臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室制度

1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理制度1.0目的 建立臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的工作規(guī)范,確保分子診斷室正常工作。 2.0范圍 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室,包括試劑準(zhǔn)備間、標(biāo)本制備間、擴(kuò)增間的使用及管理。 3.0職責(zé) 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的工作人員必須遵守本文件的規(guī)定。 4.0內(nèi)容 4.1在進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室前,在隔離臺(tái)戴好頭套口罩,穿上鞋套與實(shí)驗(yàn)服。 4.2試劑準(zhǔn)備間 4.2.1配電房先打開(kāi)風(fēng)機(jī)(先開(kāi)送風(fēng)機(jī),再開(kāi)排風(fēng)機(jī)),再把空調(diào)系統(tǒng)打開(kāi)。關(guān)閉時(shí)的順序相反。 4.2.2其它室的用品不得帶入本室。 4.2.3從PCR實(shí)驗(yàn)室1號(hào)入口門進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室,到達(dá)試劑準(zhǔn)備間的緩沖間,脫下白色工作服,掛在

2、緩沖 間的左側(cè),在緩沖間的右側(cè)更換試劑準(zhǔn)備間的專用工作服(藍(lán)色),進(jìn)入試劑準(zhǔn)備間,實(shí)驗(yàn)中須戴一次性手套,手套常更換。 4.2.4打開(kāi)已滅菌的超凈臺(tái),通風(fēng)一段時(shí)間,排走臭氧。取出當(dāng)次實(shí)驗(yàn)需配制和使用的試劑,其余試 劑要立即收好放回冰箱內(nèi)。 4.2.5操作應(yīng)在冰上進(jìn)行。Taq酶盡量在配液的最后一步加入。應(yīng)減少dNTP反復(fù)凍融的次數(shù)。每次實(shí) 驗(yàn)后將槍調(diào)至最大量程。加模板前打開(kāi)廢液缸蓋,加完模板后務(wù)必蓋上廢液缸的蓋子。 4.2.6實(shí)驗(yàn)作業(yè)完成時(shí),應(yīng)及時(shí)清理工作臺(tái),做好實(shí)驗(yàn)登記,應(yīng)使用本室專用的記錄本和筆,打開(kāi)超 凈臺(tái)的紫外燈旋鈕到20分鐘處。使用過(guò)的離心管、吸頭須置于3%的HCl溶液中浸泡、消毒后方可

3、棄之。 4.2.7打開(kāi)傳遞窗門,墊上一次性手套,將配好的試劑放到傳遞窗里,關(guān)上傳遞窗門。 4.2.8在試劑緩沖間脫下工作服,穿上白色工作服。 4.3標(biāo)本制備間 4.3.1在標(biāo)本制備間的緩沖間,脫下白色工作服,換上標(biāo)本制備間專用的工作服(粉紅色),進(jìn)入標(biāo) 本制備間。 4.3.2打開(kāi)傳遞窗的門,取出配好的試劑,使用本區(qū)專用的加樣器和帶濾芯槍頭。 4.3.3實(shí)驗(yàn)作業(yè)完成時(shí),應(yīng)及時(shí)清理工作臺(tái),使用過(guò)的離心管、帶濾芯槍頭須置于3%的HCl溶液中浸 泡、消毒后方可棄之。 4.3.4做好實(shí)驗(yàn)登記,應(yīng)使用本室專用的記錄本和筆,打開(kāi)超凈臺(tái)的紫外燈旋鈕到20分鐘處。4.3.5 打開(kāi)傳遞窗門,墊上一次性手套,將配好

4、的試劑放到傳遞窗里,關(guān)上傳遞窗門。 4.3.6 提取基因組模板,提取過(guò)程中丟棄的槍頭、離心管和廢液請(qǐng)丟棄在此垃圾袋并于實(shí)驗(yàn)結(jié)束后立 即將垃圾袋扎口丟棄。提取質(zhì)?？上忍崛∫吧唾|(zhì)粒再提取突變型質(zhì)粒。每次提取工作完成后擦拭臺(tái)面。 4.3.7 在試劑緩沖間脫下工作服,穿上白色工作服。 4.4 擴(kuò)增間 4.4.1 在擴(kuò)增間的緩沖間,脫下白色工作服,換上擴(kuò)增間專用工作服(綠色)。 4.4.2 打開(kāi)傳遞窗門,取出配好的試劑,關(guān)上傳遞窗門。 4.4.3 打開(kāi)PCR 儀預(yù)熱20min 。 4.4.4 將反應(yīng)管放入PCR 儀中,關(guān)好門。 4.4.5 脫掉手套,設(shè)定程序,并命名。 4.4.6 結(jié)束后需待儀器冷卻后

5、方可取出PCR 儀里的試劑,取出時(shí)用鑷子將試劑條夾出,注意勿要使管 蓋打開(kāi),用三個(gè)PE 手套包好方可棄之。機(jī)器上不允許存放PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物,每次實(shí)驗(yàn)后請(qǐng)自行及時(shí)清理PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物。 4.4.7 結(jié)束實(shí)驗(yàn)后,到配電房先把空調(diào)系統(tǒng)關(guān)掉,再關(guān)掉排風(fēng)機(jī),之后關(guān)掉送風(fēng)機(jī)。 4.4.8 文件的處理:當(dāng)天所做的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,當(dāng)天拷到部門電腦上處理,復(fù)制一份將文件名改為記錄本 上的命名?？蓪⒃囼?yàn)結(jié)果導(dǎo)到PPT 上,并標(biāo)記。 4.5 傳遞窗的使用 4.5.1 傳遞窗每天早上滅菌20分鐘一次。當(dāng)天使用可不用再次滅菌。將試劑放到傳遞窗時(shí),在底下墊 上一層手套。 4.6 壓力監(jiān)控 4.6.1 每天早上空調(diào)運(yùn)行半小時(shí)后,

6、記錄各PCR 實(shí)驗(yàn)室的壓力差:試劑準(zhǔn)備間:510;標(biāo)本制備間: -5-10;擴(kuò)增間:<-10。 各緩沖間的壓力為+5. 4.7 超凈臺(tái)的擺放 移液槍架 常用的實(shí)驗(yàn)試劑 消毒液 廢液 缸 放置標(biāo)本的離心管 槍頭盒 槍頭盒4.8實(shí)驗(yàn)室衛(wèi)生管理 4.8.1禁止非工作人員進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室;參觀實(shí)驗(yàn)室等特殊情況須在實(shí)驗(yàn)室管理員協(xié)助下進(jìn)行。 4.8.2實(shí)驗(yàn)室內(nèi)各工作人員應(yīng)有個(gè)人防護(hù)意識(shí),進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室時(shí)應(yīng)更換工作服和鞋子,穿著整潔,不留長(zhǎng) 指甲,不佩戴首飾,長(zhǎng)發(fā)應(yīng)束于腦后;禁止在工作區(qū)飲食、吸煙、處理隱形眼鏡、化妝及儲(chǔ)存食物;禁止將個(gè)人物品帶入實(shí)驗(yàn)室;實(shí)驗(yàn)室內(nèi)應(yīng)避免手口,手眼,手鼻接觸,以防止間接感染。 4.

7、8.3實(shí)驗(yàn)結(jié)束后仍需保留使用的物質(zhì),應(yīng)移入具塞的容器中,并做好標(biāo)識(shí)標(biāo)簽,并寫(xiě)清楚名稱、濃度、 配制日期、儲(chǔ)存溫度、有效期和配制人,并放置于相應(yīng)保存條件下;勿置室溫過(guò)夜。 4.8.4每天配制使用濃度的消毒液,放于固定地點(diǎn),用于污染時(shí)消毒用,應(yīng)定期更換消毒液品種。 4.8.5每天上班8點(diǎn)45分先關(guān)實(shí)驗(yàn)室紫外燈,然后開(kāi)啟風(fēng)扇,打開(kāi)實(shí)驗(yàn)室走廊窗戶。每天9點(diǎn)前每間 負(fù)責(zé)人填寫(xiě)冰箱溫濕度記錄表。 4.8.6下午4點(diǎn)45分每間負(fù)責(zé)人填寫(xiě)實(shí)驗(yàn)室及冰箱溫濕度記錄表,清理實(shí)驗(yàn)室衛(wèi)生,檢查實(shí)驗(yàn)室垃圾 及廢液缸槍尖,生物垃圾放置于生物安全垃圾桶內(nèi),通知專門的垃圾轉(zhuǎn)運(yùn)車進(jìn)行清除。在生物 安全垃圾桶周邊噴灑84消毒液(按

8、1:9或者1:10比例配制)。 4.8.7每日衛(wèi)生打掃完后,在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)噴灑84消毒液,噴灑完,待20分鐘過(guò)后,對(duì)實(shí)驗(yàn)室儀器表面 及實(shí)驗(yàn)臺(tái)面要用干布擦拭一遍,再用清水清洗一遍,防止儀器被腐蝕。MX3000P儀器反應(yīng)孔用 75%酒精棉球擦拭,擦拭完后用清水擦拭。 4.8.8關(guān)閉風(fēng)扇,開(kāi)啟紫外燈,過(guò)夜。關(guān)閉實(shí)驗(yàn)室走廊窗戶,噴灑84消毒液。 4.8.9第一、二間實(shí)驗(yàn)室的3%鹽酸在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)配制,由當(dāng)周值日人員負(fù)責(zé)。 4.8.10實(shí)驗(yàn)服的清洗時(shí)間為每月的1、2、3、15、16、17日,1、15日洗第一間實(shí)驗(yàn)服,2、16日洗第 二間實(shí)驗(yàn)服,3、17日洗第三間實(shí)驗(yàn)服,遇節(jié)假日順延。 4.8.11每周對(duì)回風(fēng)口過(guò)濾網(wǎng)進(jìn)行清洗,由當(dāng)周值日人員負(fù)責(zé)。 4.8.12如遇加班,以上由加班人員負(fù)責(zé);若有請(qǐng)假,請(qǐng)假人員需與其他人員協(xié)商調(diào)整,否則視為未執(zhí) 行。 4.8.13以上執(zhí)行情況每天都應(yīng)填寫(xiě)記錄表,并由專人檢查確認(rèn)簽字。 5.0注意事項(xiàng) 5.1.1PCR實(shí)驗(yàn)室各室使用、進(jìn)入及單一流向制度,請(qǐng)各位技術(shù)員不要貪方便,嚴(yán)格按照規(guī)程操作,以 免造成嚴(yán)重后果。 5.1.2dN