豬血液硫代巴比妥酸反映物TBARS酶聯(lián)免疫分析

1、豬血液硫代巴比妥酸反映物(TBARS)酶聯(lián)免疫分析試劑盒利用說明書本試劑盒僅供研究利用。檢測范圍：96T60ng/L-1700ng/L利用目的：本試劑盒用于測定豬血清、血漿及相關液體樣本中血液硫代巴比妥酸反映物(TBARS)含量。實驗原理本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中豬血液硫代巴比妥酸反映物(TBARS)水平。用純化的豬血液硫代巴比妥酸反映物(TBARS)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入血液硫代巴比妥酸反映物(TBARS),再與HRP標記的血液硫代巴比妥酸反映物(TBARS)抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，通過完全洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的

2、催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的血液硫代巴比妥酸反映物(TBARS)呈正相關。用的標儀在450nm波長下測定吸光度(0D值)，通過標準曲線計算樣品中豬血液硫代巴比妥酸反映物(TBARS)濃度。試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20mlX1瓶7終止液6mlX1瓶2酶標試劑6mlX1瓶8標準品(3200ng/L)XI瓶3酶標包被板12孔X8條9標準品稀釋液義1瓶4樣品稀釋液6mlX1瓶10說明書1份5顯色劑A液6mlX1瓶11封板膜2張6顯色劑B液6MX1/瓶12密封袋1個標本要求1 .標本搜集后及早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。假設不能馬上進

3、行實驗，可將標本放于-20C保留，但應幸免反復凍融2 .不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。操作步驟1 .標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可依照以下圖表在小試管中進行稀釋。1600ng/L5號標準品150M的原倍標準品加入150W標準品稀釋液800ng/L4號標準品150M的5號標準品加入150W標準品稀釋液400ng/L3號標準品150M的4號標準品加入150W標準品稀釋液200ng/L2號標準品150M的3號標準品加入150川標準品稀釋液100ng/L1號標準品150M的2號標準品加入150W標準品稀釋液2 .加樣：別離設空白孔（空白對照孔

4、不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50卜山待測樣品孔中先加樣品稀釋液40卜山然后再加待測樣品10位（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡可能不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。3 .溫育：用封板膜封板后置37溫育30分鐘。4 .配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸儲水30倍稀釋后備用5 .洗滌：警惕揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。6 .加酶：每孔加入酶標試劑50川，空白孔除外。7 .溫育：操作同3。8 .洗滌：操作同5。9 .顯色：每孔先加入顯色劑A50M，再加入顯色劑B50M，輕輕震蕩混勻

5、，37避光顯色10分鐘.10 .終止：每孔加終止液50可，終止反映（現(xiàn)在藍色立轉黃色）。11 .測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應在加終止液后15分鐘之內進行。操作程序總結：準備試劑，樣品和標準品加入準備好的樣品和標準品，37C反應30分鐘洗板5次，加入酶標試劑，37反應30分鐘洗板5次，加入顯色液A、B,37顯色10分鐘加入終止液15分鐘之內讀0D值計算計算以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在座標紙上繪出標準曲線，依照樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度：再乘以稀釋倍數(shù)：或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程

6、式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。注意事項1 .試劑盒從冷藏環(huán)境中掏出應在室溫平穩(wěn)15-30分鐘后方可利用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保留。2 .濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不阻礙結果。3 .各步加樣均應利用加樣器，并常常校對其準確性，以幸免實驗誤差。一次加樣時刻最好操縱在5分鐘內，如標本數(shù)量多，推薦利用排槍加樣。4 .請每次測定的同時做標準曲線，最好做復孔。如標本中待測物質含量太高（樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋必然倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)（XnX5）。5 .封板膜只限一次性利用，以幸免交叉污染。6 .底物請避光保留。7 .嚴格依照說明書的