細(xì)胞工程自選實(shí)驗(yàn)

1、植物細(xì)胞工程自選實(shí)驗(yàn)報(bào)告學(xué)院班級(jí)：農(nóng)學(xué)院09級(jí)生物技術(shù)4班學(xué) 號(hào)：20090101310100姓 名：李曉芳開(kāi)題報(bào)告研究進(jìn)展：植物細(xì)胞工程是一門(mén)以植物組織培養(yǎng)為基礎(chǔ)，具有廣泛的應(yīng)用前景和使用價(jià)值的生物技術(shù)。隨著該技術(shù)的不斷完善和發(fā)展，植物細(xì)胞工程已經(jīng)在部分經(jīng)濟(jì)植物的育種和繁殖中發(fā)揮巨大作用。目前根據(jù)人們的需要已經(jīng)相繼完善和發(fā)展了一些具有特色的實(shí)用技術(shù)，包括植物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)、單倍體育種和胚胎培養(yǎng)，制備轉(zhuǎn)基因植物等。致謝技術(shù)的發(fā)展應(yīng)用，使得植物細(xì)胞工程在人類的現(xiàn)代生活中的作用更加突出，并在經(jīng)濟(jì)植物繁殖，植物新品種選育和有用次生代謝物的產(chǎn)生方面有了重大突破。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：以新鮮的洋蔥為實(shí)驗(yàn)材料，剝?nèi)ネ鈬?/p>

2、的鱗莖組織，留下中間23cm莖尖，在升汞中消毒后再剝?nèi)ネ鈱幼罱K留下約12cm的莖尖接種于滅菌培養(yǎng)基內(nèi)繁殖生出愈傷組織，待2030天后再將其接種于生根培養(yǎng)基內(nèi)。滅菌時(shí)間根據(jù)不同材料而定。材料：市售的新鮮洋蔥培養(yǎng)基：MS+NAA0.1mg/l+BA0.01mg/l+30g/l白糖+8.5g/l卡拉膠洋蔥愈傷組織培養(yǎng)摘要：植物的組織培養(yǎng)是根據(jù)植物細(xì)胞具有全能性這個(gè)理論，近幾十年來(lái)發(fā)展起來(lái)的一項(xiàng)無(wú)性繁殖的新技術(shù)。植物的組織培養(yǎng)又叫離體培養(yǎng)，指從植物體分離出符合需要的組織.器官或細(xì)胞，原生質(zhì)體等，通過(guò)無(wú)菌操作，在人工控制條件下進(jìn)行培養(yǎng)以獲得再生的完整植株或生產(chǎn)具有經(jīng)濟(jì)價(jià)值的其他產(chǎn)品的技術(shù)。通過(guò)洋蔥莖尖分

3、生組織培養(yǎng)(簡(jiǎn)稱莖尖培養(yǎng)),使感染病毒病的植物重新獲得無(wú)病毒植物。初步了解植物組織培養(yǎng)的基本原理和操作技術(shù)。關(guān)鍵詞：洋蔥莖尖 組織培養(yǎng) 愈傷組織 洋蔥又名球蔥、圓蔥、玉蔥、蔥頭，荷蘭蔥，屬百合科蒜屬，為2年生草本植物。洋蔥由于原產(chǎn)于大陸性氣候區(qū)，其獨(dú)特的口味已經(jīng)被千千萬(wàn)萬(wàn)人接受。近年來(lái)對(duì)洋蔥的組織培養(yǎng)技術(shù)成為一個(gè)熱門(mén)的研究領(lǐng)域。洋蔥組織培養(yǎng)可以由鱗莖培養(yǎng)獲得，也可以由莖尖培養(yǎng)獲得。而莖尖培養(yǎng)已成為最為廣泛使用的方法.為什么會(huì)使用莖尖呢?莖的生長(zhǎng)點(diǎn)培養(yǎng)，實(shí)際就是莖尖培養(yǎng)莖尖培養(yǎng)脫毒的原理是莖尖幾乎不含病毒，采用旺盛分裂的莖尖組織培養(yǎng)，就有可能去除病毒。切取莖尖的大小與脫毒效果直接相關(guān)，莖尖越小，

4、去病毒機(jī)會(huì)越大。通常莖尖取材大小，與脫病毒效果成反比，與莖尖成活率成正比。其次幼嫩組織分裂能力強(qiáng)，分化程度低，易脫分化誘導(dǎo)成愈傷組織。洋蔥組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)知識(shí)。一 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、了解和掌握基礎(chǔ)組織培養(yǎng)的原理和基本操作技術(shù)。 2 、掌握植物脫毒的基本方法。二、實(shí)驗(yàn)原理 植物的組織培養(yǎng)是根據(jù)植物細(xì)胞具有全能性這個(gè)理論，近幾十年來(lái)發(fā)展起來(lái)的一項(xiàng)無(wú)性繁殖的新技術(shù)。植物的組織培養(yǎng)又叫離體培養(yǎng)，指從植物體分離出符合需要的組織.器官或細(xì)胞，原生質(zhì)體等，通過(guò)無(wú)菌操作，在人工控制條件下進(jìn)行培養(yǎng)以獲得再生的完整植株或生產(chǎn)具有經(jīng)濟(jì)價(jià)值的其他產(chǎn)品的技術(shù)。莖的生長(zhǎng)點(diǎn)培養(yǎng)，實(shí)際就是莖尖培養(yǎng)莖尖培養(yǎng)脫毒的原理是莖尖幾乎不含

5、病毒，采用旺盛分裂的莖尖組織培養(yǎng)，就有可能去除病毒。切取莖尖的大小與脫毒效果直接相關(guān)，莖尖越小，去病毒機(jī)會(huì)越大。通常莖尖取材大小，與脫病毒效果成反比，與莖尖成活率成正比。其次幼嫩組織分裂能力強(qiáng)，分化程度低，易脫分化誘導(dǎo)成愈傷組織。三 實(shí)驗(yàn)儀器及試劑材料 儀器：感量為0.0001g的電光分析天平 燒杯 玻璃棒 容量瓶 標(biāo)簽紙 滅菌鍋 無(wú)菌操作臺(tái) 培養(yǎng)瓶 鑷子 解剖刀 酒精燈 試劑;大量元素;NH4NO3 KNO3 CaCl2·2H2O MgSO4·7H2O KH2PO4 Fe鹽:FeSO4·7H2O Na2·EDTA·7H2O 微量元素：KI H

6、3BO3 MnSO4·4H2O ZnSO4·7H2O Na2MoO4·2H2O CuSO4·5H2O CoCl2·6H2O 維生素：煙酸 VB1 VB6 肌醇 甘氨酸 材料：市場(chǎng)上購(gòu)得的洋蔥數(shù)個(gè)四 實(shí)驗(yàn)步驟 （一）培養(yǎng)基配置：1按基本用量配MS培養(yǎng)基。洋蔥莖尖組織培養(yǎng)的配方為MS+NAAmg/l+BA5mg/l +30g/l白糖+8.5g/l卡拉膠2.加瓊脂和無(wú)離子水至定容量的70%左右，加熱使瓊脂溶解；3.瓊脂溶解后，加入培養(yǎng)基母液、激素、糖等，稍加熱使糖溶解；4.糖溶解，加無(wú)離子水至定容量；5.充分?jǐn)嚢韬?，測(cè)pH值至要求值（PH=5.8）；

7、6.培養(yǎng)基分裝入瓶。（二）滅菌1. 培養(yǎng)基滅菌（9瓶）;2. 無(wú)菌水3瓶；3. 牛皮紙一袋； （三）接種1. 接種室紫外燈照射滅菌；無(wú)菌操縱臺(tái)、接種器具（解剖刀、酒精燈、鑷子）滅菌。2. 接種。首先將洋蔥除去不用的部分，將需要的部分仔細(xì)洗干凈。把材料切割成適當(dāng)大小23cm為宜，滅菌容器能放入。用0.01%的升汞消毒1215min。取出后放在滅過(guò)菌的牛皮紙上切割成12cm的大小。一分為二。將其接種在無(wú)菌培養(yǎng)瓶中。 （四）培養(yǎng) 培養(yǎng)2025天。五 結(jié)果 9瓶培養(yǎng)中有4瓶污染雜菌，5瓶的愈傷組織生長(zhǎng)良好。六 討論 （1）導(dǎo)致結(jié)果失敗的主要原因有： 滅菌不徹底。培養(yǎng)基滅菌、材料滅菌時(shí)間不夠。所選的材料

8、有問(wèn)題，生長(zhǎng)點(diǎn)有細(xì)菌侵入。在接種過(guò)程中污染了雜菌。在配培養(yǎng)基時(shí)稱量不精確導(dǎo)致，植物生長(zhǎng)受阻。（2）組織培養(yǎng)中出現(xiàn)黃化的原因有幾種？答：黃化是指在組培過(guò)程中由于培養(yǎng)基成分、環(huán)境、激素、碳水化合物等各種因素引起的幼苗整株失綠，全部或部分葉片黃化、斑駁。引起黃化的主要原因是培養(yǎng)基中Fe的含量不足；各礦質(zhì)營(yíng)養(yǎng)不均衡；培養(yǎng)環(huán)境通氣不良，瓶?jī)?nèi)乙烯含量升高；激素配比不當(dāng)；糖用量不足或長(zhǎng)時(shí)間不轉(zhuǎn)移糖已耗盡；PH值變化過(guò)大；培養(yǎng)溫度不適；光照不足等。解決的方法是，首先在配制母液和培養(yǎng)基的制作過(guò)程中，要檢查儀器設(shè)備是否準(zhǔn)確，還要認(rèn)真細(xì)致地核對(duì)每項(xiàng)稱量的每一個(gè)環(huán)節(jié)；及時(shí)轉(zhuǎn)接培養(yǎng)物；使用透氣的封口膜以改善瓶?jī)?nèi)通氣狀況；適當(dāng)調(diào)節(jié)pH值、激素配比和無(wú)機(jī)鹽濃度；配制培養(yǎng)基時(shí)切記不要忘記加糖；控制培養(yǎng)室內(nèi)的溫度；適當(dāng)增加光照；另外，在培養(yǎng)基中添加抗生素類物質(zhì)如青霉素、鏈霉素、頭孢霉素等，有時(shí)也會(huì)出現(xiàn)幼苗黃