CYP3AP1和ABCC2基因多態(tài)性對阿托伐他汀調(diào)脂療效的影響

1、CYP3AP1和 ABCC2基因多態(tài)性對阿托伐他汀調(diào)脂療效的影響【目的與背景】阿托伐他汀 (atorvastatin) 是最有效的調(diào)脂藥物之一 , 一系列大規(guī)模的臨床試驗(yàn)肯定了其在冠心病整體防治中的重要作用 , 然而在臨床應(yīng)用中發(fā)現(xiàn)阿托伐他汀存在著不容忽視的個(gè)體差異 (10%70%)。目前認(rèn)為 , 基因多態(tài)性所致的藥物代謝酶和轉(zhuǎn)運(yùn)體活性的差異 , 可能是導(dǎo)致阿托伐他汀調(diào)脂療效產(chǎn)生差異的主要原因。阿托伐他汀在體內(nèi)的代謝與肝微粒體酶 CYP3A有關(guān) , 其中 80%以上由 CYP3A4/5所代謝 , 在肝臟發(fā)揮藥理作用后阿托伐他汀及其代謝物經(jīng)ABCC2基因編碼的 MRP2以及其它轉(zhuǎn)運(yùn)體轉(zhuǎn)運(yùn)出肝細(xì)胞

2、。近年來的研究證實(shí)CYP3AP1-44GA 不僅與 CYP3A4和 CYP3A5相關(guān)單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)處于連鎖不平衡, 而且該位點(diǎn)的變異能夠降低CYP3A的活性。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)CYP3A4*1G、CYP3A5*3多態(tài)性能夠影響阿托伐他汀或辛伐他汀降脂療效。但尚未見 CYP3AP1-44GA 多態(tài)性與阿托伐他汀降脂療效相關(guān)性的報(bào)道。在中國漢族人群 ,ABCC2 -24CT 和 ABCC2 1249G A 是變異頻率較高的兩個(gè)位點(diǎn) , 且國外文獻(xiàn)報(bào)道其變異與MRP2的表達(dá)或功能相關(guān)。 然而國內(nèi)、外文獻(xiàn)中均未見 ABCC2 -24CT 和 ABCC2 1249GA 多態(tài)性與阿托伐他汀調(diào)脂療效的

3、相關(guān)性報(bào)道。因此 , 本研究旨在探討高脂血癥病人中CYP3AP1 -44GA,ABCC2 -24C T和 ABCC21249GA 多態(tài)性及其單體型對阿托伐他汀調(diào)脂療效的影響 , 從而篩選出與阿托伐他汀治療相關(guān)的遺傳標(biāo)志物 , 為實(shí)現(xiàn)以基因?yàn)閷?dǎo)向的藥物治療和個(gè)體化給藥提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)?！静牧吓c方法】 1. 研究對象 202 例河南漢族高脂血癥患者 總膽固醇 (TC) 6 mmol/l 或低密度脂蛋白膽固醇 (LDL-C) 3.36 mmol/l 均為鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院的住院或門診病人。 受試者在用藥前接受體格檢查和既往病史調(diào)查。本研究方案得到鄭州大學(xué)醫(yī)學(xué)倫理委員會認(rèn)可, 所有受試者了解試驗(yàn)過程并均

4、簽署知情同意書。2. 基因型檢測抽取高脂血癥患者外周靜脈血23 ml, 用酚 - 氯仿法提取基因組 DNA;采用聚合酶鏈反應(yīng) - 限制性片段長度多態(tài)性分析(PCR-RFLP)技術(shù) , 對CYP3AP1-44GA,ABCC2-24CT 和 ABCC21249GA 多態(tài)性位點(diǎn)進(jìn)行檢測分析。通過 PCR擴(kuò)增產(chǎn)物直接測序驗(yàn)證基因型檢測方法的可靠性。3. 阿托伐他汀降脂療效的評價(jià)所有入選者每晚頓服阿托伐他汀片20 mg, 連續(xù)用藥 4 周。測定患者給藥前及給藥4 周后血清 TC、LDL-C、HDL-C和 TG濃度。用給藥 4周后 TC、LDL-C、HDL-C和 TG的改變比例作為評價(jià)阿托伐他汀調(diào)脂療效的

5、標(biāo)準(zhǔn)。根據(jù)基因分型結(jié)果將患者分組, 觀察 CYP3AP1 -44GA,ABCC2 -24CT 和 ABCC21249GA 多態(tài)性與阿托伐他汀調(diào)脂療效的關(guān)系。4. 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析根據(jù)基因分型結(jié)果將高脂血癥患者分組 , 各組計(jì)量資料采用mean±SD表示。使用 SPSS13.0軟件以 2 檢驗(yàn)檢測等位基因和基因型分布是否符合 Hardy-Weinberg 平衡 ; 用 2 檢驗(yàn)或 Fisher s 精確概率檢驗(yàn)法檢測不同種族間基因多態(tài)性分布的差異; 對數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析(ANOVA),并采用協(xié)方差分析 , 以年齡、體重指數(shù)和給藥前血脂水平為協(xié)變量評價(jià)各基因組間阿托伐他汀調(diào)脂療效的差異 ,

6、 各組間比較采用LSD法。以 =0.05 作為檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)?！窘Y(jié)果】1. 高脂血癥病人中 CYP3AP1-44GA,ABCC2-24CT 和 ABCC21249G A 等位基因的頻率 CYP3AP1 -44GA,ABCC2 -24CT 和 ABCC2 1249G A 等位基因在河南高脂血癥人群中的頻率分別為 75.4%、 20.5%和 11.9%, 等位基因和基因型分布符合 Hardy-weinberg平衡 (P0.05) 。CYP3AP1-44G A 等位基因的頻率與文獻(xiàn)報(bào)道的印度人群(67.8%), 非裔美國人 (64.6%) 和南亞人群相似(63.5%)(P=0.125,P=0.100,P=

7、0.060),而顯著低于高加索健康人群(92.1%)(P=0.000) 。ABCC2-24CT 等位基因的頻率與文獻(xiàn)報(bào)道的亞洲人群(17.3%) 和高加索人群相似 (23.3%)(P=0.331,P=0.475)。ABCC21249GA 等位基因的頻率與日本人群(9.3%) 和高加索人群 (16.8%) 相似 (P=0.272,P=0.106), 而低于黑種人群 (28.6%)(P=0.043) 。2.CYP3AP1 -44GA多態(tài)性對阿托伐他汀調(diào)脂療效的影響阿托伐他汀治療4 周后 ,GG、 GA和 AA基因型亞組之間 TC、 LDL-C、HDL-C和 TG的改變比例均無顯著性差異(P 0.0

8、5) 。男性患者 G等位基因攜帶 (GG+GA)者 TC的濃度在給藥 4 周后明顯低于 AA型基因攜帶者 (P=0.020), 且兩組之間 TC改變比例有顯著性差異 (P=0.003), 但兩組間LDL-C、HDL-C和 TG的改變比例均無顯著性差異(P 0.05) 。女性患者治療前和治療4 周后各血脂指標(biāo)在G等位基因攜帶組和AA型攜帶者之間無顯著性差異 (P 0.05), 且兩組間 TC、LDL-C、HDL-C和 TG的改變比例亦無顯著性差異 (P 0.05) 。3.ABCC2 -24C T 多態(tài)性對阿托伐他汀調(diào)脂療效的影響阿托伐他汀治療前以及治療4 周后 ,CC、CT和 TT 基因型亞組之

9、間的TG濃度均有顯著性差異 (P 0.05), 但各基因型亞組之間TC、LDL-C、HDL-C和 TG的改變比例均無顯著差異 (P0.05) 。按性別分組時(shí) , 男性 T 等位基因攜帶 (TC+TT)組治療前的 TG濃度高于 CC組(P=0.022), 但治療 4 周后無顯著性差異 (P=0.080), 且兩組之間 TC、LDL-C、HDL-C和 TG的改變比例均無顯著性差異(P 0.05) 。女性患者兩組間 TC、LDL-C、 HDL-C和 TG的改變比例亦均無顯著性差異(P 0.05) 。4.ABCC21249GA 多態(tài)性對阿托伐他汀調(diào)脂療效的影響阿托伐他汀治療前和治療 4 周后 GG、G

10、A和 AA三個(gè)亞組間 TC、LDL-C、HDL-C和 TG的濃度均無顯著性差異 (P 0.05) 。給藥 4 周后各基因型亞組之間TC、LDL-C、 HDL-C和 TG的改變比例亦無顯著性差異(P 0.05) 。按性別分組時(shí) , 男性患者 A 等位基因攜帶 (GA+AA)組在治療 4 周后的 TG濃度顯著高于 GG組患者 (P=0.023), 但兩組之間 TC、LDL-C、HDL-C和 TG的改變比例均無顯著性差異 (P0.05) 。女性患者兩組間TC、 LDL-C、HDL-C和 TG的改變比例亦均無顯著性差異 (P 0.05) 。5.ABCC2 -24CT 和 ABCC2 1249GA 構(gòu)成的單體型對阿托伐他汀調(diào)脂療效的影響ABCC2 -24CT 和 ABCC2 1249GA 兩個(gè) SNPs位點(diǎn)連鎖不平衡關(guān)系較弱(D:0.1164,r2:0.293,2=0.1533,P=0.695) 。兩個(gè) SNPs位點(diǎn)構(gòu)成的各單體型之間TC、LDL-C、 HDL-C和 TG的改變比例均無顯著性差異 (P 0.05) 。【結(jié)論】 1.CYP3AP1 -44GA,ABCC2 -24C T 和 ABCC21249GA 等位基因在河南高脂血癥人群中的頻率分別為75.4%,2