)因素引起的偏移等。另外該定律推導(dǎo)時未考慮反射分數(shù)的影響，因此在濃溶液及混濁液中也有偏離。雜散光引起的誤差：雜散光對吸光度的測定引起負偏移，且在吸光度愈大時愈明顯。另外，對儀器輸出的邊緣波長來說 ,單色器的透射率、光源光強和接收器的靈敏度都是比較低的 ,這時雜散光影響就更為明顯 ,所以在紫外分光光度計中 ,首先應(yīng)該檢查 200220 nm處的雜散光。由于雜散光強度在邊緣波段較大 ,因此在波長小

2、于 220 nm進行紫外分光光度 ,測定時 ,常出現(xiàn)一種假峰 ,其原因 ,主要是樣品隨波長變短而吸收增大 ,可是由于雜散光在短波時急劇增大 ,因而使原來逐漸增大的吸收反而變小 ,就會出現(xiàn)不應(yīng)有的“假峰”。雜散光產(chǎn)生的原因：雜散光有兩種 ,一種是雜散光的波長與測量波長相同,它是由于測量波長因種種原因偏離正常光路 ,在不通過樣品的情況下,就直接射到光電接收器上。引起這種雜光的原因是由于光學(xué)、機械零件包括樣品本身的反射和散射所引起。這種雜散光可以通過一個對測定波長不透明的樣品來檢查。當(dāng)發(fā)現(xiàn)放在試樣池中的不透明樣品的透光率不為零時 ,說明儀器中有上述雜光存在。但當(dāng)光度存在零位誤差時 ,可能令造成混淆

3、,如果在不透明的樣品上涂上白色 ,則可增強樣品本身反射和散射的效果 ,以提高測量靈敏度。第二種雜散光是由光學(xué)系統(tǒng)中的缺陷所引起 ,如不必要的反射面、光束孔徑不匹配、灰塵的散射、光學(xué)表面的擦痕、光學(xué)系統(tǒng)的象差、不均勻色散等都會降低光線的單色性 ,使雜光增加。儀器光源系統(tǒng)設(shè)計不良、機械零部件加工不良、位置錯移、儀器內(nèi)壁防眩黑漆脫落等等也是造成雜散光的原因。通常所指的雜散光是上述的第二種。使用過程中減小雜散光的方法：(1 )因光學(xué)零件表面沾污、積塵而使雜散光增大 ,則可用清潔的軟毛刷或吹氣球除去積塵 ,或經(jīng)脫脂的軟布和純凈的溶劑 (如乙醚 :酒精 =2 :1的混合液 ) ,小心地擦試光學(xué)零件 (不包

4、括反光鏡 )表面。(2 )如果是由于光學(xué)零部件 (如棱鏡、通光窗口等 )表面潮解發(fā)毛 ,或由于反射鏡面失澤甚至膜層破壞而使雜散光增大 ,則必須重新拋光或重新鍍膜或者更換光學(xué)零件。(3 )如果光學(xué)零件受震后松動、移位、光束不能準(zhǔn)確行進 (偏離正常光路光束被切割或射到非工作表面等 )。則必須仔細調(diào)節(jié)光源和反射鏡 ,使它們重新回到正常工作位置。為了防止儀器雜散光增大 ,在日常工作中應(yīng)經(jīng)常注意保護儀器 ,特別是防塵和防潮 ,防沾染 ,所以不要輕易打開單色器和光度計部分的封蓋板 ,不能用手直接觸摸光學(xué)零件表面。吸收定律是一個有限的定律最近看到一個帖子，問吸光度指標(biāo)在多少范圍好？簡單地說，吸光度A在0.2

5、1.4范圍內(nèi)和濃度C之間的線性關(guān)系較好。濃度越高誤差越大。原因是多方面的。1.        吸收定律基本性質(zhì)的限制AabC 這是朗伯比耳定律。其中比耳定律部分表示吸光度(A)和濃度(C)之間呈線性關(guān)系。但這只適用于稀溶液時才成立。在高濃度時吸收成分之間的平均距離縮小，臨近質(zhì)點間電荷分布互相受到影響，同時改變了他們對特定輻射的吸收能力。此現(xiàn)象使得AC的線性關(guān)系發(fā)生偏差。濃度越高，偏差越大。此外，定律的偏差還與溶液的折射率有關(guān)。溶液的吸光系數(shù)a和折射率有一定的函數(shù)關(guān)系，而折射率是隨濃度變化的。這是偏差造成的另一原因。當(dāng)然，采用適當(dāng)?shù)姆绞?/p>

6、仍可在高濃度時進行定量分析，如差示光度法等。2.        實際條件的偏離吸收定律有四個隱含的假設(shè)。1），光和被測成分之間的相互作用只是光被成分吸收。2），采用“單色光”。3），吸收成分相互無關(guān)，而不論數(shù)量和種類。4），吸光要限于同樣的光程和橫斷面。實際情況并不是這樣，四個假設(shè)均會出現(xiàn)偏差。1).熒光，磷光和散射都會引起不同程度的“非真”吸收。熒光，磷光可以加適當(dāng)?shù)臑V光片濾除。而散射的問題就比較復(fù)雜，不容忽視。2).所有的單色器均不能輸出真正的單色光，只是寬窄不同。所以對吸收的影響也不同。此外，不同的物質(zhì)其吸收峰寬度是不同的。因此儀器的光譜帶寬亦成為分析工作者十分重視的一項指標(biāo)。3).不同組分的物質(zhì)同時出現(xiàn)在被測溶液中的情況是十分普遍的。當(dāng)濃度增大時往往產(chǎn)生某些附加效應(yīng)，如凝聚，聚合，水解等，從而影響物質(zhì)的吸光效應(yīng)。4).光程的不一致性是引起吸光度偏差的另一原因。多數(shù)儀器通過樣品池的光是不平行的。而為了得到足夠光強，光束必須有一定孔徑角。計算證明，入射孔徑角為10度時，即會產(chǎn)生0.3%的吸收誤差。此外，池壁的平行度，光潔度，光的內(nèi)反射，干涉等都可能引起不同程度的吸光度偏離。3.測試過程中產(chǎn)生誤差采用分光光度法進行定量分析的過程中，均可能產(chǎn)生化學(xué)的誤差，儀器的誤差以及人為的誤差。有經(jīng)驗的分析工作者都會采取相應(yīng)的措