臨檢血液概述采血抗凝劑概要課件

1、臨床檢驗(yàn)臨床檢驗(yàn)(jinyn)基礎(chǔ)基礎(chǔ)第一頁(yè)，共六十一頁(yè)。臨床檢驗(yàn)基礎(chǔ)是采用各種臨床檢驗(yàn)基礎(chǔ)是采用各種( zhn)實(shí)驗(yàn)室檢查方法和實(shí)驗(yàn)室檢查方法和技術(shù)，對(duì)來(lái)自機(jī)體的血液、尿液、糞便以及分泌技術(shù)，對(duì)來(lái)自機(jī)體的血液、尿液、糞便以及分泌物和排泄物等標(biāo)本進(jìn)行一般性狀觀察，理學(xué)、化物和排泄物等標(biāo)本進(jìn)行一般性狀觀察，理學(xué)、化學(xué)、免疫學(xué)、病原學(xué)和顯微鏡等檢查，為疾病篩學(xué)、免疫學(xué)、病原學(xué)和顯微鏡等檢查，為疾病篩查和診斷提供簡(jiǎn)便、快速的檢測(cè)結(jié)果。查和診斷提供簡(jiǎn)便、快速的檢測(cè)結(jié)果。第二頁(yè)，共六十一頁(yè)。第一節(jié)概述第一節(jié)概述(i sh)血液血液生理生理(shngl)概要概要 標(biāo)本采集、送檢、保存標(biāo)本采集、送檢、保存(

2、bocn)與與處理處理 標(biāo)本抗凝標(biāo)本抗凝 血涂片的制備血涂片的制備血細(xì)胞染色方法血細(xì)胞染色方法血細(xì)胞顯微鏡計(jì)數(shù)法血細(xì)胞顯微鏡計(jì)數(shù)法第三頁(yè)，共六十一頁(yè)。教學(xué)教學(xué)(jio xu)目標(biāo)目標(biāo)掌握：掌握：血液標(biāo)本采集的方法及評(píng)價(jià)，抗凝劑的選擇應(yīng)用血液標(biāo)本采集的方法及評(píng)價(jià)，抗凝劑的選擇應(yīng)用(yngyng)，血涂片制備方法和染色原理，血涂片制備方法和染色原理，血細(xì)胞顯微，血細(xì)胞顯微鏡計(jì)數(shù)方法鏡計(jì)數(shù)方法。 熟悉：熟悉：血液血液生理生理概述和概述和標(biāo)本保存標(biāo)本保存。第四頁(yè)，共六十一頁(yè)。一一 血液血液(xuy)生理概要生理概要1.血液的組成血液的組成血漿：血液加抗凝劑后分離出來(lái)的液體血漿：血液加抗凝劑后分離出來(lái)的

3、液體(yt)部分。部分。血清：血液離休后自然凝固分離出來(lái)的液體。血清：血液離休后自然凝固分離出來(lái)的液體。45%血塵55%89%9192%第五頁(yè)，共六十一頁(yè)。2.血液的理化性質(zhì)血液的理化性質(zhì)血量：正常人血液量血量：正常人血液量7010ml/kg體重，成人體重，成人45L，占體重的占體重的6%8%。顏色顏色(yns)：動(dòng)脈血鮮紅色：動(dòng)脈血鮮紅色 HbO2 靜脈血暗紅色靜脈血暗紅色 Hbred 貧血病人貧血病人 紅色變淺紅色變淺 CO、氰化物中毒、氰化物中毒 櫻紅色櫻紅色紅細(xì)胞懸浮穩(wěn)定性紅細(xì)胞懸浮穩(wěn)定性 唾液酸根形成唾液酸根形成Zeta電位電位 第六頁(yè)，共六十一頁(yè)。黏滯性黏滯性 血細(xì)胞比容血細(xì)胞比容

4、 （紅細(xì)胞數(shù)量）（紅細(xì)胞數(shù)量） 血漿粘度血漿粘度 （血漿蛋白濃度）（血漿蛋白濃度） 比密比密 血液比密與紅細(xì)胞相關(guān)血液比密與紅細(xì)胞相關(guān)(xinggun) 男男1.0551.063 女女1.0511.060 血漿比密與血漿蛋白相關(guān)血漿比密與血漿蛋白相關(guān) 1.0251.030滲透壓滲透壓 血漿滲透壓血漿滲透壓 290310mOsm/（kgH2O）PH 7.357.45凝固性凝固性 凝血因子激活凝血因子激活 第七頁(yè)，共六十一頁(yè)。3.血液的功能血液的功能 運(yùn)輸功能運(yùn)輸功能 協(xié)調(diào)協(xié)調(diào)(xitio)功能功能 維持內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定維持內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定 防御功能防御功能第八頁(yè)，共六十一頁(yè)。二、血標(biāo)本二、血標(biāo)本(bio

5、bn)的采集的采集、送檢、保存與處理送檢、保存與處理（一）血標(biāo)本（一）血標(biāo)本(biobn)的采集的采集采血采血靜脈靜脈(jngmi)采采血血毛細(xì)血管采血毛細(xì)血管采血 普通采血法普通采血法真空采血法真空采血法第九頁(yè)，共六十一頁(yè)。 靜靜 脈脈 采采 血血 法法 (venipuncture for blood collection)凡需血量較多的檢查凡需血量較多的檢查(jinch)0.5ml如：如：ESR、Hct、凝血因子的測(cè)定等、凝血因子的測(cè)定等。部位部位 淺表靜脈淺表靜脈(jngmi)均可均可,常用肘部靜脈，不明顯時(shí)可用常用肘部靜脈，不明顯時(shí)可用手背、踝部，手背、踝部， 幼兒可用頸外靜脈。幼兒可

6、用頸外靜脈。體位體位 坐位或臥位坐位或臥位捆扎時(shí)間捆扎時(shí)間 1min第十頁(yè)，共六十一頁(yè)。第十一頁(yè)，共六十一頁(yè)。二、靜脈二、靜脈(jngmi)采血法采血法 【采血方法】【采血方法】 準(zhǔn)備準(zhǔn)備選擇靜脈選擇靜脈消毒消毒扎壓脈帶扎壓脈帶穿刺穿刺(chunc)、松壓脈帶松壓脈帶抽血抽血拔針止血拔針止血注入試管。注入試管。 如以下視頻所示如以下視頻所示第十二頁(yè)，共六十一頁(yè)。靜脈靜脈(jngmi)采血法采血法第十三頁(yè)，共六十一頁(yè)。普通普通(ptng)采血法采血法1.避免溶血避免溶血,器具干燥器具干燥,避免氣泡避免氣泡2.先拔針頭先拔針頭,再緩緩再緩緩(hun hun)注入試管注入試管3.與抗凝劑混勻時(shí)輕輕顛

7、倒與抗凝劑混勻時(shí)輕輕顛倒4.嚴(yán)格消毒嚴(yán)格消毒5.抽血時(shí)只能外抽不能內(nèi)推抽血時(shí)只能外抽不能內(nèi)推第十四頁(yè)，共六十一頁(yè)。真空采血法（真空采血法（40年代年代(nindi)，美國(guó)，美國(guó)BD公司）公司）套筒式和頭皮靜脈式兩種套筒式和頭皮靜脈式兩種優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)： 血樣無(wú)需容器之間的轉(zhuǎn)移，減少溶血現(xiàn)象，保持血樣無(wú)需容器之間的轉(zhuǎn)移，減少溶血現(xiàn)象，保持 血液標(biāo)本的完整性，使檢驗(yàn)血液標(biāo)本的完整性，使檢驗(yàn)(jinyn)結(jié)果更加準(zhǔn)確，也有結(jié)果更加準(zhǔn)確，也有 利于防止醫(yī)院內(nèi)血源性傳染病的交叉感染和環(huán)境利于防止醫(yī)院內(nèi)血源性傳染病的交叉感染和環(huán)境 保護(hù)。保護(hù)。缺點(diǎn)：缺點(diǎn)： 真空采血管價(jià)格較高真空采血管價(jià)格較高注意注意: 采血

8、后采血后,先拔下刺塞針端的采血試管先拔下刺塞針端的采血試管,后拔穿刺針。后拔穿刺針。第十五頁(yè)，共六十一頁(yè)。 I.采血針采血針2008-10-21第十六頁(yè)，共六十一頁(yè)。 II.持針器持針器2008-10-212008-10-21第十七頁(yè)，共六十一頁(yè)。 III.真空真空(zhnkng)采血管采血管2008-10-21第十八頁(yè)，共六十一頁(yè)。第十九頁(yè)，共六十一頁(yè)。 血量量0.1ml的檢驗(yàn)項(xiàng)目：的檢驗(yàn)項(xiàng)目：RBC計(jì)數(shù)計(jì)數(shù)(j sh)、WBC計(jì)數(shù)計(jì)數(shù)(j sh)、 BPC計(jì)數(shù)、計(jì)數(shù)、Hb測(cè)定等測(cè)定等 毛細(xì)血管毛細(xì)血管(mo x xu un)采血法采血法Skin puncture for blood col

9、lection第二十頁(yè)，共六十一頁(yè)。采血部位WHO推薦采取推薦采取毛細(xì)血管毛細(xì)血管(mo x xu un)血以左手中指或無(wú)名指指血以左手中指或無(wú)名指指尖內(nèi)側(cè)尖內(nèi)側(cè)為宜為宜1手指采血：手指采血： 優(yōu)點(diǎn)：方便優(yōu)點(diǎn)：方便獲較多血量獲較多血量檢查結(jié)果比較恒定檢查結(jié)果比較恒定 缺點(diǎn)：與靜脈血仍在某些差異。缺點(diǎn)：與靜脈血仍在某些差異。2耳垂采血：耳垂采血： 優(yōu)點(diǎn)：痛感輕優(yōu)點(diǎn)：痛感輕 方便方便 適用于反復(fù)采集適用于反復(fù)采集 缺點(diǎn)：血循環(huán)差缺點(diǎn)：血循環(huán)差受氣溫影響大檢查結(jié)果不恒定受氣溫影響大檢查結(jié)果不恒定 RBC、WBC、Hb、Hct結(jié)果均比靜脈血高，特別是冬季。結(jié)果均比靜脈血高，特別是冬季。第二十一頁(yè)，共六

10、十一頁(yè)。3、其他部位：、其他部位： 拇指拇指(mzh)、拇趾或足、拇趾或足底外側(cè)緣底外側(cè)緣采血采血 半歲以下嬰幼兒半歲以下嬰幼兒 皮膚完整處皮膚完整處 嚴(yán)重?zé)齻邍?yán)重?zé)齻?采血針采血針 三棱針或?qū)Ｓ萌忉樆驅(qū)Ｓ?zhunyng)的的“采血針采血針”為好，使用前者應(yīng)高壓滅菌，為好，使用前者應(yīng)高壓滅菌， 一人一針一人一針。第二十二頁(yè)，共六十一頁(yè)。2008-10-21第二十三頁(yè)，共六十一頁(yè)。第二十四頁(yè)，共六十一頁(yè)。注意事項(xiàng)1、采血部位皮膚完整。、采血部位皮膚完整。2、無(wú)菌技術(shù)操作：防采血部位感染，、無(wú)菌技術(shù)操作：防采血部位感染， 一人一針?lè)栏窝住滩?。一人一針?lè)栏窝住滩　?、采血針刺入皮膚應(yīng)

11、深淺適中、采血針刺入皮膚應(yīng)深淺適中(shzhng)。4、多項(xiàng)檢查時(shí)，采血次序?yàn)椋骸⒍囗?xiàng)檢查時(shí)，采血次序?yàn)椋築PC計(jì)數(shù)計(jì)數(shù)RBC計(jì)數(shù)、計(jì)數(shù)、Hb測(cè)測(cè) 定定WBC計(jì)數(shù)與分類。計(jì)數(shù)與分類。5、取血用于自動(dòng)化血細(xì)胞分析儀，要防止棉球纖維混入、取血用于自動(dòng)化血細(xì)胞分析儀，要防止棉球纖維混入 堵塞儀器。堵塞儀器。第二十五頁(yè)，共六十一頁(yè)。兩種采血方法兩種采血方法(fngf)的優(yōu)缺點(diǎn)比較的優(yōu)缺點(diǎn)比較毛細(xì)血管毛細(xì)血管(mo x xu un)采血采血靜脈靜脈(jngmi)采血采血缺點(diǎn)缺點(diǎn)限制了重復(fù)實(shí)驗(yàn)和追限制了重復(fù)實(shí)驗(yàn)和追加實(shí)驗(yàn)，標(biāo)本量少，加實(shí)驗(yàn)，標(biāo)本量少，局部炎癥可得假結(jié)果局部炎癥可得假結(jié)果，組織液可混入，組織

12、液可混入不同抗凝劑的使用，不同抗凝劑的使用，改變血液性質(zhì)，影響改變血液性質(zhì)，影響有形成分的形態(tài)有形成分的形態(tài)優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)價(jià)廉、快速、操作簡(jiǎn)價(jià)廉、快速、操作簡(jiǎn)便，標(biāo)本可直接測(cè)定便，標(biāo)本可直接測(cè)定標(biāo)本代表性大，無(wú)組標(biāo)本代表性大，無(wú)組織液影響，適于臨床織液影響，適于臨床研究，可重復(fù)實(shí)驗(yàn)和研究，可重復(fù)實(shí)驗(yàn)和追加其他實(shí)驗(yàn)追加其他實(shí)驗(yàn)第二十六頁(yè)，共六十一頁(yè)。 1.1.血標(biāo)本運(yùn)輸血標(biāo)本運(yùn)輸(ynsh)(ynsh)2.2.血標(biāo)本保存血標(biāo)本保存3.3.檢驗(yàn)后標(biāo)本處理檢驗(yàn)后標(biāo)本處理 （二）（二）血液標(biāo)本運(yùn)輸、保存血液標(biāo)本運(yùn)輸、保存(bocn)與處理與處理第二十七頁(yè)，共六十一頁(yè)。 三、血標(biāo)本三、血標(biāo)本(biobn)的抗

13、凝的抗凝 1、枸櫞酸鈉（檸檬酸鈉）、枸櫞酸鈉（檸檬酸鈉） a. 抗凝原理抗凝原理(yunl)：螯合鈣離：螯合鈣離子子使用方法使用方法 配成配成 109 mmol/L的濃度的濃度(nngd)和血液和血液1：9 配成配成 105 mmol/L的濃度和血液的濃度和血液1：4 化學(xué)名：3-羥基-3-羧基戊二酸（三鈉鹽）c. 適用范圍：止血學(xué)檢驗(yàn)、血沉、輸血保養(yǎng)液（毒性?。┻m用范圍：止血學(xué)檢驗(yàn)、血沉、輸血保養(yǎng)液（毒性?。ヾ. 不適用于：血細(xì)胞計(jì)數(shù)不適用于：血細(xì)胞計(jì)數(shù) 第二十八頁(yè)，共六十一頁(yè)。2. 乙二胺四乙酸（乙二胺四乙酸（EDTA）鹽）鹽a. 抗凝原理抗凝原理(yunl)： 螯合鈣離子螯合鈣離子b.

14、使用方法使用方法(fngf)： 15g/L濃度濃度EDTA 和血液和血液 1：10適用范圍：適用范圍： 對(duì)血細(xì)胞形態(tài)影響小對(duì)血細(xì)胞形態(tài)影響小,適合適合(shh)血常規(guī)檢查、血常規(guī)檢查、 Hct不適用于：影響血小板聚集和不適用于：影響血小板聚集和凝血因子凝血因子功能功能, 不宜凝血不宜凝血因子因子檢查和血小板功能試驗(yàn)。檢查和血小板功能試驗(yàn)。 第二十九頁(yè)，共六十一頁(yè)。3. 肝素肝素 （含硫酸基團(tuán)的粘多糖）（含硫酸基團(tuán)的粘多糖）抗凝原理：低濃度時(shí)抑制因子抗凝原理：低濃度時(shí)抑制因子a、和和PF3之之 間的作用，加強(qiáng)抗凝血酶間的作用，加強(qiáng)抗凝血酶滅活絲滅活絲 氨酸蛋白酶，從而阻止凝血酶形成，氨酸蛋白酶，

15、從而阻止凝血酶形成， 還能抑制凝血酶的自我催化及抑制還能抑制凝血酶的自我催化及抑制 因子因子的作用；高濃度時(shí)阻斷凝血的作用；高濃度時(shí)阻斷凝血 酶和纖維蛋白的反應(yīng)。酶和纖維蛋白的反應(yīng)。 b. 適用方法：適用方法： 1g/L濃度的肝素鈉與血液濃度的肝素鈉與血液 1：10第三十頁(yè)，共六十一頁(yè)。優(yōu)點(diǎn)：抗凝能力強(qiáng)、不影響血細(xì)胞體積、不易優(yōu)點(diǎn)：抗凝能力強(qiáng)、不影響血細(xì)胞體積、不易 溶血、能耐高溫。溶血、能耐高溫。適用范圍：紅細(xì)胞檢驗(yàn)（紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白適用范圍：紅細(xì)胞檢驗(yàn)（紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白 測(cè)定、紅細(xì)胞比積）和多種生化分析測(cè)定、紅細(xì)胞比積）和多種生化分析 e. 不適用于：不適用于： WBC和和BPC計(jì)

16、數(shù)、血涂片檢查、計(jì)數(shù)、血涂片檢查、 凝血凝血功能功能檢驗(yàn)。檢驗(yàn)。第三十一頁(yè)，共六十一頁(yè)。4. 草酸鈉（乙二酸的鈉鹽）草酸鈉（乙二酸的鈉鹽）a. 抗凝原理抗凝原理(yunl)：草酸鈣沉淀：草酸鈣沉淀b. 使用方法使用方法(fngf)： 草酸鈉草酸鈉 0.1mol/L 和血液和血液1：9c. 適用范圍：適用范圍： 止血止血(zh xu)學(xué)檢驗(yàn)學(xué)檢驗(yàn) 。d. 不適用于：對(duì)凝血因子不適用于：對(duì)凝血因子V保護(hù)功能差，保護(hù)功能差， 影響影響PT測(cè)定；沉淀物影響測(cè)定；沉淀物影響 自動(dòng)凝血儀的使用自動(dòng)凝血儀的使用。第三十二頁(yè)，共六十一頁(yè)。5. 雙草酸鹽抗凝劑雙草酸鹽抗凝劑 a. 抗凝原理：抗凝原理： 草酸鈣沉

17、淀草酸鈣沉淀使用方法：使用方法： 草酸鉀草酸鉀0.8g , 草酸銨草酸銨1.2g（100ml） 與血液與血液 1：10 （80C以下烘干）以下烘干）適用范圍：適用范圍： 紅細(xì)胞檢驗(yàn)（紅細(xì)胞比積、計(jì)數(shù)）紅細(xì)胞檢驗(yàn)（紅細(xì)胞比積、計(jì)數(shù)） d. 不適于不適于: 血小板計(jì)數(shù)和白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)血小板計(jì)數(shù)和白細(xì)胞分類計(jì)數(shù), 電解質(zhì)測(cè)定電解質(zhì)測(cè)定第三十三頁(yè)，共六十一頁(yè)。 物理方法抗凝物理方法抗凝 脫纖維蛋白：脫纖維蛋白： 將血液注入將血液注入(zh r)有玻璃珠的器皿中，轉(zhuǎn)動(dòng)，有玻璃珠的器皿中，轉(zhuǎn)動(dòng)， 纖維蛋白纏繞凝固于玻璃球，纖維蛋白纏繞凝固于玻璃球，使血液使血液 不能凝固不能凝固。適用于免疫學(xué)檢驗(yàn)和紅斑。適

18、用于免疫學(xué)檢驗(yàn)和紅斑 性狼瘡細(xì)胞檢查。性狼瘡細(xì)胞檢查。第三十四頁(yè)，共六十一頁(yè)。小結(jié)小結(jié)(xioji) 血液是由血細(xì)胞和血漿組成的紅色、粘稠、不透明、帶血液是由血細(xì)胞和血漿組成的紅色、粘稠、不透明、帶腥味的混懸液。凡需血液量較少的檢驗(yàn)項(xiàng)目，常用皮膚采血腥味的混懸液。凡需血液量較少的檢驗(yàn)項(xiàng)目，常用皮膚采血法，通常采手指血。采血時(shí)要注意采血部位要無(wú)病變，要擦法，通常采手指血。采血時(shí)要注意采血部位要無(wú)病變，要擦去第一滴血去第一滴血(d xu)，不能用力擠壓。凡需血液量較多的檢驗(yàn)項(xiàng)，不能用力擠壓。凡需血液量較多的檢驗(yàn)項(xiàng)目，要用靜脈采血法，其采血部位常用肘前靜脈。如需要抗目，要用靜脈采血法，其采血部位常用

19、肘前靜脈。如需要抗凝抗凝血標(biāo)本時(shí)，則需要根據(jù)檢驗(yàn)項(xiàng)目的要求，采用枸櫞酸凝抗凝血標(biāo)本時(shí)，則需要根據(jù)檢驗(yàn)項(xiàng)目的要求，采用枸櫞酸鈉、乙二胺四乙酸鹽和肝素等抗凝劑來(lái)阻止血液凝固。鈉、乙二胺四乙酸鹽和肝素等抗凝劑來(lái)阻止血液凝固。第三十五頁(yè)，共六十一頁(yè)。第三十六頁(yè)，共六十一頁(yè)。請(qǐng)您練習(xí)請(qǐng)您練習(xí)(linx)答案答案(d n)(d n): :皮膚皮膚(p f)(p f)采血法用注意什么問(wèn)題采血法用注意什么問(wèn)題? ?所選擇采血部位的皮膚應(yīng)完好。嚴(yán)格消毒皮膚，防所選擇采血部位的皮膚應(yīng)完好。嚴(yán)格消毒皮膚，防止采血部位感染。皮膚消毒后，待乙醇揮發(fā)干后再刺止采血部位感染。皮膚消毒后，待乙醇揮發(fā)干后再刺針。如血流不暢，切

20、不可用力擠壓勉強(qiáng)采血，而應(yīng)重針。如血流不暢，切不可用力擠壓勉強(qiáng)采血，而應(yīng)重新針刺。出血不止時(shí)，可用消毒干棉球壓迫至血不再新針刺。出血不止時(shí)，可用消毒干棉球壓迫至血不再流出為止，必要時(shí)應(yīng)在報(bào)告單上注明，提醒臨床醫(yī)生注流出為止，必要時(shí)應(yīng)在報(bào)告單上注明，提醒臨床醫(yī)生注意。進(jìn)行多項(xiàng)細(xì)胞檢查要分項(xiàng)采血時(shí)，采血的次序?yàn)椋阂?。進(jìn)行多項(xiàng)細(xì)胞檢查要分項(xiàng)采血時(shí)，采血的次序?yàn)椋貉“逵?jì)數(shù)、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、白細(xì)胞計(jì)數(shù)。血小板計(jì)數(shù)、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、白細(xì)胞計(jì)數(shù)。第三十七頁(yè)，共六十一頁(yè)。請(qǐng)您練習(xí)請(qǐng)您練習(xí)(linx)請(qǐng)說(shuō)出靜脈請(qǐng)說(shuō)出靜脈(jngmi)采血的步驟？采血的步驟？答案答案(d (d n)n): :準(zhǔn)備準(zhǔn)備選擇靜脈選擇靜脈消

21、毒消毒 扎壓脈帶扎壓脈帶穿刺、松壓脈帶穿刺、松壓脈帶抽血抽血 拔針止血拔針止血注入試管。注入試管。第三十八頁(yè)，共六十一頁(yè)。請(qǐng)您練習(xí)請(qǐng)您練習(xí)(linx)答案答案(d n)(d n): :請(qǐng)說(shuō)出枸櫞酸鈉的抗凝原理請(qǐng)說(shuō)出枸櫞酸鈉的抗凝原理(yunl)、用途及其用量？、用途及其用量？枸櫞酸鈉能與血液中的鈣離子形成可溶性的螯合物，枸櫞酸鈉能與血液中的鈣離子形成可溶性的螯合物，使使CaCa2+2+失去凝血作用，從而阻止血液凝固。失去凝血作用，從而阻止血液凝固。主要用于血主要用于血沉、凝血象和血小板功能檢查。凝血象檢查常用沉、凝血象和血小板功能檢查。凝血象檢查常用0.109mol/L0.109mol/L的水

22、溶液，與血液之比通常為的水溶液，與血液之比通常為1 1：9 9。魏。魏氏法血沉測(cè)定用濃度為氏法血沉測(cè)定用濃度為0.105mol/L0.105mol/L，與血液比例為，與血液比例為1:41:4（V V：V V）。）。第三十九頁(yè)，共六十一頁(yè)。請(qǐng)您練習(xí)請(qǐng)您練習(xí)(linx)請(qǐng)將下列抗凝方法和適宜的項(xiàng)目請(qǐng)將下列抗凝方法和適宜的項(xiàng)目(xingm)用線連接用線連接起來(lái)。起來(lái)。 枸櫞酸鈉枸櫞酸鈉 血細(xì)胞比容測(cè)定血細(xì)胞比容測(cè)定乙二胺四乙酸鹽乙二胺四乙酸鹽 紅斑狼瘡細(xì)胞的檢驗(yàn)紅斑狼瘡細(xì)胞的檢驗(yàn) 肝素肝素 凝血象凝血象 脫纖維法脫纖維法 一般血液學(xué)檢查一般血液學(xué)檢查第四十頁(yè)，共六十一頁(yè)。教學(xué)教學(xué)(jio xu)目標(biāo)

23、目標(biāo)1.敘述敘述(xsh)載玻片的清潔方法、血涂片的制備方法及載玻片的清潔方法、血涂片的制備方法及合格血片的標(biāo)準(zhǔn)。合格血片的標(biāo)準(zhǔn)。2.闡述瑞氏染色的原理、染液成分、染色方法、注意闡述瑞氏染色的原理、染液成分、染色方法、注意事項(xiàng)和染色結(jié)果的判斷。事項(xiàng)和染色結(jié)果的判斷。3.知道吉姆薩染色法和混合染色法。知道吉姆薩染色法和混合染色法。第四十一頁(yè)，共六十一頁(yè)。良好良好(lingho)血涂片的標(biāo)準(zhǔn)血涂片的標(biāo)準(zhǔn)厚薄適宜, 頭體尾分明， 細(xì)胞分布均勻,血膜邊緣整齊兩側(cè)(lin c)兩端留有空隙 良好血涂片尾體頭第四十二頁(yè)，共六十一頁(yè)。四四 血涂片血涂片(t pin)的制備的制備血涂片染色顯微鏡檢查用途：細(xì)胞

24、形態(tài)檢查，細(xì)胞血涂片染色顯微鏡檢查用途：細(xì)胞形態(tài)檢查，細(xì)胞 數(shù)量評(píng)估，數(shù)量評(píng)估，網(wǎng)織紅、異常細(xì)胞、寄生蟲(chóng)檢驗(yàn)。網(wǎng)織紅、異常細(xì)胞、寄生蟲(chóng)檢驗(yàn)。血膜過(guò)厚：細(xì)胞重疊縮小血膜過(guò)厚：細(xì)胞重疊縮小血膜過(guò)?。杭?xì)胞分布血膜過(guò)?。杭?xì)胞分布(fnb)不勻，白細(xì)胞多集中于邊緣不勻，白細(xì)胞多集中于邊緣第四十三頁(yè)，共六十一頁(yè)。1.玻片清潔玻片清潔(qngji)： a 新玻片處理：新玻片處理：用鹽酸浸泡用鹽酸浸泡24小時(shí)小時(shí)。 b 用過(guò)玻片處理：用過(guò)玻片處理：用洗滌劑清洗。用洗滌劑清洗。 c 使用中玻片處理：只能持玻片邊緣，使用中玻片處理：只能持玻片邊緣， 保持清潔、干燥、保持清潔、干燥、 中性、無(wú)油膩。中性、無(wú)油膩。第

25、四十四頁(yè)，共六十一頁(yè)。操操 作作推片載玻片 25-30 30-45 推玻片載玻片制備(zhbi)過(guò)程：第四十五頁(yè)，共六十一頁(yè)。角度角度(jiod)大大 角度大 速度快 血膜厚血滴過(guò)大,血膜過(guò)厚造成造成(zo chn)血膜厚的原因示意圖血膜厚的原因示意圖第四十六頁(yè)，共六十一頁(yè)。造成造成(zo chn)血膜薄的原因示意圖血膜薄的原因示意圖角度角度(jiod)小小血滴小 血膜薄角度小 速度慢 血膜薄 25第四十七頁(yè)，共六十一頁(yè)。 血膜分布不均：主要血膜分布不均：主要(zhyo)(zhyo)由于以下原因所致由于以下原因所致: : 推片用力不均,血膜成厚薄相間的梯形玻片不清潔 有油跡 血膜出現(xiàn)空泡區(qū)推片

26、邊緣不齊血膜出現(xiàn)線條樣缺損第四十八頁(yè)，共六十一頁(yè)。堿性染料：為陽(yáng)離子染料，能接受質(zhì)子堿性染料：為陽(yáng)離子染料，能接受質(zhì)子(zhz)，染細(xì)胞核，染細(xì)胞核 的染料。如亞甲藍(lán)、天青。的染料。如亞甲藍(lán)、天青。酸性染料：為陰離子染料，能釋放質(zhì)子。主要有熒酸性染料：為陰離子染料，能釋放質(zhì)子。主要有熒 烷烷-氧雜蒽染料和偶氮染料兩類，能結(jié)合氧雜蒽染料和偶氮染料兩類，能結(jié)合 細(xì)胞的堿性成分并染色細(xì)胞的堿性成分并染色(rns)，如血紅蛋白、，如血紅蛋白、 嗜酸性顆粒成分等。嗜酸性顆粒成分等。3. 復(fù)合染料：復(fù)合染料： 同時(shí)同時(shí)(tngsh)具有陰、陽(yáng)離子型的染料如瑞氏染料具有陰、陽(yáng)離子型的染料如瑞氏染料（一）染料

27、（一）染料 （天然染料和人工染料）（天然染料和人工染料） 發(fā)色基團(tuán)和助色基團(tuán)使生物學(xué)染色劑產(chǎn)生顏色和被染發(fā)色基團(tuán)和助色基團(tuán)使生物學(xué)染色劑產(chǎn)生顏色和被染 組織親合。組織親合。五 細(xì)胞常用的染色方法第四十九頁(yè)，共六十一頁(yè)。（二）細(xì)胞（二）細(xì)胞(xbo)染色原理：染色原理：1. 物理作用：物理作用：毛細(xì)管現(xiàn)象、滲透、吸收毛細(xì)管現(xiàn)象、滲透、吸收(xshu)、吸附作用等、吸附作用等化學(xué)作用：化學(xué)作用： a. 染料的化學(xué)成分：染料的化學(xué)成分： 助色基團(tuán)的存在，堿性染料在溶媒中為陽(yáng)離子型，易與助色基團(tuán)的存在，堿性染料在溶媒中為陽(yáng)離子型，易與組織和細(xì)胞內(nèi)帶負(fù)電荷的酸性物質(zhì)結(jié)合組織和細(xì)胞內(nèi)帶負(fù)電荷的酸性物質(zhì)結(jié)合

28、(jih)；而酸性染料在；而酸性染料在溶媒中為陰離子型，與帶正電荷的堿性物質(zhì)結(jié)合。溶媒中為陰離子型，與帶正電荷的堿性物質(zhì)結(jié)合。第五十頁(yè)，共六十一頁(yè)。 瑞氏染色法瑞氏染色法（一）染色原理（一）染色原理 分兩相進(jìn)行，第一相是酸性伊紅與細(xì)胞中的堿性物質(zhì)如分兩相進(jìn)行，第一相是酸性伊紅與細(xì)胞中的堿性物質(zhì)如血紅蛋白、嗜酸性顆粒結(jié)合；堿性血紅蛋白、嗜酸性顆粒結(jié)合；堿性亞甲藍(lán)亞甲藍(lán)與細(xì)胞中的酸性與細(xì)胞中的酸性物質(zhì)如核染色質(zhì)、物質(zhì)如核染色質(zhì)、嗜堿嗜堿性顆粒、血小板結(jié)合。第二相是性顆粒、血小板結(jié)合。第二相是亞甲亞甲藍(lán)藍(lán)和伊紅結(jié)合在適宜條件下形成紫色的和伊紅結(jié)合在適宜條件下形成紫色的亞甲藍(lán)亞甲藍(lán)-伊紅復(fù)合物，伊紅復(fù)

29、合物，結(jié)果結(jié)果(ji gu)使白細(xì)胞核染色質(zhì)成紫色（瘧原蟲(chóng)的染色質(zhì)成使白細(xì)胞核染色質(zhì)成紫色（瘧原蟲(chóng)的染色質(zhì)成紅色），中性粒細(xì)胞的顆粒及血小板顆粒區(qū)成紫色。紅色），中性粒細(xì)胞的顆粒及血小板顆粒區(qū)成紫色。第五十一頁(yè)，共六十一頁(yè)。 b. 蛋白質(zhì)的化學(xué)性質(zhì)：蛋白質(zhì)的化學(xué)性質(zhì)： 蛋白質(zhì)中的氨基酸含有蛋白質(zhì)中的氨基酸含有(hn yu)不同不同 數(shù)量的氨基（數(shù)量的氨基（-NH2）和）和 羧基（羧基（-COOH），同時(shí)還有其他活性基團(tuán)。在游離狀態(tài)時(shí)，），同時(shí)還有其他活性基團(tuán)。在游離狀態(tài)時(shí)， -NH2獲得一個(gè)獲得一個(gè)H+變成帶正電的變成帶正電的-NH3+，而，而-COOH失去一個(gè)失去一個(gè)H+變成帶負(fù)電的變成帶負(fù)

30、電的-COO-。分別與不同染料結(jié)合。分別與不同染料結(jié)合。 c. 周?chē)h(huán)境的酸堿度：周?chē)h(huán)境的酸堿度： 如環(huán)境如環(huán)境pHpI（ pI 為等電點(diǎn)），則蛋白質(zhì)帶正電，結(jié)合酸性為等電點(diǎn)），則蛋白質(zhì)帶正電，結(jié)合酸性(sun xn) 染料；反之，染料；反之， pH pI，則結(jié)合堿性染料。，則結(jié)合堿性染料。 PHH增多增多易與伊紅結(jié)合易與伊紅結(jié)合染色偏紅染色偏紅 PHH減少減少易與美藍(lán)結(jié)合易與美藍(lán)結(jié)合偏藍(lán)偏藍(lán)第五十二頁(yè)，共六十一頁(yè)。 （二）試劑（二）試劑(shj) 1. Wright染液染液 瑞氏染粉瑞氏染粉0.1g,甲醇甲醇60.0ml 磷酸鹽緩沖液（磷酸鹽緩沖液（PBS）：）： （PH6.46.8） 磷

31、酸二氫鉀（無(wú)水）磷酸二氫鉀（無(wú)水）0.3g，磷酸氫二鈉（無(wú)水），磷酸氫二鈉（無(wú)水）0.2g, 蒸餾水加到蒸餾水加到1000ml。 配好后用磷酸鹽溶液配好后用磷酸鹽溶液(rngy)校正校正pH，塞緊瓶口備用。，塞緊瓶口備用。第五十三頁(yè)，共六十一頁(yè)。123 3. 染色染色(rns)方法：方法： a. 用蠟筆在血膜兩頭劃線，平放于染色架上。用蠟筆在血膜兩頭劃線，平放于染色架上。 b. 加瑞氏染液覆蓋血膜，固定加瑞氏染液覆蓋血膜，固定1min。 c. 滴加等量或稍多的緩沖液，混勻，染色滴加等量或稍多的緩沖液，混勻，染色5-10 分鐘。分鐘。 d. 用清水沖洗，待干后鏡檢。用清水沖洗，待干后鏡檢。第五十四頁(yè)，共六十一頁(yè)。注意事項(xiàng)：注意事項(xiàng)： a. 血膜要干透后才能染色，否則染色時(shí)易脫落血膜要干透后才能染色，否則染色時(shí)易脫落 b. 染色時(shí)間與染液濃度、室溫及細(xì)胞多少有關(guān)，染色時(shí)間與染液濃度、室溫及細(xì)胞多少有關(guān)， 一般染液淡、染色時(shí)間長(zhǎng)些效果好。一般染液淡、染色時(shí)間長(zhǎng)些效果好。 c. 染液不能過(guò)少，以防蒸發(fā)沉淀。染液不能過(guò)少，以防蒸發(fā)沉淀。 d. 沖洗時(shí)不能先倒掉染液，應(yīng)以流水沖，防染料沖洗時(shí)不能先倒掉染液，應(yīng)以流水沖，防染料(rnlio) 沉著。沖洗時(shí)間也不能長(zhǎng)。沉著。沖洗時(shí)間也不能長(zhǎng)。 e. 染色過(guò)淡，可