食品中還原型抗壞血酸的測定

1、食品中還原型抗壞血酸的測定1 范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中抗壞血酸的分光光度法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于各類食品中的還原型抗壞血酸的測定。本標(biāo)準(zhǔn)不適用于脫氫行抗壞血酸的測定。2 原理在乙酸溶液中，抗壞血酸與固藍(lán)鹽 B 反應(yīng)生成黃色的草酰肼 2羥基丁酰內(nèi)酯衍生物，在最大吸收波長 420 處測定吸光度，與標(biāo)準(zhǔn)系列比較定量。3 試劑乙酸溶液（ 12%）：吸收 12mL冰乙酸，加水稀釋至100mL。乙酸溶液（ 2%）：吸收 2mL 冰乙酸，加水稀釋至100mL。乙二胺四乙酸二鈉溶液（ 35g/L ）：稱取 3.5g乙二胺四乙酸二鈉 C 10H14N2 O8Na·2H2O于水中，加熱使之溶解后，放冷，并稀釋至1

2、00 mL。蛋白沉淀劑3.4.1 乙酸鋅溶液（ 220g/L ）：稱取 22.0g322乙酸鋅 Zn(CH COO)·2H O, 加 3 mL冰乙酸溶于水，并稀釋至100 mL。亞鐵氰化鉀溶液（ 106g/L ）：稱取 10.6g 亞鐵氰化鉀 K 4Fe(CN)4·3H2O, 加水溶解至 100 mL。顯色劑：固藍(lán)鹽 B（Fast Blue Salt B ）溶液（ 2g/L ）：準(zhǔn)確稱取 0.3125g 固藍(lán)鹽 B，加水溶解于 100 mL。抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（ mL）：精密稱取 0.2000g 抗壞血酸，加 20 mL乙酸溶液（ 12%），溶解后移入 100 mL 棕色

3、容量瓶中，用水稀釋至刻度，混勻。此溶液每毫升相當(dāng)于抗壞血酸（ 10下冰箱內(nèi)貯存在 2d 內(nèi)穩(wěn)定）。抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)使用液（ 0.1g/L ）：用移液管精密吸取 mL 抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（ 2.0g/L ）于 100 mL棕色容量瓶內(nèi)，加 5 mL乙酸溶液（ 12%），用水稀釋至刻度，混勻。此溶液每毫升相當(dāng)于 100 g/mL 抗壞血酸（臨用時(shí)配制） 。4 儀器分光光度計(jì)。搗碎機(jī)。離心沉淀機(jī)。10mL 具塞玻璃比色管。5 分析步驟試樣溶液的制備非蛋白性食液體試樣：抗壞血酸含量在0.2g/L以下的試樣，混勻后可直接取樣測定；抗壞血酸含量在0.2g/L以上的試樣，用水適量稀釋后測定。水溶性固體試樣：準(zhǔn)

4、確稱取1.0g 5.0g 精確至 0.001g （含 0.2g/kg以下抗壞血酸）放入乳缽中，加5mL乙酸溶液（ 12%）研磨溶解后，移入100mL棕色容量瓶內(nèi)，加水稀釋至刻度。蔬菜、水果：稱取鮮樣可食部分 20.0g 50.0g 于搗碎機(jī)內(nèi)，加同倍量的乙酸溶液（ 12%）搗成勻漿。稱取 10.0g 20.0g 勻漿（含 0.2g/kg 以下抗壞血酸）于 100mL棕色容量瓶內(nèi)，加 5mL乙酸溶液（ 12%），用水稀釋至刻度，混勻。濾紙過濾，濾液備用。不易過濾的試樣可用離心機(jī)離心后，上清液供測定。蛋白性食品（奶粉、豆粉、乳飲料、強(qiáng)化食品等）：固體試樣混勻后精密稱取 5.0g 10.0g ，精確

5、至 0.001g ；液體試樣用移液管精密吸取于100mL棕色容量瓶內(nèi)。加10mL乙酸溶液（ 12%），乙酸鋅溶液（ 220g/L ）和亞鐵氰化鉀溶液（ 106g/L ）各，加水至刻度，混勻。將全部溶液移入離心管內(nèi)，以3000r/min離心 10min, 上清液供測定。同時(shí)取與處理試樣相同量的乙酸溶液、乙酸鋅溶液和亞鐵氰化鉀溶液，按同一方法做試劑空白試驗(yàn)。標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密吸取 0、 mL 抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)使用溶液，分別置于 25 mL 比色管中。各加 2 mL乙二胺四乙酸二鈉溶液（ 35g/L ）、 2mL乙酸溶液（ 2%）、 mL 固藍(lán)鹽 B 溶液（ 2g/L ），加水稀釋至刻度，混勻。室溫（

6、20 25）下放置 20min 后，移入 1cm比色皿內(nèi)，以零管為參比， 于波長 420nm處測量吸光度， 以標(biāo)準(zhǔn)各點(diǎn)吸光度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。試樣測定非蛋白試樣的測定：精密吸取按制備的試樣溶液（相當(dāng)于抗壞血酸200g 以下）于25 mL 比色管內(nèi)。以下按自“mL乙二胺四乙酸二鈉溶液（ 35g/L ） . ”起依法操作。試樣吸光度從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出抗壞血酸含量。蛋白試樣的測定：精密吸取按制備的試樣溶液 （約相當(dāng)于抗壞血酸 200g 以下）和等量試劑空白溶液（） ，各于 25 mL 比色管內(nèi)。各加乙二胺四乙酸二鈉溶液（ 35g/L ）、 mL 乙酸溶液（ 2%）、固藍(lán)鹽 B 溶液（ 2g/L ），加水稀釋至刻度，混勻。室溫（ 20 25）下放置 3min 后，移入 1cm比色皿內(nèi)，以試劑空白為參比，于波長 420nm處測量吸光度， 試樣吸光度從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出抗壞血酸含量。6 結(jié)果計(jì)算按下式計(jì)算Xc100V1m1000V2式中：X試樣中抗壞血酸的含量，單位為毫克每百克（毫克每百毫升）mg/100g(mg/100mL);c試樣測定液中抗壞血酸的含量，單位為微克（g）；m試樣質(zhì)量（