百傲基因型檢測芯片試劑盒檢測原理講解學(xué)習(xí)

1、百傲基因型檢測芯片試劑盒檢測原理、尸、 亠前言基因是脫氧核糖核酸（ DNA ）分子中含有特定遺傳信息的一段 核苷酸序列，是遺傳物質(zhì)的最小功能單位。 DNA 結(jié)構(gòu)中的單個(gè)堿基 序列發(fā) 生變異 就構(gòu)成 了單核 苷酸的 多態(tài)性（ Single Nucleotide Polymorphism, SNP）。我們把包括SNP在內(nèi)的不同基因結(jié)構(gòu)稱為不同 的基因型。不同的基因型可以幫助解釋不同的人種、人群、個(gè)體對疾 病易感性的不同 , 以及對藥物的不同反應(yīng)能力等，在對病人的個(gè)性化 治療以及健康人的疾病預(yù)防上具有重大意義！百傲基因型檢測芯片試劑盒就是根據(jù)不同基因的 SNP 信息，利 用先進(jìn)的基因芯片技術(shù)而研制的

2、。檢測原理 基于生物樣本中基因靶序列與固定有基因探針的基因芯片進(jìn)行 特異性雜交，經(jīng)過酶促顯色反應(yīng)，給出待檢基因的 SNP信息的方法。1. 芯片制造原理 ： 百傲公司基因芯片是在醛基修飾后的玻璃基片上制造的。 DNA 探針（寡核苷酸片段，與被檢測的靶 DNA 互補(bǔ)）溶液與點(diǎn)樣緩沖液 以 1：1 比例混合 點(diǎn)樣緩沖液（上海百傲科技有限公司）可大大增加 點(diǎn)樣效果的穩(wěn)定、提高檢測靈敏度 ，通過點(diǎn)樣儀點(diǎn)到醛基基片上， 然后用芯片活化液固定 芯片活化液（上海百傲科技有限公司）可使 醛基修飾載玻片上醛基的活性增強(qiáng)， 提高氨基修飾基因探針的固定效 率 。固定后 DNA 探針將與醛基玻片共價(jià)結(jié)合，形成陣列；完成

3、芯片 制作過程。2. 抽提原理 ： 通過向樣本中加入抽提液，溫浴、離心等操作，使樣品中的細(xì)胞 裂解，釋放出 DNA ；同時(shí)使蛋白變性沉淀，完成樣本 DNA 的抽提。 DNA 提取純化試劑盒（上海百傲科技有限公司） 提取的 DNA 可以直 接用于 PCR 擴(kuò)增，無需酚和氯仿抽提，無需乙醇沉淀，具有時(shí)間短、 操作簡便、無毒無害的特點(diǎn)。3. 擴(kuò)增液制造原理 ：抽提獲得的染色體 DNA 濃度太小，直接進(jìn)行雜交檢測無法獲得 信號。將抽提獲得的染色體DNA作為模板，進(jìn)行PCR擴(kuò)增（同時(shí)對 靶 DNA 進(jìn)行標(biāo)記），擴(kuò)增產(chǎn)物的濃度足夠雜交檢測的需要。PCR 的反應(yīng)過程是將人工合成的兩條寡聚核苷酸引物 （兩條短

4、的 DNA 片段）、聚合酶和靶 DNA 經(jīng)過一系列的升降溫循環(huán)來擴(kuò)增 DNA， 寡聚核苷酸引物雜交到靶 DNA 上，為聚合酶（ Taq 酶）提供了延伸 起始位點(diǎn)，然后在兩個(gè)引物之間復(fù)制合成靶 DNA 序列。一個(gè)循環(huán)產(chǎn) 生兩個(gè)復(fù)制模板， 兩個(gè)循環(huán)產(chǎn)生四個(gè)復(fù)制模板， 依次類推， 30個(gè) PCR 循環(huán)就可以產(chǎn)生 100 萬個(gè)靶序列的復(fù)制模板。 因此只需從樣本中抽提 少量 DNA, 就可以進(jìn)行基因芯片檢測。百傲公司的擴(kuò)增液就是依據(jù) PCR 擴(kuò)增原理制造的。針對各待檢基因序列的 SNP 位點(diǎn)，設(shè)計(jì) 20bp 左右的上、下游引物用于擴(kuò)增靶 DNA ，另外在引物一端連接生物素，用于顯色識別。擴(kuò)增液包含了 上

5、下游引物以及PCR反應(yīng)所需的各種試劑(如dNTP、MgcD、出0、 Buffer等),Taq酶另管提供。將擴(kuò)增液中加Taq酶、抽提好的靶DNA 通過PCR反應(yīng)將靶DNA片段迅速擴(kuò)大，用于雜交和顯色反應(yīng)。4.5. 雜交顯色原理：雜交原理：變性后的 DNA 擴(kuò)增產(chǎn)物與基因芯片上探針進(jìn)行特異性雜 交，就可以知道樣本DNA序列中SNP信息，即到底是屬于野生型還 是突變型，是雜合子還是純合子?；蛐酒s交反應(yīng)是通過靶 DNA 與探針的互補(bǔ)堿基之間形成氫鍵而恢復(fù)成原來的雙螺旋結(jié)構(gòu)原理進(jìn) 行的。在雜交反應(yīng)中，序列組成、靶標(biāo) DNA 分子和探針的長度、雜 交溫度、鹽等均會影響雜交效率和強(qiáng)度。顯色原理：百傲公司

6、采用 Biot in標(biāo)記的堿性磷酸酶(AP)催化的 NBT/BCIP 顯色反應(yīng)的檢測方法。首先，與檢測探針雜交的擴(kuò)增產(chǎn)物 上的Biotin先與鏈親和素堿性磷酸酶復(fù)合物(Stripavitin-AP)反應(yīng)， 生成新的復(fù)合物： Biotin-Stripavitin-AP ，后者發(fā)生如下的顯色反應(yīng)：Bioti n-Stripavit in-AP + BCI-P BCI-OH + Pi (pH 7.5)BCI-OH + NBT 藍(lán)紫色沉淀其中，BCIP為5溴-4氯-3吲哚磷酸；NBT為硝基四氮唑藍(lán)。上海百傲科技有限公司自主研發(fā)的一系列用于雜交和顯色的溶液（包括預(yù)雜交液、雜交緩沖液、洗液1、洗液2、洗液3、抗體液和顯色液）質(zhì)量穩(wěn)定，能有效提高基因芯片雜交反應(yīng)和顯色反應(yīng)，排 除非特異性雜交。6.7.檢測原理：采用CCD （Charge Coupl