電刺激迷走神經(jīng)對缺血再灌注影響0規(guī)范課件

1、電刺激迷走神經(jīng)對缺血再灌注影響0規(guī)范指導(dǎo)老師：黃齡瑾指導(dǎo)老師：黃齡瑾 組組 員：胡雪瑩員：胡雪瑩 陳藝萍陳藝萍 劉少野劉少野 周俊成周俊成 第一頁，共十三頁。電刺激迷走神經(jīng)對缺血再灌注影響0規(guī)范目的目的: 觀察迷走神經(jīng)電刺激對大鼠腸缺血再灌注觀察迷走神經(jīng)電刺激對大鼠腸缺血再灌注( I/R)后血壓的影響。后血壓的影響。方法方法: 2只雄性大白鼠隨機(jī)分為只雄性大白鼠隨機(jī)分為2組組: ( 1)A鼠組鼠組:暴露腹腔后夾閉腸系暴露腹腔后夾閉腸系膜上動脈膜上動脈( SMA) 1 h，開放再灌注，開放再灌注2 h; (2)B鼠組鼠組: 在夾閉前及再灌注在夾閉前及再灌注開始開始(kish)均以均以5 V、2

2、ms和和1 Hz強(qiáng)度的電能持續(xù)刺激左頸部迷走神強(qiáng)度的電能持續(xù)刺激左頸部迷走神經(jīng)遠(yuǎn)端經(jīng)遠(yuǎn)端20 min;頸動脈插管監(jiān)測平均動脈壓頸動脈插管監(jiān)測平均動脈壓(MAP) 。結(jié)果結(jié)果: 各組大鼠各組大鼠MAP在缺血期基本保持平穩(wěn)。而在再灌注期，在缺血期基本保持平穩(wěn)。而在再灌注期， B鼠的鼠的MAP隨時間延長明顯高于隨時間延長明顯高于A鼠。鼠。結(jié)論結(jié)論: 電刺激迷走神經(jīng)能能改善電刺激迷走神經(jīng)能能改善A鼠腸再灌注期的循環(huán)血壓。鼠腸再灌注期的循環(huán)血壓。 第二頁，共十三頁。電刺激迷走神經(jīng)對缺血再灌注影響0規(guī)范 腸缺血再灌注腸缺血再灌注( intestinal ischemia - reperfusion( in

3、testinal ischemia - reperfusion，I/R)I/R)損傷是外損傷是外科臨床中常見的器官損傷之一，科臨床中常見的器官損傷之一， I/RI/R不僅可引起消化道局部組織的結(jié)構(gòu)和功不僅可引起消化道局部組織的結(jié)構(gòu)和功能的損害，而且因腸粘膜屏障功能的損害可引發(fā)腸道菌群移位能的損害，而且因腸粘膜屏障功能的損害可引發(fā)腸道菌群移位(y wi)(y wi)和內(nèi)毒和內(nèi)毒素血癥，產(chǎn)生全身炎性反應(yīng)綜合征，還可能對其它臟器造成繼發(fā)性損傷，甚素血癥，產(chǎn)生全身炎性反應(yīng)綜合征，還可能對其它臟器造成繼發(fā)性損傷，甚至多器官功能衰竭，導(dǎo)致并發(fā)癥和死亡率增加至多器官功能衰竭，導(dǎo)致并發(fā)癥和死亡率增加 1 1

4、。然而，在臨床上對。然而，在臨床上對I/RI/R損傷目前仍無有效的防治手段，因而進(jìn)一步展開對其機(jī)制及防治的研究損傷目前仍無有效的防治手段，因而進(jìn)一步展開對其機(jī)制及防治的研究無疑是具有臨床意義。近年來實驗研究表明，通過傳出迷走神經(jīng)電刺激而釋無疑是具有臨床意義。近年來實驗研究表明，通過傳出迷走神經(jīng)電刺激而釋放乙酰膽堿放乙酰膽堿( acetylcholine( acetylcholine， ACh)ACh)并特異性結(jié)合于組織巨噬細(xì)胞表面的并特異性結(jié)合于組織巨噬細(xì)胞表面的77亞基煙堿受體，抑制致炎性細(xì)胞因子釋放，亞基煙堿受體，抑制致炎性細(xì)胞因子釋放， 具有保護(hù)臟器功能，具有保護(hù)臟器功能， 維持維持內(nèi)環(huán)

5、境穩(wěn)定作用內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定作用 2 2 。但迷走神經(jīng)電刺激對。但迷走神經(jīng)電刺激對I/RI/R后腸粘膜損傷是否也有影后腸粘膜損傷是否也有影響未見研究報道。本實驗擬對此進(jìn)行驗證。響未見研究報道。本實驗擬對此進(jìn)行驗證。 第三頁，共十三頁。電刺激迷走神經(jīng)對缺血再灌注影響0規(guī)范1.試劑與儀器試劑與儀器 1%1%戊巴比妥鈉，肝素鈉注射液，戊巴比妥鈉，肝素鈉注射液， 生理鹽水，大白鼠手術(shù)臺，大生理鹽水，大白鼠手術(shù)臺，大白鼠器械，大鼠氣管插管，麻醉白鼠器械，大鼠氣管插管，麻醉(mzu)(mzu)用藥注射器（用藥注射器（5ml5ml），），BL-420BL-420生生物機(jī)能實驗系統(tǒng)（簡稱物機(jī)能實驗系統(tǒng)（簡稱BLBL系

6、統(tǒng)），壓力換能器，紗布，線，動脈插管，系統(tǒng)），壓力換能器，紗布，線，動脈插管，動脈夾。動脈夾。第四頁，共十三頁。電刺激迷走神經(jīng)對缺血再灌注影響0規(guī)范2.動物模型的建立動物模型的建立 清潔及健康的雄性大鼠清潔及健康的雄性大鼠2 2只，體重只，體重250350g250350g，手術(shù)前禁食，手術(shù)前禁食12h12h，自由飲水。腹，自由飲水。腹腔注射腔注射1%1%戊巴比妥鈉戊巴比妥鈉(0.5ml/100mg)(0.5ml/100mg)麻醉后，行氣管切開插管以保持自主呼吸通麻醉后，行氣管切開插管以保持自主呼吸通暢。鈍性分離雙側(cè)頸總動脈和迷走神經(jīng)，用絲線靠頭端結(jié)扎左側(cè)迷走神經(jīng)，遠(yuǎn)端暢。鈍性分離雙側(cè)頸總動脈和

7、迷走神經(jīng)，用絲線靠頭端結(jié)扎左側(cè)迷走神經(jīng)，遠(yuǎn)端與雙鉑電極連接與雙鉑電極連接; ;右側(cè)頸總動脈置管，連接壓力傳感器。雙鉑電極導(dǎo)線、壓力傳右側(cè)頸總動脈置管，連接壓力傳感器。雙鉑電極導(dǎo)線、壓力傳感器導(dǎo)線連接于感器導(dǎo)線連接于BLBL系統(tǒng)，連續(xù)監(jiān)測平均動脈壓并提供持續(xù)電刺激迷走神經(jīng)。盡量系統(tǒng)，連續(xù)監(jiān)測平均動脈壓并提供持續(xù)電刺激迷走神經(jīng)。盡量(jnling)(jnling)按無菌操作開腹，分離暴露腸系膜上動脈，自腹主動脈分出的根部用無按無菌操作開腹，分離暴露腸系膜上動脈，自腹主動脈分出的根部用無損傷小動脈夾夾閉之，避免鉗夾腸系膜上靜脈。缺血損傷小動脈夾夾閉之，避免鉗夾腸系膜上靜脈。缺血1h1h后重新打開腹腔

8、，去除動后重新打開腹腔，去除動脈夾再灌注脈夾再灌注2 h2 h。第五頁，共十三頁。電刺激迷走神經(jīng)對缺血再灌注影響0規(guī)范3.動物分組動物分組 上述大鼠隨機(jī)分為上述大鼠隨機(jī)分為2 2組組:A:A鼠組鼠組: :夾閉夾閉SMA 1 hSMA 1 h后松夾再灌注后松夾再灌注(gunzh)(gunzh)2 h2 h，不刺激迷走，不刺激迷走神經(jīng)神經(jīng); ;迷走神經(jīng)刺激迷走神經(jīng)刺激B B鼠組鼠組: :在夾閉前及再灌注在夾閉前及再灌注(gunzh)(gunzh)開始均以開始均以5 V5 V、2 ms2 ms和和1 Hz1 Hz強(qiáng)度的強(qiáng)度的電能持續(xù)刺激左側(cè)迷走神經(jīng)遠(yuǎn)端電能持續(xù)刺激左側(cè)迷走神經(jīng)遠(yuǎn)端20 min20 m

9、in。第六頁，共十三頁。電刺激迷走神經(jīng)對缺血再灌注影響0規(guī)范4.動脈血壓監(jiān)測動脈血壓監(jiān)測 記錄時點(diǎn)記錄時點(diǎn): : 迷走神經(jīng)刺激前迷走神經(jīng)刺激前( (基礎(chǔ)值基礎(chǔ)值T0) T0) 、夾閉夾閉0 min 0 min ( T1 ) ( T1 ) 、夾閉夾閉30 min ( T2 ) 30 min ( T2 ) 、再灌注再灌注0 min ( T3) 0 min ( T3) 、再灌注再灌注30 min ( T4) 30 min ( T4) 、再灌注再灌注60 min(T5) 60 min(T5) 、再灌注再灌注90 min ( T6 ) 90 min ( T6 ) 、再灌注再灌注120 min(T7) 1

10、20 min(T7) 。每次記錄監(jiān)測波形持續(xù)。每次記錄監(jiān)測波形持續(xù)30 s30 s，取其平均，取其平均(pngjn)(pngjn)值作為該時點(diǎn)的測量值。動脈血壓以平均值作為該時點(diǎn)的測量值。動脈血壓以平均(pngjn)(pngjn)動脈壓動脈壓(MAP)(MAP)表示。表示。第七頁，共十三頁。電刺激迷走神經(jīng)對缺血再灌注影響0規(guī)范1.一般情況一般情況 各組大鼠體重及實驗室溫度均無顯著差異各組大鼠體重及實驗室溫度均無顯著差異 。術(shù)中均存活，麻醉效果滿意。術(shù)中均存活，麻醉效果滿意。2.MAP的變化的變化 各組大鼠各組大鼠MAPMAP在缺血期基本保持平穩(wěn)。而在再灌注期在缺血期基本保持平穩(wěn)。而在再灌注期(

11、T3 - T7) (T3 - T7) ，A A鼠的鼠的MAPMAP隨時間延長而隨時間延長而明顯下降，明顯下降， 與與B B鼠同時點(diǎn)相比有顯著差異鼠同時點(diǎn)相比有顯著差異; A; A鼠不能改善鼠不能改善MAPMAP。 表表1 各組大白鼠腸缺血再灌注不同各組大白鼠腸缺血再灌注不同(b tn)時期時期MAP的變化的變化(mmHg)組T0T1T2T3T4T5T6T7A7643.358.7843.7643.0945.8433.6620.11B797977.1174.1174.5268.7952.0338.15第八頁，共十三頁。電刺激迷走神經(jīng)對缺血再灌注影響0規(guī)范 本研究通過阻斷腸系膜上動脈本研究通過阻斷腸

12、系膜上動脈 1 h1 h再灌注再灌注2 h2 h復(fù)制了復(fù)制了I/RI/R腸損傷模型，表明，腸損傷模型，表明，A A鼠組的病鼠組的病變程度最重，顯著高于變程度最重，顯著高于B B鼠組。提示迷走神經(jīng)電刺激預(yù)處理能在一定程度上減輕鼠組。提示迷走神經(jīng)電刺激預(yù)處理能在一定程度上減輕I/RI/R后腸組織后腸組織病理變化。同時本實驗也表明，與病理變化。同時本實驗也表明，與A A鼠組相比，鼠組相比， VNSVNS能明顯改善再灌注期能明顯改善再灌注期MAPMAP下降趨勢，防止下降趨勢，防止(fngzh)(fngzh)低血壓發(fā)生。目前對低血壓發(fā)生。目前對VNSVNS這種保護(hù)作用的機(jī)制還不是太清楚，可能與迷走神經(jīng)興

13、奮這種保護(hù)作用的機(jī)制還不是太清楚，可能與迷走神經(jīng)興奮后釋放的后釋放的AChACh作用有關(guān)作用有關(guān) 2 2， 4 - 6 4 - 6 。 小腸粘膜對缺血非常敏感，在遭受小腸粘膜對缺血非常敏感，在遭受30 min30 min缺血后，發(fā)生脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，缺缺血后，發(fā)生脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，缺血血- - 再灌注損傷時氧自由基生成，對細(xì)胞膜產(chǎn)生損傷。迷走神經(jīng)電刺激預(yù)處理能再灌注損傷時氧自由基生成，對細(xì)胞膜產(chǎn)生損傷。迷走神經(jīng)電刺激預(yù)處理能明顯降低明顯降低I/RI/R后血漿后血漿MDAMDA含量，這提示迷走神經(jīng)電刺激能一定程度上減少含量，這提示迷走神經(jīng)電刺激能一定程度上減少M(fèi)DAMDA的生成，的生成，具有抗氧化應(yīng)

14、激損傷作用，這與石德光等具有抗氧化應(yīng)激損傷作用，這與石德光等 7 7報道的電刺激迷走神經(jīng)減少內(nèi)毒素報道的電刺激迷走神經(jīng)減少內(nèi)毒素血癥動物肺血癥動物肺MDAMDA生成的研究結(jié)果有相似之處。生成的研究結(jié)果有相似之處。第九頁，共十三頁。電刺激迷走神經(jīng)對缺血再灌注影響0規(guī)范 TNF TNF具有多種生物學(xué)效應(yīng)，是啟動和加速各種炎性連鎖反應(yīng)的關(guān)鍵具有多種生物學(xué)效應(yīng)，是啟動和加速各種炎性連鎖反應(yīng)的關(guān)鍵(gunjin)(gunjin)因子因子 8 8 。在在I/RI/R損傷中，損傷中， TNFTNF通過刺激使自身和其它致炎性介質(zhì)合成增加，使免疫反應(yīng)被放大通過刺激使自身和其它致炎性介質(zhì)合成增加，使免疫反應(yīng)被放大

15、; ;另外，另外， TNFTNF作為致炎細(xì)胞因子可致白細(xì)胞的趨化、聚積并釋放化學(xué)物質(zhì)引起組織損傷作為致炎細(xì)胞因子可致白細(xì)胞的趨化、聚積并釋放化學(xué)物質(zhì)引起組織損傷 9 9 。文獻(xiàn)。文獻(xiàn)報道迷走神經(jīng)電刺激能降低內(nèi)毒素血癥、嚴(yán)重低血量失血性休克、主動脈鉗夾缺血再灌注大鼠報道迷走神經(jīng)電刺激能降低內(nèi)毒素血癥、嚴(yán)重低血量失血性休克、主動脈鉗夾缺血再灌注大鼠血漿血漿TNFTNF的研究結(jié)果的研究結(jié)果 4 - 6 4 - 6， 7 7 。另外，必須強(qiáng)調(diào)的是組織與血漿中的。另外，必須強(qiáng)調(diào)的是組織與血漿中的TNFTNF濃度變化并濃度變化并不完全一致，血中不完全一致，血中TNFTNF濃度不能完全反映不同組織濃度不能完

16、全反映不同組織TNFTNF的含量，而組織中的水平似乎更具有的含量，而組織中的水平似乎更具有臨床和生物學(xué)意義臨床和生物學(xué)意義 10 10 。 綜上所述，大鼠腸缺血綜上所述，大鼠腸缺血1 h1 h后再灌注后再灌注2 h2 h導(dǎo)致腸粘膜結(jié)構(gòu)明顯損傷，電刺激迷走神經(jīng)能顯著減輕導(dǎo)致腸粘膜結(jié)構(gòu)明顯損傷，電刺激迷走神經(jīng)能顯著減輕I/RI/R腸粘膜結(jié)構(gòu)的病理改變并使再灌注期的循環(huán)血壓得到一定改善，其保護(hù)效應(yīng)可能與減少脂質(zhì)過氧腸粘膜結(jié)構(gòu)的病理改變并使再灌注期的循環(huán)血壓得到一定改善，其保護(hù)效應(yīng)可能與減少脂質(zhì)過氧化、下調(diào)化、下調(diào)TNFTNF生成有關(guān)，其確切機(jī)制有待進(jìn)一步研究。生成有關(guān)，其確切機(jī)制有待進(jìn)一步研究。第十

17、頁，共十三頁。電刺激迷走神經(jīng)對缺血再灌注影響0規(guī)范 1 Swank GM， Deitch EA. Role of the gut in multip le organ failure: bacterial translocation and permeability changes J . World J Surg， 1996， 20 (4) : 411 - 417. 2 Pavlov VA， Wang H， Czura CJ， etal. The cholinergicanti - inflammatory pathway: a missing link in neuroimmu nomod

18、ulation J . Mol Med， 2003， 9 ( 5 - 8 ) : 125 -134. 3 Chiu CJ， McArdle AH， Brown R， etal. Intestinal mucosal lesion in low - flow states. I. A morphological， hemodynamic，and metabolic reapp raisal J . Arch Surg，1970， 101 (4) : 478 - 483. 4 Borovikova LV， Ivanova S， ZhangM，etal. Vagus nervestimulation

19、 attenuates the systemic inflammatory responseto endotoxin J . Nature， 2000， 405 (6785) : 458 - 462. 5 Bernik TR， Friedman SG， OchaniM， etal. Cholinergicantiinflammatory pathway inhibition of tumor necrosis factor during ischemia reperfusion J . J Vasc Surg， 2002，36 (6) : 1231 - 1236.第十一頁，共十三頁。電刺激迷走神經(jīng)對缺血再灌注影響0規(guī)范 6 Guarini S， Altavilla D， CainazzoMM， etal. Efferent vagal fibre stimulation blunts nuclear factor - kappaB activation and p rotects against hypovolemic hemorrhagic shock 7 石德光，胡森，姜小國，等石德光，胡森，姜小國，等. .迷走神經(jīng)興奮對內(nèi)毒