細胞染色方法大全

1、Hoechst染色：hoechst可以穿過活細胞膜與細胞核結(jié)合(主要為凋亡活細胞)在紫外光下將核染為藍色.Hoechst染細胞核會影響共聚焦顯微鏡對該樣本其他熒光的觀察效果.hoechst有hoechest33342和hoechst33258兩種hoechsts33258,hoechst33342二者區(qū)別不大，但是hoechst33342對細胞的毒性作用更小一些，所以一般來說hoechsts33258用于細胞固定后再染色，而hoechst33342則可以對活細胞直接進行染色！染色步驟PI(PropidiumIodide碘化丙咤)染色：是一種可對dna染色的細胞核染色試齊|J,常用于細胞凋亡檢測

2、.碘化丙噬(PropidiumIodide,PI)是一種核酸染料(紅色)，它不能透過完整的細胞膜，但凋亡中晚期的細胞和壞死細胞由于細胞膜通透性的增加，PI能夠透過細胞膜而使細胞核染紅.用PI單一染色觀測培養(yǎng)細胞，只能表示細胞的壞死情況，而不是凋亡(當然晚期凋亡PI亦可著色)。但是如果您只是想知道細胞的死亡情況，而不是仔細區(qū)分壞死或凋亡，那么PI單一染色也可以。但是如果您一定要認定細胞的凋亡，那么PI單一染色顯然不夠！annexin-v染色細胞凋亡早期，細胞膜標志發(fā)生改變.其中，磷脂酰絲氨酸(Annexin-V,PS)外翻，Annexin-V在Ca+存在的條件下與其高親和力特異性結(jié)合.這樣,An

3、nexin-v染色陽性,表示細胞處于早期凋亡狀態(tài).Annexin-V結(jié)合不同的熒光抗體，就可以利用流式細胞儀、熒光顯微鏡以及共聚焦激光掃描顯微鏡檢測細胞凋亡的發(fā)生。AnnexinV用FITC標記發(fā)綠色熒光；如果用PE標記就發(fā)紅色熒光。JC-1染色JC-1是一種陽離子染料，可以在線粒體內(nèi)聚集，低濃度時主要以單體(monomer*在，發(fā)射光以綠光(525nm)為主；而在高濃度時則可以形成多聚體(aggregation),發(fā)射光以紅光(-590nm)為主。線粒體本身存在一定的極性(polarization),其外膜為負極，內(nèi)膜為正極。電位差由Ca2+、Na+和中流調(diào)控。當線粒體狀態(tài)良好時對JC-l攝

4、取量少，因而在線粒體內(nèi)主要以單體的形式存在綠光強度/紅光強度的比值較高。在線粒體發(fā)生去極化(depolarization)時，線粒內(nèi)JC-l的濃度較高，多以多聚體的形式存在，綠光強度/紅光強度的比值降低。JC-1染色的綠光強度/紅光強度僅取決于線粒體的膜電勢(membranepotential),而與線粒體的形態(tài)、體積和密度都無關(guān)，因而能更好地反映線粒體的功能狀態(tài)。由于凋亡發(fā)生的早期存在線粒體的去極性，因此，JC-1染色被用于檢測凋亡的早期發(fā)生。其實驗方法如下。JC-l染色非常簡單。首先可將成品JC-1以DMSO配成儲存液(15mg/ml),儲存于-20C,用時以培養(yǎng)液稀釋至10ug/ml終濃

5、度。對貼壁細胞可以直接棄去培養(yǎng)液，漂洗細胞后直接加入染色液，10-30min后在熒光顯微鏡下或者激光共聚焦下觀察。線粒體狀態(tài)好時細胞以綠色為主，當紅光信號增強時，紅綠相疊，以橙色為主。該染色運用于懸浮細胞時還可以通過流式細胞儀進行檢測，收集紅/綠信號強度，計算其強度比。鈣黃綠素-AM（Calcein-AM）:Calcein-AM本身并不是熒光分子，但通過活細胞內(nèi)的酯酶作用，Calcein-AM能脫去AM®,產(chǎn)生的Calcein能發(fā)出強綠色熒光（激發(fā)：490nm,發(fā)射：515nnrj）。因此Calcein-AM僅對活細胞染色細胞活力鑒定臺盼藍染色法原理：細胞損傷或死亡時，臺盼藍可穿透變

6、性的細胞膜，與解體的DNA結(jié)合，使其著色。而活細胞能阻止染料進入細胞內(nèi)。故可以鑒別死細胞與活細胞。用品：1.4%臺盼藍母液：稱取4g臺盼藍，加少量蒸儲水研磨，加雙蒸水至100ml,用濾紙過濾，4度保存。使用時。用PBS稀釋至。2.吸管、血細胞計數(shù)板、顯微鏡步驟：1、制備單細胞懸液。并作適當稀釋（106細胞/ml）2、染色：細胞懸液與%臺盼藍溶液以9:1混合混勻。3、計數(shù)：在三分鐘內(nèi)，用計數(shù)板分別計數(shù)活細胞和死細胞結(jié)果統(tǒng)計：鏡下觀察，死細胞被染成淡藍色，而活細胞拒染。根據(jù)下式求細胞活力：活細胞率（%）=活細胞總數(shù)/（活細胞總數(shù)+死細胞總數(shù)）X100注意事項：臺盼藍染細胞時，時間不宜過長。否則，部

7、分活細胞也會著色，會干擾計數(shù)。臺盼藍染色原理通常認為細胞膜喪失完整性，細胞即可被認為已經(jīng)死亡。臺盼藍（TrypanBlue）是檢測細胞膜完整性最常用的生物染色試劑。健康的正常細胞能夠排斥臺盼藍，而死亡的細胞，膜的完整性喪失，通透性增加，細胞可被臺盼藍染成藍色。依據(jù)此原理，細胞經(jīng)臺盼藍染色后，可通過顯微鏡，直接鏡下計數(shù)或拍照后計數(shù)，實現(xiàn)對細胞存活率比較精確的定量分析。試述臺盼藍染發(fā)鑒別死活細胞的原理，試分析染色時間過長本來是活細胞也被染色的原因死細胞的細胞膜無屏障作用，臺盼藍馬上進入細胞而顯藍色?；罴毎毎び羞x擇透性，對臺盼藍的透性小，進入細胞慢。若染色時間過長，臺盼藍可能通過胞吞或胞飲作用進入細胞。特點-染細胞類型染色部位激發(fā)光顏色意義Hoechst染色活細胞（主要是早期凋亡細胞）細胞核紫外激發(fā)核染藍色檢測早期凋亡PI染色壞死細胞或凋亡晚期細胞細胞核綠光激發(fā)！核染紅色檢測死細胞或凋亡晚期細胞ann