中藥制劑的含量測定課件

1、現(xiàn)在學習的是第1頁，共111頁2第一節(jié)第一節(jié) 含量測定的目的與意義含量測定的目的與意義 中藥制劑質量優(yōu)劣的標準中藥制劑質量優(yōu)劣的標準鑒別鑒別檢查檢查含量測定含量測定中藥制劑的中藥制劑的鑒別鑒別是研究某種是研究某種原料藥或成分的存在與否，原料藥或成分的存在與否，從而判定藥物的從而判定藥物的真?zhèn)握鎮(zhèn)沃兴幹苿┲兴幹苿┖繙y定含量測定是研究某種是研究某種成分的含量高低是否符合規(guī)定成分的含量高低是否符合規(guī)定來判定藥物的來判定藥物的優(yōu)劣優(yōu)劣，是質量控，是質量控制中的一項重要指標。制中的一項重要指標。現(xiàn)在學習的是第2頁，共111頁3 通過測定制劑中有效成分、毒性通過測定制劑中有效成分、毒性成分或某些指標性成

2、分的含量來衡量成分或某些指標性成分的含量來衡量其制劑工藝的穩(wěn)定性和中藥材的質量其制劑工藝的穩(wěn)定性和中藥材的質量優(yōu)劣，以保證中藥制劑的質量，達到優(yōu)劣，以保證中藥制劑的質量，達到臨床用藥安全、有效和中藥制劑進入臨床用藥安全、有效和中藥制劑進入國際市場的需要。國際市場的需要。 中藥制劑含量測定的意義中藥制劑含量測定的意義現(xiàn)在學習的是第3頁，共111頁4中藥制劑含量測定的特點中藥制劑含量測定的特點含量測定內(nèi)容含量測定內(nèi)容中藥制劑中藥制劑化學藥品化學藥品對象不同對象不同組成及成分復雜組成及成分復雜成分單一成分單一供試品溶液制備供試品溶液制備方法繁瑣，大多需方法繁瑣，大多需要凈化分離要凈化分離方法簡單方法

3、簡單成分明確成分明確待測成分確定待測成分確定先根據(jù)中醫(yī)藥理論先根據(jù)中醫(yī)藥理論選擇藥味，再綜合選擇藥味，再綜合選擇待測成分選擇待測成分一般選擇主一般選擇主要成分要成分中藥制劑與化學藥品含量測定區(qū)別中藥制劑與化學藥品含量測定區(qū)別現(xiàn)在學習的是第4頁，共111頁5樣品處理的主要作用樣品處理的主要作用釋放被測組分，制成穩(wěn)定試樣釋放被測組分，制成穩(wěn)定試樣除去雜質，純化除去雜質，純化濃縮濃縮試樣形式符合測定的要求試樣形式符合測定的要求樣品處理的主要步驟樣品處理的主要步驟1. 樣品的粉碎樣品的粉碎2. 樣品的提取樣品的提取3. 樣品的分離純化樣品的分離純化現(xiàn)在學習的是第5頁，共111頁6樣品的粉碎樣品的粉碎目

4、的目的1. 取樣均勻取樣均勻 2. 提取完全提取完全粉碎設備粉碎設備粉碎機、研缽、勻漿機粉碎機、研缽、勻漿機 粒度大小合適粒度大小合適 樣品粉末的分級（過篩）樣品粉末的分級（過篩） 防止污染或損失防止污染或損失 儀器設備潔凈儀器設備潔凈 粉塵和較大顆粒的損失。粉塵和較大顆粒的損失。現(xiàn)在學習的是第6頁，共111頁7樣品的提取樣品的提取 關鍵關鍵提取完全提取完全溶劑的選擇溶劑的選擇水、酸水、堿水水、酸水、堿水親水性的有機溶劑：乙醇、甲醇、丙酮親水性的有機溶劑：乙醇、甲醇、丙酮親脂性的有機溶劑：石油醚、苯、氯仿、乙醚、親脂性的有機溶劑：石油醚、苯、氯仿、乙醚、乙酸乙酯、二氯乙烷乙酸乙酯、二氯乙烷 現(xiàn)

5、在學習的是第7頁，共111頁8常見的提取方法：常見的提取方法： 萃取法萃取法 浸浸漬法漬法 回流提取法回流提取法 連續(xù)回流連續(xù)回流提取法提取法 超聲提取法超聲提取法 水蒸氣蒸餾法水蒸氣蒸餾法 超臨界流體提取法超臨界流體提取法 微波輔助萃取法微波輔助萃取法樣品的提取樣品的提取 現(xiàn)在學習的是第8頁，共111頁9優(yōu)缺點及適用范圍：優(yōu)缺點及適用范圍：優(yōu)點：操作簡單，適于熱不穩(wěn)定的樣品，且提取雜質優(yōu)點：操作簡單，適于熱不穩(wěn)定的樣品，且提取雜質少少缺點：費時（缺點：費時（12-24 h12-24 h）費溶劑（）費溶劑（10-5010-50倍）倍）樣品的提取樣品的提取 （一）冷浸法（一）冷浸法操作：操作：樣

6、品樣品精密稱定精密稱定置容器內(nèi)置容器內(nèi)精密加入溶劑精密加入溶劑稱定重量稱定重量浸泡（浸泡（1224h）稱重稱重補足重量補足重量測測定定測定方法：測定方法：全部測定法：全部測定法：過濾過濾濾液濾液蒸干蒸干定容定容測定測定（殘渣需殘渣需洗滌完全洗滌完全）部分測定法部分測定法：過濾：過濾濾液濾液取若干體積測定取若干體積測定（不適宜揮（不適宜揮發(fā)性較大的溶劑）發(fā)性較大的溶劑）現(xiàn)在學習的是第9頁，共111頁10 采用回流裝置，用單一溶采用回流裝置，用單一溶劑或混合溶劑于水浴上加熱劑或混合溶劑于水浴上加熱提取提取優(yōu)缺點及適用范圍：優(yōu)缺點及適用范圍：提取效率高，提取時間短提取效率高，提取時間短，為，為0.5

7、2小時；提取小時；提取雜質雜質較多較多，不適用于熱不穩(wěn)定，不適用于熱不穩(wěn)定或具有揮發(fā)性的成分或具有揮發(fā)性的成分樣品的提取樣品的提取 （二）回流提取法（二）回流提取法（三）連續(xù)回流提取法（三）連續(xù)回流提取法萬應膠囊（黃連等）中鹽酸小檗堿測定萬應膠囊（黃連等）中鹽酸小檗堿測定+HCl-70%乙醇溶液，加熱回流1h保和丸（陳皮等）中橙皮甙測定保和丸（陳皮等）中橙皮甙測定+甲醇，加熱回流至提取液無色為止 用索氏提取裝置，利用索氏提取裝置，利用遇熱易揮發(fā)溶劑反復提用遇熱易揮發(fā)溶劑反復提取取優(yōu)缺點及適用范圍：優(yōu)缺點及適用范圍：提取效率高，所需溶劑少提取效率高，所需溶劑少，提取，提取雜質較少，雜質較少，操作

8、操作簡便；受熱易分解的成簡便；受熱易分解的成分不宜使用分不宜使用?，F(xiàn)在學習的是第10頁，共111頁11樣品的提取樣品的提取 （四）超聲提取法（四）超聲提取法原理：超聲波的助溶作用原理：超聲波的助溶作用優(yōu)點：操作簡便，提取速度快優(yōu)點：操作簡便，提取速度快 超聲波可能引起供試品化學成分的改變超聲波可能引起供試品化學成分的改變 需對超聲頻率、提取時間、提取溶媒等進行考需對超聲頻率、提取時間、提取溶媒等進行考察察現(xiàn)在學習的是第11頁，共111頁12樣品的提取樣品的提取 （五）超臨界流體提取法（五）超臨界流體提取法（Supercritical-fluid extractionSupercritical-

9、fluid extraction，SFESFE）超臨界流體超臨界流體特殊的物質狀態(tài)特殊的物質狀態(tài)密度密度-d-d液體液體 溶解能力強溶解能力強粘度粘度- -氣體氣體 傳質快，有利于待測組分的擴散傳質快，有利于待測組分的擴散表面張力幾乎為表面張力幾乎為 0 0 浸潤性能好浸潤性能好現(xiàn)在學習的是第12頁，共111頁13樣品的提取樣品的提取 超臨界流體提取法超臨界流體提取法密度受壓力、溫度的影響大密度受壓力、溫度的影響大 改變對溶質的溶解能力改變對溶質的溶解能力加入甲醇、氯仿、苯等改變極性加入甲醇、氯仿、苯等改變極性 提取不同極性的成提取不同極性的成分分優(yōu)點：優(yōu)點：速度快、萃取效率高、方法準確度高、

10、選擇性速度快、萃取效率高、方法準確度高、選擇性較高、節(jié)省溶劑、易于自動化，而且可避免使用易較高、節(jié)省溶劑、易于自動化，而且可避免使用易燃，有毒的有機溶劑，能與色譜和光譜等分析儀器燃，有毒的有機溶劑，能與色譜和光譜等分析儀器直接聯(lián)用直接聯(lián)用?，F(xiàn)在學習的是第13頁，共111頁14樣品的分離純化樣品的分離純化 （一）沉淀法（一）沉淀法樣品樣品+沉淀劑沉淀劑 雜質雜質沉淀沉淀過濾過濾取濾液測定取濾液測定 待測組分待測組分沉淀沉淀重量法或溶解后測定重量法或溶解后測定蛇膽糖漿口服液蛇膽糖漿口服液含有大量糖，可用無水乙醇回流樣品，含有大量糖，可用無水乙醇回流樣品，冷后過濾，除糖以消除其干擾。冷后過濾，除糖以

11、消除其干擾。 復方益母草口服液中水蘇堿的含量測定復方益母草口服液中水蘇堿的含量測定利用雷氏鹽（硫氰酸鉻銨）作沉淀劑，在酸性介質中利用雷氏鹽（硫氰酸鉻銨）作沉淀劑，在酸性介質中可與大部分有機堿生成難溶于水的配合物與其它雜質可與大部分有機堿生成難溶于水的配合物與其它雜質分離。分離。 現(xiàn)在學習的是第14頁，共111頁15樣品的分離純化樣品的分離純化 （二）蒸餾法（二）蒸餾法適用于具適用于具揮發(fā)性揮發(fā)性的待測組分，如揮發(fā)油、小的待測組分，如揮發(fā)油、小分子的生物堿、丹皮酚等分子的生物堿、丹皮酚等最常用水蒸氣蒸餾法最常用水蒸氣蒸餾法共水蒸餾法共水蒸餾法通水蒸氣蒸餾法通水蒸氣蒸餾法水上蒸餾法水上蒸餾法利用鹽

12、析作用，提高蒸餾效果利用鹽析作用，提高蒸餾效果現(xiàn)在學習的是第15頁，共111頁16樣品的分離純化樣品的分離純化 （三）液（三）液- -液萃取法液萃取法直接萃取法直接萃取法萃取劑的選擇萃取劑的選擇 親脂性有機溶劑：如苯、氯仿或乙醚親脂性有機溶劑：如苯、氯仿或乙醚弱親脂性的溶劑：如乙酸乙酯、正丁醇等弱親脂性的溶劑：如乙酸乙酯、正丁醇等多次萃取（多次萃?。?-43-4次）次）調整水相酸度，提取有機酸、有機堿調整水相酸度，提取有機酸、有機堿利用鹽析作用，提高提取率利用鹽析作用，提高提取率原理：原理：利用試樣中被測成分利用試樣中被測成分與干擾成分在有機溶劑（萃取與干擾成分在有機溶劑（萃取劑）中的劑）中的

13、溶解度溶解度不同，通過不同，通過多次萃取達到分離凈化的目的多次萃取達到分離凈化的目的?，F(xiàn)在學習的是第16頁，共111頁17樣品的分離純化樣品的分離純化 （三）（三）液液- -液萃取法液萃取法離子對萃取法離子對萃取法 水相酸度的控制水相酸度的控制 離子對試劑的選擇離子對試劑的選擇BH+（水相）（水相）+ In-(水相水相) BH+In-（水相）（水相） BH+In-（有機相）（有機相） 生物堿生物堿離子對試劑：酸性染料，如離子對試劑：酸性染料，如BTB,BCG適合于高度電離的有機酸、堿適合于高度電離的有機酸、堿化合物的萃取化合物的萃取弱極性離子對弱極性離子對現(xiàn)在學習的是第17頁，共111頁18樣

14、品的分離純化樣品的分離純化 （四）色譜法（層析法）（四）色譜法（層析法）分離原理：吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜分離原理：吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜、凝膠色譜、凝膠色譜按操作方式：柱色譜、薄層色譜、紙色譜按操作方式：柱色譜、薄層色譜、紙色譜裝柱方法：濕法裝柱、干法裝柱裝柱方法：濕法裝柱、干法裝柱微柱色譜（固相萃取微柱色譜（固相萃取LSE） 現(xiàn)在學習的是第18頁，共111頁19樣品的分離純化樣品的分離純化 LSE常用凈化劑（填料）常用凈化劑（填料）硅膠硅膠：酸性吸附劑酸性吸附劑，適用于中性或酸性成分的層析，適用于中性或酸性成分的層析，強烈保留堿性化合物。，強烈保留堿性化合物。洗脫順序：極

15、性小洗脫順序：極性小大大氧化鋁氧化鋁：帶有堿性，分離一些堿性中草藥成分，不宜用：帶有堿性，分離一些堿性中草藥成分，不宜用于醛、酮、內(nèi)酯等類型的化合物分離于醛、酮、內(nèi)酯等類型的化合物分離 中性、酸性氧化鋁：適用于酸性成分的分離中性、酸性氧化鋁：適用于酸性成分的分離現(xiàn)在學習的是第19頁，共111頁20鍵合相硅膠鍵合相硅膠（C C1818或或ODSODS）: :分開脂溶性和水溶性成分分開脂溶性和水溶性成分操作程序：操作程序：柱的活化；上樣；清洗；洗脫柱的活化；上樣；清洗；洗脫洗脫順序：極性大洗脫順序：極性大小小大孔樹脂大孔樹脂分為極性（丙烯酰胺聚合物分為極性（丙烯酰胺聚合物 ）和非極性（苯乙）和非極

16、性（苯乙烯和二乙烯苯的共聚物）型烯和二乙烯苯的共聚物）型 使用前需要用有機溶劑除去雜質，有時還需用使用前需要用有機溶劑除去雜質，有時還需用酸、堿清洗酸、堿清洗 現(xiàn)在學習的是第20頁，共111頁21聚酰胺聚酰胺：與溶質形成：與溶質形成氫鍵氫鍵而產(chǎn)生吸附作用，常用含酚、而產(chǎn)生吸附作用，常用含酚、酸、醌類藥物樣品液的凈化分離。酸、醌類藥物樣品液的凈化分離。硅藻土、纖維素硅藻土、纖維素：親水型填料親水型填料，以水基質液作為固定相，以水基質液作為固定相，與水不混溶的有機溶劑為流動相的，與水不混溶的有機溶劑為流動相的分配色譜分配色譜離子交換樹脂離子交換樹脂：用于除去樣品中的：用于除去樣品中的離子離子及萃取

17、及萃取可離解化合可離解化合物物( (弱酸、弱堿藥物弱酸、弱堿藥物) )活性炭活性炭：非極性吸附劑非極性吸附劑使用前需先用稀鹽酸洗滌，其次用乙醇洗，再以水洗凈，于使用前需先用稀鹽酸洗滌，其次用乙醇洗，再以水洗凈，于8080干干燥燥分開水溶性芳香族物質與脂肪族物質，單糖與多糖，氨基酸分開水溶性芳香族物質與脂肪族物質，單糖與多糖，氨基酸與多肽與多肽現(xiàn)在學習的是第21頁，共111頁22樣品的分離純化樣品的分離純化 （五）固相微萃?。ㄎ澹┕滔辔⑤腿?（SPME） 集萃取、濃縮、進樣于一體的樣品前處理新方法集萃取、濃縮、進樣于一體的樣品前處理新方法現(xiàn)在學習的是第22頁，共111頁23樣品的分離純化樣品的分

18、離純化 （六）消化法（六）消化法測定中藥制劑中的無機元素測定中藥制劑中的無機元素濕法消化濕法消化硝酸高氯酸法：適用于血，尿、組織等生物樣品和適用于血，尿、組織等生物樣品和含動植物藥制劑的破壞含動植物藥制劑的破壞 對含氮雜環(huán)類有機物破壞不夠完全對含氮雜環(huán)類有機物破壞不夠完全 硝酸硫酸法：與硫酸形成不溶性硫酸鹽的金屬離子的與硫酸形成不溶性硫酸鹽的金屬離子的測定，不宜采有此法。測定，不宜采有此法。 硫酸硫酸鹽法：常用于：常用于含砷或銻含砷或銻的有機樣品的破的有機樣品的破壞，破壞后得到三價砷或銻。壞，破壞后得到三價砷或銻。 現(xiàn)在學習的是第23頁，共111頁24樣品的分離純化樣品的分離純化 控制溫度在控

19、制溫度在420420以下以下灰化完全，切勿棄去不易溶灰分灰化完全，切勿棄去不易溶灰分不適用于含易揮發(fā)性金屬不適用于含易揮發(fā)性金屬（如汞、砷等，）有機（如汞、砷等，）有機樣品的破壞。樣品的破壞。 灼燒灰化(+Na2CO3/MgO)供試品供試品 灰分灰分干法消化干法消化現(xiàn)在學習的是第24頁，共111頁25 重量分析法：揮發(fā)法、萃取法和沉淀法重量分析法：揮發(fā)法、萃取法和沉淀法 一、化學分析法一、化學分析法適用于適用于含量較高含量較高的成分及的成分及無機成分無機成分的測定的測定滴定分析法滴定分析法 酸堿滴定法酸堿滴定法 沉淀滴定法沉淀滴定法配位滴定法配位滴定法氧化還原滴定法氧化還原滴定法 現(xiàn)在學習的是

20、第25頁，共111頁26重量分析重量分析揮發(fā)法：揮發(fā)法：又叫汽化或干燥法又叫汽化或干燥法如水分測定及干燥失重測定如水分測定及干燥失重測定萃取法：萃取法：又稱為提取法或抽取法又稱為提取法或抽取法如冰片散中冰片的含量測定如冰片散中冰片的含量測定沉淀法沉淀法：如苦參片中苦參總堿的含量測定：如苦參片中苦參總堿的含量測定現(xiàn)在學習的是第26頁，共111頁27滴定分析滴定分析酸堿滴定法：酸堿滴定法：測定生物堿、有機酸、內(nèi)酯類測定生物堿、有機酸、內(nèi)酯類 沉淀滴定法沉淀滴定法銀量法：生物堿的氫鹵酸鹽及有機鹵化物銀量法：生物堿的氫鹵酸鹽及有機鹵化物四苯硼鈉法：四苯硼鈉法：+生物堿生物堿白色沉淀白色沉淀亞鐵氰化鉀法

21、亞鐵氰化鉀法配位滴定法配位滴定法（EDTA法和硫氰酸銨法）：測定鞣質法和硫氰酸銨法）：測定鞣質、生物堿及含、生物堿及含Ca2+、Mg2+、Fe3+、Hg2+等等礦物類制礦物類制劑劑的含量的含量氧化還原滴定法：氧化還原滴定法：酚類、糖類及礦物藥中酚類、糖類及礦物藥中Fe、As等等成分的中藥制劑；分為碘量法、高錳酸鉀法和亞硝酸鈉成分的中藥制劑；分為碘量法、高錳酸鉀法和亞硝酸鈉法等法等現(xiàn)在學習的是第27頁，共111頁28二、紫外可見分光光度法二、紫外可見分光光度法現(xiàn)在學習的是第28頁，共111頁290.575光源光源單色器單色器吸收池吸收池檢測器檢測器信號處理及顯示信號處理及顯示紫外可見分光光度法紫

22、外可見分光光度法紫外分光光度計基本構造紫外分光光度計基本構造現(xiàn)在學習的是第29頁，共111頁30紫外可見分光光度法紫外可見分光光度法（一）單波長分光光度法（一）單波長分光光度法吸收系數(shù)法（CHP最為常用）最為常用）A=ECLA=ECL（朗伯朗伯-比爾定律：比爾定律：物質對物質對單色光單色光吸收特性與吸收特性與濃濃度、液層厚度度、液層厚度關系定律關系定律 ）對照品比較法對照品溶液濃度應與供試品濃度接近（對照品溶液濃度應與供試品濃度接近（1001001010）標準曲線法要求：要求： 選擇被測成分的選擇被測成分的max為測定波長為測定波長，而共存組分在此，而共存組分在此波長處基本無吸收，并控制供試液

23、的波長處基本無吸收，并控制供試液的吸收度讀數(shù)在吸收度讀數(shù)在0.3-0.7之間之間現(xiàn)在學習的是第30頁，共111頁31吸收系數(shù)法吸收系數(shù)法 測定供試品溶液在規(guī)定波長處的吸收度測定供試品溶液在規(guī)定波長處的吸收度A A，根據(jù)，根據(jù)A=clA=cl，若，若l l和吸光系數(shù)和吸光系數(shù)或或 已知，即可求出已知，即可求出被測物的濃度。被測物的濃度。 %11cmElEAClACcm%11或%11cmE例例: :小檗堿溶液在小檗堿溶液在345nm345nm處的處的 為為728728，現(xiàn)測的，現(xiàn)測的某小檗堿溶液在某小檗堿溶液在345nm345nm出的吸收度為出的吸收度為0.58240.5824，計，計算該小檗堿溶

24、液的濃度。算該小檗堿溶液的濃度?，F(xiàn)在學習的是第31頁，共111頁32標準曲線法標準曲線法 從標準品吸光度從標準品吸光度- -濃度曲線求得樣品溶液的濃度濃度曲線求得樣品溶液的濃度 KCAKCA或對照品對照法對照品對照法在一定線性范圍內(nèi)根據(jù)在一定線性范圍內(nèi)根據(jù)Lambert-Beer Lambert-Beer 定律溶液的濃定律溶液的濃度和吸光度存在以下關系度和吸光度存在以下關系樣標樣標CCAA現(xiàn)在學習的是第32頁，共111頁33紫外可見分光光度法紫外可見分光光度法（二）計算分光光度法（二）計算分光光度法雙波長分光光度法雙波長分光光度法（等吸收點法、系數(shù)倍率法）（等吸收點法、系數(shù)倍率法）三波長法三波

25、長法導數(shù)光譜法導數(shù)光譜法 一般應用于供試品溶液中含有一般應用于供試品溶液中含有2 2中或中或2 2種以上的組種以上的組分的含量測定。分的含量測定。差示光譜法差示光譜法 利用比樣品濃度稍低的標準品作為空白利用比樣品濃度稍低的標準品作為空白, ,進行測定及計算的方法進行測定及計算的方法. .現(xiàn)在學習的是第33頁，共111頁34為干擾組分的吸收光譜為待測組分的吸收光譜為混合組分的吸收光譜關鍵步驟：選擇1和2的基本條件干擾組分在1 1和2 2處應具有相同的吸收度待測組分在這兩個波長處的吸收光度差值應足夠大波長波長(1、2)LCAAAbbbbb)(1212雙波長法等吸收點法雙波長法等吸收點法a bc計算

26、分光光度法現(xiàn)在學習的是第34頁，共111頁35分析步驟 選擇雙波長（1、2） 繪制標準曲線 對濃度作圖（回歸） 樣品測定 1、2，分別測定1及2 應用條件：吸收曲線有峰和谷雙波長法等吸收點法雙波長法等吸收點法a bc計算分光光度法現(xiàn)在學習的是第35頁，共111頁36紫外可見分光光度法紫外可見分光光度法紫外光譜法中對儀器和試劑的要求紫外光譜法中對儀器和試劑的要求（1 1）儀器的校正和檢定：包括波長精度、吸收度的準確性、）儀器的校正和檢定：包括波長精度、吸收度的準確性、雜散光等。雜散光等。 （2 2）對溶劑的要求：）對溶劑的要求：用用1cm1cm石英池盛裝溶劑，以空氣為空白，測石英池盛裝溶劑，以空

27、氣為空白，測定其吸光度，溶劑和吸收池的吸光度在定其吸光度，溶劑和吸收池的吸光度在220nm240nm220nm240nm范圍內(nèi)不范圍內(nèi)不得超過得超過0.400.40；在；在241nm250nm241nm250nm范圍內(nèi)不得超過范圍內(nèi)不得超過0.200.20；在；在251nm251nm300nm300nm的范圍內(nèi)不得超過的范圍內(nèi)不得超過0.100.10；300nm300nm以上不得超過以上不得超過0.050.05?，F(xiàn)在學習的是第36頁，共111頁37三、薄層掃描法（三、薄層掃描法（TLCSTLCS） 薄層掃描法是指薄層色譜斑點的色譜掃描，薄層色譜薄層掃描法是指薄層色譜斑點的色譜掃描，薄層色譜掃描

28、是指固定波長，斑點移動，測定掃描是指固定波長，斑點移動，測定A-tA-t或或F-lF-l曲線。根據(jù)曲線。根據(jù)薄層掃描的測定方式分為薄層掃描的測定方式分為薄層吸收掃描法薄層吸收掃描法和和薄層熒光掃描薄層熒光掃描法法二種方法。二種方法。現(xiàn)在學習的是第37頁，共111頁38薄層掃描法（薄層掃描法（TLCSTLCS）1.1.薄層吸收掃描法薄層吸收掃描法 光源：光源：鎢燈和氘燈；鎢燈和氘燈； 靈敏度：靈敏度：在在200-800nm200-800nm波長范圍內(nèi)選擇合適波長進波長范圍內(nèi)選擇合適波長進行測定，其靈敏度可達行測定，其靈敏度可達ngng級；級； 適用范圍：適用范圍：適用于在可見、紫外區(qū)有吸收的物質

29、，及適用于在可見、紫外區(qū)有吸收的物質，及通過色譜前或色譜后衍生成上述化合物的樣品組分。通過色譜前或色譜后衍生成上述化合物的樣品組分?，F(xiàn)在學習的是第38頁，共111頁39薄層掃描法（薄層掃描法（TLCSTLCS） 2.2.薄層熒光掃描法薄層熒光掃描法 光源：光源：氖燈或汞燈氖燈或汞燈; ; 靈敏度：靈敏度：最低可測到最低可測到10-50pg;10-50pg; 適用范圍：適用范圍：適合于本身具有熒光或經(jīng)過適當處理適合于本身具有熒光或經(jīng)過適當處理后可產(chǎn)生熒光的物質的測定。后可產(chǎn)生熒光的物質的測定?，F(xiàn)在學習的是第39頁，共111頁40四、氣相色譜法（四、氣相色譜法（GCGC） 基本原理基本原理 氣相色

30、譜法（氣相色譜法（GCGC）是將氣化后的試樣由）是將氣化后的試樣由載氣載氣（流（流動相）帶入色譜柱，根據(jù)各組分在流動相和固定相間動相）帶入色譜柱，根據(jù)各組分在流動相和固定相間作用的不同而分離，并隨載氣依次流出色譜柱，經(jīng)檢作用的不同而分離，并隨載氣依次流出色譜柱，經(jīng)檢測器檢測，利用測器檢測，利用保留值保留值進行定性，進行定性，色譜峰面積或峰高色譜峰面積或峰高進行定量的分析方法。進行定量的分析方法。 現(xiàn)在學習的是第40頁，共111頁41氣相色譜法（氣相色譜法（GCGC） 基本原理基本原理 現(xiàn)在學習的是第41頁，共111頁42氣相色譜法（氣相色譜法（GCGC） 基本概念基本概念 色譜峰：由電信號強度

31、對時間作圖所繪制的色譜峰：由電信號強度對時間作圖所繪制的曲線。（正態(tài)分布曲線）曲線。（正態(tài)分布曲線） 不正常的色譜峰：前延峰、拖尾峰不正常的色譜峰：前延峰、拖尾峰 常用定量參數(shù)：峰高、峰面積常用定量參數(shù)：峰高、峰面積 常用定性參數(shù)：峰位常用定性參數(shù)：峰位 用于衡量柱效：峰寬用于衡量柱效：峰寬 現(xiàn)在學習的是第42頁，共111頁43氣相色譜法（氣相色譜法（GCGC） 基本概念基本概念 基線：在操作條件下，沒有組分流出時基線：在操作條件下，沒有組分流出時的流出曲線，橫軸直線。的流出曲線，橫軸直線。 保留值保留值 保留時間保留時間t tR R 保留體積保留體積V VR R 死時間死時間t t0 0 死

32、體積死體積V V0 0 調整保留時間調整保留時間ttR R 調整調整保留體積保留體積VVR R 現(xiàn)在學習的是第43頁，共111頁44現(xiàn)在學習的是第44頁，共111頁45氣相色譜法（氣相色譜法（GCGC） 塔板理論塔板理論 塔板理論將色譜柱看作一個分餾塔塔板理論將色譜柱看作一個分餾塔，待分離組分在分餾塔的塔板間移動，待分離組分在分餾塔的塔板間移動，在每一個塔板內(nèi)組分分子在固定相，在每一個塔板內(nèi)組分分子在固定相和流動相之間形成平衡，隨著流動相和流動相之間形成平衡，隨著流動相的流動，組分分子不斷從一個塔板移的流動，組分分子不斷從一個塔板移動到下一個塔板，并不斷形成新的平動到下一個塔板，并不斷形成新的

33、平衡。一個色譜柱的塔板數(shù)越多，則其衡。一個色譜柱的塔板數(shù)越多，則其分離效果就越好分離效果就越好 現(xiàn)在學習的是第45頁，共111頁46氣相色譜法（氣相色譜法（GCGC） 柱效指標柱效指標理論塔板數(shù)理論塔板數(shù)n n及理論塔板高度及理論塔板高度H H 衡量色譜柱分離效果的參數(shù)：理論衡量色譜柱分離效果的參數(shù)：理論塔板數(shù)塔板數(shù)n n。10105 5-10-106 6 在一定高度內(nèi)，組分可以在兩項在一定高度內(nèi)，組分可以在兩項中達到分配平衡，次高度為理論塔板中達到分配平衡，次高度為理論塔板高度。高度。 現(xiàn)在學習的是第46頁，共111頁47氣相色譜法（氣相色譜法（GCGC） 柱效指標柱效指標理論塔板數(shù)理論塔板

34、數(shù)n n及理論塔板高度及理論塔板高度H H 理理HLn理理或nLH/22212)(16)(54. 5)(WtWttnRRR理現(xiàn)在學習的是第47頁，共111頁48氣相色譜法（氣相色譜法（GCGC） 柱效指標柱效指標 1b2b1R2R)(2WWttR 指待測峰與其他峰、內(nèi)標峰或特定的雜質指待測峰與其他峰、內(nèi)標峰或特定的雜質對照峰之間的分離情況。對照峰之間的分離情況。分離度的計算分離度的計算完全未分開相鄰兩峰完全分離標準基本分離0 . 15 . 10 . 1RRR衡量色譜分離條件優(yōu)劣的參數(shù)衡量色譜分離條件優(yōu)劣的參數(shù)現(xiàn)在學習的是第48頁，共111頁49氣相色譜法（氣相色譜法（GCGC）適用范圍適用范圍

35、 揮發(fā)油及其它揮發(fā)性組分揮發(fā)油及其它揮發(fā)性組分：冰片、桉葉素、樟腦、：冰片、桉葉素、樟腦、丁香酚、龍腦等。丁香酚、龍腦等。 中藥制劑含水量、含醇量中藥制劑含水量、含醇量系統(tǒng)適用性試驗系統(tǒng)適用性試驗1.1.理論塔板數(shù)理論塔板數(shù) n5.54(tR/W1/2)2 不得低于最小理論塔板數(shù)；柱長，柱填充、載體性不得低于最小理論塔板數(shù)；柱長，柱填充、載體性能等有影響。能等有影響。 現(xiàn)在學習的是第49頁，共111頁50氣相色譜法（氣相色譜法（GCGC）系統(tǒng)適用性試驗系統(tǒng)適用性試驗2.2.分離度分離度 R=2(tR1-tR2)/(W1+W2) R1.5 R1.5（兩峰完全分離）（兩峰完全分離）3.3.重復性重

36、復性 RSD2.0 RSD2.0 (n=5)(n=5)4.4.拖尾因子拖尾因子 T=W0.05h/2d1(d(d1 1峰極大至峰前沿之間的距離峰極大至峰前沿之間的距離) ) 峰高法定量時峰高法定量時 1.05T0.95 1.05T0.95 現(xiàn)在學習的是第50頁，共111頁51氣相色譜法（氣相色譜法（GCGC） 實驗條件的選擇實驗條件的選擇一、固定相的選擇一、固定相的選擇氣氣-液分配色譜柱液分配色譜柱固定液的選擇固定液的選擇按相似相溶原則選擇按相似相溶原則選擇按組分性質的主要差別選擇按組分性質的主要差別選擇 現(xiàn)在學習的是第51頁，共111頁52氣相色譜法（氣相色譜法（GCGC）按相似相溶原則選擇

37、按相似相溶原則選擇 固定液與被測組分極性固定液與被測組分極性“相似相溶相似相溶” 非極性組分非極性組分選非極性固定液，選非極性固定液， 按沸點順序出柱，低沸點的先出柱按沸點順序出柱，低沸點的先出柱 中等極性組分中等極性組分選中等極性固定液，選中等極性固定液， 基本按沸點順序出柱基本按沸點順序出柱 強極性組分強極性組分選極性固定液選極性固定液 按極性順序出柱，極性強的后出柱按極性順序出柱，極性強的后出柱現(xiàn)在學習的是第52頁，共111頁53氣相色譜法（氣相色譜法（GCGC）按組分性質的主要差別選擇按組分性質的主要差別選擇 組分以沸點差別為主組分以沸點差別為主 選非極性固定液選非極性固定液 按沸點順

38、序出柱、沸點低的先出柱按沸點順序出柱、沸點低的先出柱 組分的極性差別為主組分的極性差別為主 選極性固定液選極性固定液 按極性強弱出柱、極性弱的先出柱按極性強弱出柱、極性弱的先出柱例：苯（例：苯（80.10C），環(huán)己烷（），環(huán)己烷（80.70C）選非極性柱選非極性柱 分不開；分不開；選中強極性柱選中強極性柱 較好分離，環(huán)己烷先出柱較好分離，環(huán)己烷先出柱現(xiàn)在學習的是第53頁，共111頁54氣相色譜法（氣相色譜法（GCGC） 實驗條件的選擇實驗條件的選擇一、固定相的選擇一、固定相的選擇2.氣氣-固分配色譜柱固分配色譜柱固定相的選擇固定相的選擇吸附劑：活性炭（非極性）吸附劑：活性炭（非極性） 硅膠，硅

39、膠，AlAl2 2O O3 3（極性，吸附力強）（極性，吸附力強） 分子篩：吸附分子篩：吸附+ +分子篩分子篩高分子多孔微球：高分子多孔微球：GDXGDX有機合成高分子聚合物、吸附有機合成高分子聚合物、吸附+ +分配機制分配機制 現(xiàn)在學習的是第54頁，共111頁55氣相色譜法（氣相色譜法（GCGC） 實驗條件的選擇實驗條件的選擇二、柱溫的選擇二、柱溫的選擇 沸點 固定液配比 %柱溫高（300-400）低 1-5200-250200-3005-10150-180100-20010-15平均 2/3低高 15-2550以下根據(jù)樣品的沸點選擇現(xiàn)在學習的是第55頁，共111頁56氣相色譜法（氣相色譜法

40、（GCGC） 實驗條件的選擇實驗條件的選擇三、載氣的選擇三、載氣的選擇柱效、柱壓、靈敏度柱效、柱壓、靈敏度 流速流速20-80mL/min20-80mL/min低流速低流速 氮氣氮氣* *高流速高流速 氫氣氫氣 氦氣氦氣熱導檢測器熱導檢測器 氫氣氫氣 氦氣氦氣氫焰檢測器、電子捕獲檢測器氫焰檢測器、電子捕獲檢測器 氮氣氮氣 現(xiàn)在學習的是第56頁，共111頁57氣相色譜法（氣相色譜法（GCGC） 實驗條件的選擇實驗條件的選擇 四、其他條件四、其他條件氣化室（進樣口）溫度：氣化室（進樣口）溫度： 不超過沸點不超過沸點50 50 高于柱溫高于柱溫30-50 30-50 檢測室溫度：檢測室溫度： 高于柱

41、溫高于柱溫3030左右左右進樣量：進樣量： 氣體氣體0.1-1mL 0.1-1mL 液體液體 0.2-1L0.2-1L 現(xiàn)在學習的是第57頁，共111頁58氣相色譜法（氣相色譜法（GCGC） 實驗條件的選擇實驗條件的選擇 五、檢測器五、檢測器熱導檢測器（熱導檢測器（TCDTCD）氫焰離子化檢測器（氫焰離子化檢測器（FIDFID）氮磷檢測器（氮磷檢測器（NPDNPD）電子捕獲檢測器（電子捕獲檢測器（ECDECD） 現(xiàn)在學習的是第58頁，共111頁59氣相色譜法（氣相色譜法（GCGC） 定量分析方法定量分析方法峰面積的測量峰面積的測量正常峰正常峰不對稱峰不對稱峰自動求和（自動積分儀或色譜工作站）：

42、直接給自動求和（自動積分儀或色譜工作站）：直接給出出A A，h h，W W1/21/2 21605. 1WhA)(21605. 185. 015. 0WWhA現(xiàn)在學習的是第59頁，共111頁60氣相色譜法（氣相色譜法（GCGC） 定量分析方法定量分析方法 歸一化法歸一化法外標法外標法 校正因子內(nèi)標法校正因子內(nèi)標法 標準溶液加入法標準溶液加入法常用的定量分析方法常用的定量分析方法現(xiàn)在學習的是第60頁，共111頁61氣相色譜法（氣相色譜法（GCGC） 定量分析方法定量分析方法定量校正因子定量校正因子 定量）（或不可以直接用同一檢測器響應不同相同量的不同物質對于不同質對于不同檢測器響應前提：相同量的

43、同種物iiiACm現(xiàn)在學習的是第61頁，共111頁62氣相色譜法（氣相色譜法（GCGC） 定量分析方法定量分析方法絕對校正因子絕對校正因子 iiiiiiAmfAfm關）分性質、儀器靈敏度有絕對校正因子（與組if的量或質量進入檢測器中的物質im現(xiàn)在學習的是第62頁，共111頁63氣相色譜法（氣相色譜法（GCGC） 定量分析方法定量分析方法相對校正因子相對校正因子 siisssiisimimAmAAmAmfff作條件變化無關）相對校正因子（與操mifsiAAsi和測混勻進樣基準物純品過程：精稱siismissiisimmAAfAfAfmm現(xiàn)在學習的是第63頁，共111頁64氣相色譜法（氣相色譜法（

44、GCGC） 定量分析方法定量分析方法校正因子內(nèi)標法校正因子內(nèi)標法校正因子的計算校正因子的計算取內(nèi)標物和待測組分的對照液進樣測定取內(nèi)標物和待測組分的對照液進樣測定A A取含有內(nèi)標物的供試品溶液進樣測定取含有內(nèi)標物的供試品溶液進樣測定A A RRSSSSRRsRCACAAWAWfff/SsXXCAAfC現(xiàn)在學習的是第64頁，共111頁65氣相色譜法（氣相色譜法（GCGC） 定量分析方法定量分析方法 對內(nèi)標物的基本要求1.1.內(nèi)標物是原樣品中不含有的組分內(nèi)標物是原樣品中不含有的組分2.2.內(nèi)標物的保留時間應與待測組分相近，但彼此能完全內(nèi)標物的保留時間應與待測組分相近，但彼此能完全分離分離(R1.5)

45、(R1.5)3.3.內(nèi)標物必須是純度合乎要求的純物質內(nèi)標物必須是純度合乎要求的純物質現(xiàn)在學習的是第65頁，共111頁66氣相色譜法（氣相色譜法（GCGC） 定量分析方法定量分析方法 內(nèi)標法的優(yōu)缺點優(yōu)點優(yōu)點定量結果與進樣量的重復性無關定量結果與進樣量的重復性無關與其他組分是否出峰無關與其他組分是否出峰無關用于測定藥物中微量有效成分或雜質的含量用于測定藥物中微量有效成分或雜質的含量測定的結果較為準確測定的結果較為準確缺點缺點 操作程序較為麻煩操作程序較為麻煩 尋找合適的內(nèi)標物有困難尋找合適的內(nèi)標物有困難現(xiàn)在學習的是第66頁，共111頁67氣相色譜法（氣相色譜法（GCGC） 定量分析方法定量分析方法

46、歸一化法歸一化法 前提：試樣中所有組分都產(chǎn)生信號并能檢出色譜峰前提：試樣中所有組分都產(chǎn)生信號并能檢出色譜峰 依據(jù)：組分含量與峰面積成正比依據(jù)：組分含量與峰面積成正比 %100%100%11nniiiiiiiiifAfAfAfAfAfAC%100%100%1niiiiiAAAAAAC同系物或結構異構體現(xiàn)在學習的是第67頁，共111頁68氣相色譜法（氣相色譜法（GCGC） 定量分析方法定量分析方法外標法外標法 以待測組分純品為對照物，與試樣中待測組以待測組分純品為對照物，與試樣中待測組分的響應信號相比較進行定量的方法分的響應信號相比較進行定量的方法a a 工作曲線法工作曲線法b b 外標一點法外標

47、一點法c c 外標兩點法外標兩點法 現(xiàn)在學習的是第68頁，共111頁69氣相色譜法（氣相色譜法（GCGC） 定量分析方法定量分析方法外標法外標法 b b 外標一點法外標一點法 一種濃度對照物對比樣品中待測組分含量 前提：截距為0，對照品濃度與待測組分濃度接近 RRAAxCCx現(xiàn)在學習的是第69頁，共111頁70氣相色譜法（氣相色譜法（GC） 定量分析方法定量分析方法外標法外標法 c c 外標兩點法外標兩點法 前提：選取兩點對照品的濃度，需涵蓋待測前提：選取兩點對照品的濃度，需涵蓋待測濃度濃度 現(xiàn)在學習的是第70頁，共111頁71氣相色譜法（氣相色譜法（GCGC） 定量分析方法定量分析方法標準溶

48、液加入法標準溶液加入法精密稱量被測組分的對照品，配置成適當濃度的精密稱量被測組分的對照品，配置成適當濃度的對照品溶液，取一定量，精密加入到供試品溶液中對照品溶液，取一定量，精密加入到供試品溶液中，依據(jù)內(nèi)標法或外標法測定含量，再扣除加入對照，依據(jù)內(nèi)標法或外標法測定含量，再扣除加入對照品的含量，即得。品的含量，即得。 AxAisCxCxCx現(xiàn)在學習的是第71頁，共111頁72五、高效液相色譜法（五、高效液相色譜法（HPLC） 特點：高柱效、高靈敏度、高選擇性、分析速度快及特點：高柱效、高靈敏度、高選擇性、分析速度快及應用范圍廣應用范圍廣 適用于測定適用于測定 揮發(fā)性低、熱穩(wěn)定性差、分子量大的高分子

49、化合物及離揮發(fā)性低、熱穩(wěn)定性差、分子量大的高分子化合物及離子型化合物，如蛋白質、氨基酸、生物堿、甾體、類脂、子型化合物，如蛋白質、氨基酸、生物堿、甾體、類脂、核酸、維生素及無機鹽類。核酸、維生素及無機鹽類。 現(xiàn)在學習的是第72頁，共111頁73高效液相色譜法（高效液相色譜法（HPLC） 基本原理基本原理 以氣相色譜為基礎，在經(jīng)典液相色譜實驗和技術以氣相色譜為基礎，在經(jīng)典液相色譜實驗和技術基礎上建立的一種液相色譜法?；A上建立的一種液相色譜法。 1. 1.塔板理論塔板理論 2. 2.速率理論速率理論 理理nLH/22212)(16)(54. 5)(WtWttnRRR理現(xiàn)在學習的是第73頁，共11

50、1頁74項目項目HPLCHPLCLCLC柱長柱長/cm/cm10-2510-25100-200100-200內(nèi)徑內(nèi)徑/mm/mm2-102-1010-2510-25壓力壓力/MP/MP2-202-200.001-0.10.001-0.1柱效柱效/n/m/n/m2 2* *10103 3-5-5* *10103 32-502-50進樣量進樣量/g/g1010-6-6-10-10-2-21-101-10分離、分析時間分離、分析時間/h/h0.05-1.00.05-1.01-201-20裝置裝置自動化自動化手工手工檢測方法檢測方法檢測器檢測檢測器檢測收集后定性定量收集后定性定量HPLC與與LC的比較

51、：的比較：現(xiàn)在學習的是第74頁，共111頁75項目項目HPLCHPLCGCGC進樣方式進樣方式溶液溶液氣化或裂解氣化或裂解流動相流動相液態(tài)液態(tài)氣態(tài)氣態(tài)壓力壓力/MP/MP2-202-200.1-0.50.1-0.5柱溫柱溫常溫常溫常溫常溫-300-300分離原理分離原理吸附、分配、離子吸附、分配、離子交換、化學鍵合交換、化學鍵合吸附、分配吸附、分配應用范圍應用范圍大部分物質大部分物質易揮發(fā)、熱穩(wěn)定易揮發(fā)、熱穩(wěn)定HPLC與與GC的比較：的比較：現(xiàn)在學習的是第75頁，共111頁76高效液相色譜法（高效液相色譜法（HPLC）實驗條件的選擇實驗條件的選擇 色譜柱的選擇色譜柱的選擇 大多數(shù)藥物可用大多數(shù)

52、藥物可用C18反相（反相（ODS）柱）柱加以分離測加以分離測定；也可選用正相分配色譜柱（氨基柱、氰基柱）定；也可選用正相分配色譜柱（氨基柱、氰基柱）或硅膠吸附色譜柱等；或硅膠吸附色譜柱等； 解離藥物解離藥物可用離子對色譜、離子抑制色譜或離子可用離子對色譜、離子抑制色譜或離子交換色譜分離測定；交換色譜分離測定； 脂溶性藥物異構體脂溶性藥物異構體的分離測定可采用硅膠吸附色譜的分離測定可采用硅膠吸附色譜柱。柱。根據(jù)被分離物質的化學根據(jù)被分離物質的化學結構、極性和溶解度等結構、極性和溶解度等因素進行選擇。因素進行選擇?，F(xiàn)在學習的是第76頁，共111頁77高效液相色譜法（高效液相色譜法（HPLC）實驗條

53、件的選擇實驗條件的選擇 流動相的選擇流動相的選擇 反相鍵合相色譜反相鍵合相色譜常用流動相：常用流動相： 流動相流動相常用溶劑常用溶劑適用范圍適用范圍部分含水溶劑部分含水溶劑甲醇甲醇- -水、乙腈水、乙腈- -水水系統(tǒng)系統(tǒng)用于分離中等極性、用于分離中等極性、弱極性藥物弱極性藥物非水溶劑非水溶劑乙腈乙腈- -二氯甲烷、二氯甲烷、甲醇甲醇- -四氫呋喃等四氫呋喃等用于分離疏水性物質用于分離疏水性物質緩沖溶液緩沖溶液三乙胺磷酸鹽、磷三乙胺磷酸鹽、磷酸鹽、醋酸鹽溶液酸鹽、醋酸鹽溶液用于可溶于水并具可用于可溶于水并具可解離特性的化合物解離特性的化合物現(xiàn)在學習的是第77頁，共111頁78高效液相色譜法（高效

54、液相色譜法（HPLC）實驗條件的選擇實驗條件的選擇 流動相的選擇流動相的選擇 正相鍵合相色譜正相鍵合相色譜： 常采用飽和烷烴（如正已烷）中加入一種極性較大的常采用飽和烷烴（如正已烷）中加入一種極性較大的溶劑作為溶劑作為極性調節(jié)劑極性調節(jié)劑（如異丙醚），通過調節(jié)極性調（如異丙醚），通過調節(jié)極性調節(jié)劑的濃度改變?nèi)軇姸龋还?jié)劑的濃度改變?nèi)軇姸龋?常采用二元以上的混合溶劑系統(tǒng)。常采用二元以上的混合溶劑系統(tǒng)。 現(xiàn)在學習的是第78頁，共111頁79高效液相色譜法（高效液相色譜法（HPLC）實驗條件的選擇實驗條件的選擇 洗脫方式洗脫方式 等度洗脫：等度洗脫：同一分析周期內(nèi)流動相的組成保持恒同一分析周期內(nèi)流

55、動相的組成保持恒定，適用于組分數(shù)較少、性質差別不大的樣品。定，適用于組分數(shù)較少、性質差別不大的樣品。 梯度洗脫：梯度洗脫：在一個分析周期內(nèi)程序控制流動相的在一個分析周期內(nèi)程序控制流動相的組成（如溶劑極性、離子強度和組成（如溶劑極性、離子強度和pHpH值等），適用值等），適用于分析組分數(shù)多、性質相差較大的復雜混合物樣于分析組分數(shù)多、性質相差較大的復雜混合物樣品，使所有組分在適宜條件下獲得分離。品，使所有組分在適宜條件下獲得分離。 現(xiàn)在學習的是第79頁，共111頁80高效液相色譜法（高效液相色譜法（HPLC）實驗條件的選擇實驗條件的選擇 檢測器檢測器 UVUV或或UVDUVD：被測物有紫外吸收，流

56、動相的截止波：被測物有紫外吸收，流動相的截止波長小于檢測波長。長小于檢測波長。 FDFD：靈敏度高，熒光物質檢測。：靈敏度高，熒光物質檢測。 ELSDELSD：揮發(fā)性低于流動相的組分，糖類、高分子：揮發(fā)性低于流動相的組分，糖類、高分子化合物等；不能用含鹽流動相?；衔锏?；不能用含鹽流動相。 ECDECD、RIDRID、CLDCLD等等 現(xiàn)在學習的是第80頁，共111頁81檢測器檢測器特點特點最低檢測限最低檢測限適用范圍適用范圍紫外檢測器紫外檢測器（UVUV或或UVDUVD）: :可變可變波長型二極波長型二極管陣列檢測器管陣列檢測器 檢測有紫外吸收的物質檢測有紫外吸收的物質; ; 靈敏度較高靈敏

57、度較高, ,噪音低噪音低, ,線線性范圍寬性范圍寬, ,對流速和溫度波對流速和溫度波動不靈敏動不靈敏, ,可用于梯度洗脫可用于梯度洗脫. .1010-7-7-10-10-12-12g g用于芳烴、稠環(huán)芳用于芳烴、稠環(huán)芳烴、芳香氨基酸、烴、芳香氨基酸、核酸、甾體激素、核酸、甾體激素、羰基及其化合物等羰基及其化合物等熒光檢測器熒光檢測器(FD) (FD) 用于能產(chǎn)生熒光或其衍用于能產(chǎn)生熒光或其衍生物能發(fā)熒光的物質生物能發(fā)熒光的物質; ;靈敏度高于紫外檢測器靈敏度高于紫外檢測器1 11010-10-10g/mlg/ml用于氨基酸、多環(huán)用于氨基酸、多環(huán)芳烴、維生素、甾芳烴、維生素、甾體化合化物及酶等體

58、化合化物及酶等蒸發(fā)光散射檢蒸發(fā)光散射檢測器測器(ELSD)(ELSD)屬通用型檢測器屬通用型檢測器, ,理論上理論上可用于揮發(fā)性低于流動相可用于揮發(fā)性低于流動相的任何樣品組分的任何樣品組分; ; 檢測檢測靈敏度較低靈敏度較低, ,適用于流動相適用于流動相能揮發(fā)的色譜洗脫能揮發(fā)的色譜洗脫, ,不能用不能用含緩沖鹽的流動相含緩沖鹽的流動相用于檢測糖、高分用于檢測糖、高分子化合物、高級脂子化合物、高級脂肪酸、磷脂、維生肪酸、磷脂、維生素、氨基酸、甘油素、氨基酸、甘油三酯及甾體等幾十三酯及甾體等幾十類化合物類化合物現(xiàn)在學習的是第81頁，共111頁82電化學檢測器電化學檢測器(ECD)(ECD)用于能氧

59、化、還原的有用于能氧化、還原的有機物質的檢測，尤其適機物質的檢測，尤其適用于痕量組分的分析用于痕量組分的分析1 11010-12-12g/mlg/ml適用生物胺、酚、適用生物胺、酚、羰基化合物、巰羰基化合物、巰基化合物等基化合物等示差折光檢測器示差折光檢測器(RID)(RID)通用型檢測器通用型檢測器, ,利用組利用組分與流動相折射率之差分與流動相折射率之差進行檢測進行檢測. . 穩(wěn)定性好穩(wěn)定性好, ,操作方便操作方便. .靈敏度低靈敏度低, ,受環(huán)境溫度、流動相組受環(huán)境溫度、流動相組成等波動的影響大成等波動的影響大, ,不適不適合梯度洗脫合梯度洗脫1010-8-8g/mlg/ml尤其適合于糖

60、類尤其適合于糖類的檢測的檢測化學發(fā)光檢測器化學發(fā)光檢測器(CLD)(CLD)高選擇性、高靈敏度高選擇性、高靈敏度的新型檢測器的新型檢測器. . 設備設備簡單簡單, ,自身發(fā)光自身發(fā)光, ,無需光無需光源源, ,價格便宜價格便宜PgPg級級(10(10-12-12) )用于分析微量脂用于分析微量脂質、核酸、生物質、核酸、生物胺等胺等現(xiàn)在學習的是第82頁，共111頁83高效液相色譜法（高效液相色譜法（HPLC）實驗條件的選擇實驗條件的選擇 HPLCHPLC前處理前處理 流動相的處理：流動相的處理：溶劑的純化溶劑的純化：色譜純；：色譜純；流動相脫氣：流動相脫氣：常用超聲波振蕩脫氣；常用超聲波振蕩脫氣