泡桐叢枝病植原體保存體系建立技術規(guī)程

1、泡桐叢枝病植原體保存體系建立技術規(guī) 程 編制說明1、任務來源泡桐叢枝病植原體保存體系建立技術規(guī)程 ，由河南省 質量技術監(jiān)督局 下達 2016 年第二批河南省地方標準制修訂 計劃的通知（豫質監(jiān)標發(fā) 2016 122 號文），列入 2016 年 第二批河南省地方標準制修訂計劃，計劃項目序號是110 。2、工作簡況泡桐叢枝病植原體保存體系建立技術規(guī)程 ，委托單位： 河南省林業(yè)廳科技處， 承擔單位： 河南農業(yè)大學， 河南省林業(yè) 科學研究院。 主要起草人： 范國強、 翟曉巧、 趙振利、 鄧敏捷、 董焱鵬、曹喜兵、李永生；參加起草人：馬向陽、張變莉、馬 永亮、趙利新、牛蘇燕、劉玟杉。范國強全面負責技術規(guī)程

2、任 務的落實及關鍵技術問題的解決， 翟曉巧和趙振利負責技術規(guī) 程的泡桐叢枝病植原體的培養(yǎng)和規(guī)程的撰寫。 鄧敏捷、董焱鵬、 曹喜兵、 李永生負責泡桐叢枝病植原體的鑒定。 馬向陽、 張變 莉、馬永亮、 趙利新主要參與泡桐叢枝病植原體的培養(yǎng)。 牛蘇 燕、劉玟杉主要參與泡桐叢枝病植原體的保存工作。 主要實施 地點：河南農業(yè)大學泡桐研究所。泡桐是我國重要的速生用材樹種之一， 在改善我國生態(tài)環(huán) 境和提高人民生活水平等方面具有重要的作用。 然而， 由植原 體感染引起的泡桐叢枝病 ,能導致泡桐幼樹過早死亡，大樹生 長緩慢、 蓄積量降低。 目前該病幾乎發(fā)生在我國所有的泡桐栽 培區(qū)。據報道， 由于泡桐叢枝病的危害

3、， 每年造成的直接經濟 損失超過億元。 該病害不僅造成了巨大經濟損失， 而且也嚴重 影響人們種植泡桐的積極性。自土居養(yǎng)二（ 1967 ）發(fā)現(xiàn)泡桐叢枝病的病原菌 植原體 以來，國內外科技工作者雖然對泡桐叢枝病發(fā)病的機制及防治 方法進行了大量的研究工作， 并初步明確了引起該病病原菌的 傳播方式、發(fā)生途徑和發(fā)病過程中的生理生化變化及防治方 法，但由于泡桐植原體無法體外培養(yǎng)， 嚴重制約了泡桐叢枝病 的研究。 克服植原體不能體外培養(yǎng)的研究瓶頸， 打破常規(guī)， 創(chuàng) 新思路， 另辟蹊徑才有可能有實效的推動泡桐叢枝病研究。河南農業(yè)大學泡桐研究團隊自 1994 年以來一直致力于泡桐叢枝 病的研究。在研究中發(fā)現(xiàn)由于

4、大田里患叢枝病泡桐樹體高大且 生長狀態(tài)一致性差， 在患病機制和藥物防治研究中帶來很多不 變，影響實驗的開展。 在探索研究中發(fā)現(xiàn)建立泡桐叢枝病植株 的無菌快速培養(yǎng)體系， 通過植原體檢測， 確保培養(yǎng)的是含有泡 桐叢枝病植原體的組織培養(yǎng)苗。 利用培養(yǎng)生長狀態(tài)一致的泡桐 叢枝病組織培養(yǎng)苗開展各種研究， 取得的成效顯著， 研究成果 曾獲得 2010 年國家科技進步二等獎。 隨著現(xiàn)代分子技術的進 一步發(fā)展，在泡桐 miRNA 、LncRNA 、CircRNA 、蛋白質和次 生代謝物，并對相關基因進行了克隆及功能驗證中也正在發(fā)揮 重要的作用。植原體病害已經在 1000 多種植物上被發(fā)現(xiàn)，將 泡桐叢枝病植原體

5、保存技術進行規(guī)范話總結， 為泡桐叢枝病研 究和其他植原體病害研究都具有指導意義。3、編制原則本標準是根據我省泡桐叢枝病生產上發(fā)生嚴重和開展泡桐 叢枝病研究的實際需要制定的。 其規(guī)范了泡桐叢枝病保存過程 中的技術操作， 在叢枝病植原體研究中具有很強的規(guī)范指導和 借鑒意義，有利于推動危害我省的植原體病害在抗病機理和防 治藥物方面的進一步深入研究。 本標準僅就泡桐植原體保存過 程中培養(yǎng)技術和鑒定技術提出了規(guī)定。 標準適用于河南省泡桐 叢枝病植原體的保存和研究。4、標準的主要內容本標準制定了泡桐叢枝病植原體苗組培快繁技術的術語和 定義、 泡桐叢枝病植原體的培養(yǎng)、 鑒定、 保存和檔案管理等內 容。包括泡

6、桐叢枝病苗芽的誘導、根的誘導，繼代培養(yǎng)，植原 體的鑒定和檔案管理。泡桐叢枝病植原體的培養(yǎng)中芽的誘導與根的誘導程序是泡 桐研究團隊經過反復篩選和驗證建立的高效組織培養(yǎng)繁殖體 系，經過近十年的應用， 該方法在泡桐叢枝病研究中發(fā)揮了重 要的作用。研究成果發(fā)表在多家國內外研究期刊上。泡桐叢枝病苗植原體的鑒定采用的 16S rRNA 巢式 PCR 檢測檢測，該方法是當前泡桐叢枝病植原體檢測最常用的方法，運用該方法開展的研究成果，得到國內外同行的認可。 泡桐叢枝病植原體的保存中泡桐叢枝病植原體苗的繼代培養(yǎng) 和鑒定方法也是經過多年反復驗證的，結果穩(wěn)定。5、采用國內、國際標準情況目前泡桐叢枝病植原體保存還沒有明確的國際和國內標 準。在泡桐植原體鑒定中采用了國內外植原體研究中鑒定方 法。6、與有關現(xiàn)行法律、法規(guī)和強制性國家標準、行業(yè)標準的關 系本標準符合現(xiàn)行國家法律、法規(guī)之規(guī)定。目前還沒有強制 性國家標準和行業(yè)標準。7、重大分歧意