臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室管理暫行辦法

1、臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室管理暫行辦法第一章 總 則      第一條 為規(guī)范臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室管理，保證臨床基因擴(kuò)增檢驗質(zhì)量，使臨床診斷和治療更為科學(xué)、合理，特制定本辦法。     第二條 臨床基因擴(kuò)增檢驗技術(shù)指以臨床診斷治療為目的，以擴(kuò)增檢測DNA或RNA為方法的檢測技術(shù)，如聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）、連接酶鏈反應(yīng)（LCR）、轉(zhuǎn)錄依賴的放大系統(tǒng)（TAS）自主序列復(fù)制系統(tǒng)（3SR）和鏈替代擴(kuò)增（SDA）等。     第三條 本辦法適用于開展臨床基因擴(kuò)增檢驗的實驗室。臨床基因擴(kuò)增

2、檢驗實驗室設(shè)立在二級以上醫(yī)院。     第四條 臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室必須使用經(jīng)國家藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)的臨床檢驗試劑開展臨床基因擴(kuò)增檢驗項目。     第五條 衛(wèi)生部臨床檢驗中心（以下簡稱衛(wèi)生部臨檢中心）和省、自治區(qū)、直轄市臨床檢驗中心（以下簡稱省臨檢中心）負(fù)責(zé)對所轄行政區(qū)域內(nèi)臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室的質(zhì)量監(jiān)督管理工作。第二章 實驗室設(shè)置和驗收      第六條 擬設(shè)置臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室的醫(yī)療機(jī)構(gòu)按照臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室基本設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)（見附件）籌建實驗室；籌建完成后，由法定

3、代表人向衛(wèi)生部臨檢中心提出技術(shù)驗收申請。申請時需提交以下材料：     （一）醫(yī)療機(jī)構(gòu)執(zhí)業(yè)許可證復(fù)印件；     （二）可行性研究報告；     1、 擬設(shè)臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室機(jī)構(gòu)的所在地醫(yī)療衛(wèi)生資源狀況、本機(jī)構(gòu)的基本情況、對臨床基因擴(kuò)增檢驗的需求以及臨床基因擴(kuò)增實驗室運行的預(yù)測分析；     2、 擬設(shè)臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室的設(shè)置平面圖；     3、 擬設(shè)臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室將開展的檢驗項

4、目、實驗設(shè)備條件和有關(guān)技術(shù)人員資料     第七條 衛(wèi)生部臨檢中心和省臨檢中心共同組織相關(guān)專業(yè)的專家組（以下簡稱專家組），按照臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室基本設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)對提出申請的臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室進(jìn)行技術(shù)驗收。驗收完成后，在20日內(nèi)將驗收報告寄送至申請機(jī)構(gòu)。     第八條 經(jīng)專家組技術(shù)驗收合格的醫(yī)療機(jī)構(gòu)將本辦法第六條規(guī)定的材料及專家組驗收報告送至省級行政部備案。在將符合規(guī)定的全部材料送達(dá)省級衛(wèi)生行政部門后15日內(nèi)未收到省級衛(wèi)生行政部門不同意的意見，方可開展專家組技術(shù)驗收合格的臨床基因擴(kuò)增檢驗項目。 

5、60;   第九條 未經(jīng)專家組驗收合格并報省級衛(wèi)生行政部門備案的醫(yī)療機(jī)構(gòu)不得擅自開展臨床基因擴(kuò)增檢驗項目。第三章 實驗室監(jiān)督管理      第十條 臨床基因檢驗實驗室必須按照臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室工作規(guī)范（另發(fā)）開展臨床基因擴(kuò)增檢驗工作。     第十一條 臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室技術(shù)人員必須進(jìn)行上崗培訓(xùn)。經(jīng)培訓(xùn)合格者，由培訓(xùn)單位發(fā)給合格證書，并將培訓(xùn)合格人員名單報衛(wèi)生部臨檢中心備案。獲得培訓(xùn)合格證書者方可從事臨床基因擴(kuò)增檢驗工作。     培訓(xùn)單位為衛(wèi)生部

6、臨檢中心，或由省級衛(wèi)生行政部門指定并經(jīng)衛(wèi)生部臨檢中心認(rèn)定的機(jī)構(gòu)。培訓(xùn)時使用規(guī)定的統(tǒng)一教材。     第十二條 以科研為目的的基因擴(kuò)增檢驗項目。不得向臨床出具檢驗報告，不得向病人收取任何費用。     第十三條 臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室必須按照臨床基因擴(kuò)增實驗室工作規(guī)范開展室內(nèi)質(zhì)量控制，并參加衛(wèi)生部臨檢中心組織的室內(nèi)質(zhì)量評價。第十四條 衛(wèi)生部臨檢中心按照本方法和臨床基因擴(kuò)增實驗室工作規(guī)范協(xié)調(diào)、組織省臨檢中心對臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室的檢驗質(zhì)量進(jìn)行監(jiān)測。監(jiān)測結(jié)果報省級衛(wèi)生行政部門，同時抄送被監(jiān)測的臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室所在

7、醫(yī)療機(jī)構(gòu)。      第十五條 衛(wèi)生部臨檢中心或省級臨檢中心受省級以上衛(wèi)生行政部門委托可對臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室進(jìn)行現(xiàn)場檢查，現(xiàn)場檢查工作人員在履行職責(zé)時應(yīng)出示證件。在進(jìn)行現(xiàn)場檢查時，檢查人員有權(quán)調(diào)閱有關(guān)資料，被檢查機(jī)構(gòu)不得拒絕或隱瞞。     第十六條 衛(wèi)生部臨檢中心對在室間質(zhì)量評價中不合格的臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室提出警告，對連續(xù)二次或三次中有二次發(fā)現(xiàn)臨床基因擴(kuò)增檢驗結(jié)果不合格的臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室，衛(wèi)生部臨檢中心報省級以上衛(wèi)生行政部門由省級以上衛(wèi)生行政部門責(zé)令其暫停有關(guān)臨床基因擴(kuò)增檢驗項目，限期整改。經(jīng)專家組

8、進(jìn)行再次技術(shù)驗收并合格，并報省級衛(wèi)生行政部門核準(zhǔn)后，方可重新開展臨床基因擴(kuò)增檢驗項目。     第十七條 對于未經(jīng)衛(wèi)生部臨檢中心組織的專家組技術(shù)驗收合格并報省級衛(wèi)生部門備案，擅自開展臨床基因檢驗項目的醫(yī)療機(jī)構(gòu)，由省級衛(wèi)生行政部門依據(jù)醫(yī)療機(jī)構(gòu)管理條例第四十七條和醫(yī)療機(jī)構(gòu)管理條例實施細(xì)則第八十條予以處罰，并予以公告。公告所需費用由被公告機(jī)構(gòu)支付。     第十八條 出現(xiàn)下列情況之一的臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室，由省級衛(wèi)生行政部門責(zé)令其停止開展臨床基因擴(kuò)增檢驗，并對其所在醫(yī)療機(jī)構(gòu)予以公告。公告所需費用由被公告機(jī)構(gòu)支付：

9、60;    （一） 開展超出衛(wèi)生部臨檢中心組織的技術(shù)驗收合格并報省級衛(wèi)生行政部門備案 臨床基因擴(kuò)增檢驗項目的；     （二） 使用未經(jīng)國家藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)的試劑開展臨床基因擴(kuò)增檢驗的；     （三） 在臨床基因擴(kuò)增檢驗中未開展室內(nèi)質(zhì)量控制的；     （四） 在臨床基因擴(kuò)增檢驗中未參加室間質(zhì)量評價的；     （五） 在臨床基因擴(kuò)增檢驗中弄虛作假的；    

10、（六） 以科研為目的的基因擴(kuò)增檢驗項目向病人收取費用的；     （七） 使用未經(jīng)培訓(xùn)合格的專業(yè)技術(shù)人員從事臨床基因擴(kuò)增檢驗的；第四章 附 則      第十九條 對采供血機(jī)構(gòu)的基因擴(kuò)增檢驗實驗室開展基因擴(kuò)增檢驗項目的管理，參照本辦法執(zhí)行。     第二十條 衛(wèi)生部臨檢中心組織的專家組對申請開展臨床基因擴(kuò)增檢驗的實驗室進(jìn)行技術(shù)驗收所需費用按國家有關(guān)規(guī)定執(zhí)行。     第二十一條 本辦法由衛(wèi)生部負(fù)責(zé)解釋。   

11、;  第二十二條 本辦法自發(fā)布之日起施行。     附：臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室基本設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)臨床檢驗擴(kuò)增檢驗實驗室管理暫行辦法，制定本標(biāo)準(zhǔn)      一、 臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室區(qū)域設(shè)置原則     （一） 臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室區(qū)域設(shè)置原則     1、 試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū)     2、 標(biāo)本制備區(qū)     3、 擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)

12、60;    4、 擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)     如使用全自動分析儀，區(qū)域可適當(dāng)合并。（二） 各工作區(qū)域必須有明確的標(biāo)記，避免不同工作區(qū)域內(nèi)的設(shè)備、物品混用。     （三） 進(jìn)入各工作區(qū)域必須嚴(yán)格按照單一方向進(jìn)行，即試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū) >標(biāo)本制備區(qū)>擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)>擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。     （四） 不同的工作區(qū)域使用不同的工作服（例如不同的顏色）。工作人員離開各工作區(qū)域時，不得將工作服帶出。  

13、0;  二、 工作區(qū)域儀器設(shè)備配置標(biāo)準(zhǔn)     （一） 試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū)     1、2-8C和-15C冰箱     2、混勻器     3、微量加樣器（覆蓋1-1000ul）     4、移動紫外燈（近工作臺面）     5、消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭（帶濾心）    

14、 6、專用工作服和工作鞋     7、專用辦公用品     （二） 標(biāo)本制備區(qū)     1、2-8C冰箱、-20C或-80C冰箱     2、高速臺式冷凍離心機(jī)     3、混允器     4、水浴箱或加熱模塊     5、微量加樣器（覆蓋1-1000ul）     6、可移動紫

15、外燈（近工作臺面）     7、超凈工作臺     8、消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭（帶濾心）     9、專用工作服和工作鞋     10、專用辦公用品     如需處理大分子DNA，應(yīng)具有超聲波水浴儀。     （三） 擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)     1、 核酸擴(kuò)增儀

16、0;    2、 微量加樣器（覆蓋1-1000ul）     3、 可移動紫外燈（近工作臺面）     4、 消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭（帶濾心）     5、 專用工作服和工作鞋     6、 專用辦公用品     (四)擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)     視檢驗方法不同而定?；緝x器設(shè)備如下：

17、60;    1、 微量加樣器（覆蓋1-1000ul）     2、 可移動紫外燈（近工作臺面）     3、 消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、加樣器吸頭（帶濾心）     4、 專用工作服和工作鞋     5、 專用辦公用品    為了對以個特定序列進(jìn)行PCR做重復(fù)檢測,需要三個不同的區(qū)域,每一個區(qū)域的具體技術(shù)操作和試劑在下面詳細(xì)列出.  1、樣品準(zhǔn)備區(qū)

18、    這個區(qū)域?qū)ｉT用作樣品的準(zhǔn)備，在制備和操作用于核酸提取的試劑時應(yīng)該采    取預(yù)防措施：    1）PCR產(chǎn)物和帶有要擴(kuò)增序列的DNA克隆不能在這個房間操作。    2）組織培養(yǎng)物、組織標(biāo)本和血清樣品都帶進(jìn)樣品準(zhǔn)備間處理，以根據(jù)應(yīng)用的需要提取DNA或RNA。    3）用于樣品處理的工具不能被用作普通分子克隆的工具，也不能用作操作靶序列。    4）D

19、NA樣品應(yīng)該用有專門的防護(hù)或正壓活塞式移液管操作，以防止在吸取樣品時有氣溶膠遺留。    5）大體積樣品應(yīng)該用單獨包裝的無菌一次性移液管吸取。    6）管子打開前都要簡短離心以減少氣溶膠的產(chǎn)生，而且管子不能用力崩開，這樣會產(chǎn)生氣溶膠。    7）任何時候都應(yīng)該穿實驗服和帶手套，手套要經(jīng)常更換，尤其在抽提過程中每一步之間都要更換。實驗服要專門用于樣品準(zhǔn)備間，經(jīng)常清洗。    2、樣品準(zhǔn)備和RNA-PCR   

20、0; RNA-PCR的額外步驟需要額外的樣品操作，這樣增加了樣品之間污染的機(jī)會。為了避免這一問題，反轉(zhuǎn)錄一步可以在樣品準(zhǔn)備區(qū)進(jìn)行。在RNA-PCR中應(yīng)用UNG以防止污染的方法也有報道。    3、前PCR區(qū)    必須有專門用于準(zhǔn)備各種反應(yīng)的區(qū)域，這個區(qū)域必須保持干凈，而且沒有來自克隆和樣品準(zhǔn)備的污染。前PCR區(qū)必須要有試劑和準(zhǔn)備，特別是專門用于前PCR區(qū)的正壓活塞式移液管。    4、PCR實驗室試劑的操作    1）所用的

21、所有溶液都應(yīng)該沒有核酸和（或）核酸酶（DNase和RNase）污染。    2）所有PCR試劑中使用的水都應(yīng)該是高質(zhì)量的新鮮蒸餾的去離子水，用0.22m過濾的，并且是高壓滅菌。    3）在20到25貯存的試劑建議加點像疊氮鈉一類的抗微生物劑，在擴(kuò)增試劑或樣品制備試劑中加入0.025%的疊氮鈉不抑制擴(kuò)增反應(yīng)。    4）所用試劑都應(yīng)該以大體積配制，實驗一下看試劑是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量進(jìn)行貯存。    5）所有試劑和樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的瓶子和管子。    6）新配制的試劑在用于準(zhǔn)備新的標(biāo)本之前應(yīng)該加以檢驗。    7）樣品準(zhǔn)備和前PCR區(qū)所使用的移液管在不使用時都應(yīng)該小心保存。    5、在前PCR區(qū)建立PCR混合物    1）可以把即刻可用的“主混合物”溶液配好、分裝并保存在-20或4，在實驗室只涉及到擴(kuò)增一種或少數(shù)幾種特異序列時這樣做很有用。  &#