隴東黃土高原農(nóng)田土壤微生物量碳和顆粒有機碳剖面分布特征.docx

1、2014年2月ACTAACADEMIAEMEDICINAEQINGDAOUNIVERSITATISFebruary2014doi：10.13361/j.qdyxy201401001Ghrelin對大鼠胃排空和小腸傳輸功能的影響陳忠梅偵，徐珞I(1青島大學醫(yī)學院病理生理學教研室，山東青島266021；2泰山市中心醫(yī)院新生兒病房)摘要目的探討Ghrelin對大鼠胃排空及小腸傳輸功能的作用。方法制備術(shù)后腸動力障礙大鼠模型，觀察并比較99mTc-甲基纖維素灌胃后靜脈注射Ghrelin.降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)對胃排空和小腸傳輸功能的影響。結(jié)果99mTc-甲基纖維素灌胃后靜脈注射Ghrelin(20

2、昭/kg),1560min胃內(nèi)99mTc-甲基纖維素的殘留量明顯減少(F=248.13,q=5.152L60,PV0.01),且呈顯著劑量依賴關(guān)系(q=3.159.64,PV0.05)。十二指腸給予99mTc-甲基纖維素，靜脈注射Ghrelin15min后，大鼠回腸上1/3內(nèi)99mTc-甲基纖維素的殘留量明顯下降(F=16.41,g=10.56,PV0.01),但回腸中1/3內(nèi)99mTc-甲基纖維素的殘留量卻明顯上升(q=11.44,PV0.01)。大鼠腸梗阻術(shù)后的胃內(nèi)99mTc-甲基纖維素殘留量明顯高于假手術(shù)對照組，即胃排空率顯著降低(z=2.78,PV0.05)。靜脈注射Ghrelin(4

3、50Mg/kg)15min后，腸梗阻大鼠胃內(nèi)99raTc-甲基纖維素的殘留量較對照組顯著減少，且呈顯著量效依賴關(guān)系(。=3.046.22,PV0.05)。靜脈注射CGRP50昭/kg,可明顯改善梗阻后胃內(nèi)99mTc-甲基纖維素的殘留量(t=2.31,PV0.05),但該效應明顯低于20昭/kgGhrelin對胃排空作用h=5.07,PV0.01)。結(jié)論Ghrelin可促進大鼠胃腸排空，改善術(shù)后腸梗阻的癥狀。關(guān)鍵詞Ghrelin;胃排空；胃腸活動；大鼠，Wistar中圖分類號R338文獻標志碼A文章編號1672-4488(2014)01000104THEEFFECTOFGHRELINONGAST

4、RICEMPTYINGANDINTESTINALTRANSITINRATSCHENZhongmei,XULuo(DepartmentofPathophysiology,QingdaoUniversityMedicalCollege,Qingdao266021；China)LABSTRACTObjectiveTostudytheeffectsofGhrelinongastricemptyingandsmallintestinaltransitinrats.MethodsAratmodelofpostoperativegastrointestinaldisfunctionwascreated.Th

5、eeffectsofintravenousinjectionofGhrelinorcalcitoningenerelatedpeptide(GCRP),afterintragastricadministrationof99mTc-methylcelluloseongastricemptyingandintestinaltransmissionwereobserved.ResultsAfterintragastricadministrationof99mTc-methylcellulosefollowedbyintravenousGhrelin(20ptg/kg)1560minlaterther

6、esidual99mTc-methylcellulosewassignificantlyreduced(F=248.13,q=5.1521.60,PV0.01),showingadose-dependentmanner(q=3.159.64,PV0.05).99mTc-methylcellulosewasadministratedintothesmallintes*tine,andfollowedbyintravenousinjectionofGhrelin,15minlater,theresidual99mTc-methylcelluloseinileum1wasnotablydecline

7、d(F=16.41,q=10.56,PV0.01),whereastheresidualofthatintheileum2wasmarkedlyincreased(q=11.44,PV0.01).Theresidual99mTc-methylcelluloseinthestomachaftersurgeryofintestinalobstructionwasmuchmorethanthatintheshamoperationgroup(=2.78,PV0.05).After15minofintravenousadministrationofghrlein(450pg/kg),theresidu

8、al99rnTc-methylcelluloseinthestomachwasmarkedlydecreased,appearingasdose-effectdependencies(Z=3046.22,PV0.05).IntravenousinjectionofCGRP(50ptg/kg)couldmarkedlyreduceresidual99mTc-methylcelluloseinthestomachofratsaftersurgeryforintestinalobstruction(z=2.31,PV0.05)butitseffectwasweakerthanthatof20/ig/

9、kgofGhrelin(=5.07,PV0.01).ConclusionGhrelincanmotivategastricemptyinginratsandimprovetheirsymptomsofpost-operativeileus.KEYWORDS_Ghrelin；gastricemptying;gastrointestinalmotility；rats,Wistar近年來在小鼠、大鼠、狗以及人類的胃內(nèi)發(fā)現(xiàn)了一種新肽，這種肽由胃黏膜內(nèi)分泌細胞分泌。因這種肽可與垂體生長激素促分泌素受體交互作用,且可直接作用垂體釋放生長激素口公，故稱之為Gh-收稿日期2013-07-05|修訂日期2013

10、-10-09基金項目國家自然科學基金資助項目(No.30470642,No.30670780,No.31071014,No.8U00260,No.81270460,No.8130028)；山東省科技攻關(guān)項目(NO.2008GG10002006)；山東省衛(wèi)生廳資助項目No.2OO7HZO26)和青島市科技局資助項目(No.l1-2-33-(2)-nsh,No.13-1-4-170-jch)作者簡介陳忠梅(1977-),女，在職碩士研究生。通訊作者徐珞(1954-),女，博士，教授，博士生導師。relino現(xiàn)已知,Ghrelin具有刺激食欲、刺激胃酸分泌、促進體質(zhì)量增加作用。研究顯示,Ghre-l

11、in也可以刺激氨基甲酸乙酯麻醉大鼠胃的收縮“I,并可加速小鼠胃排空和小腸或結(jié)腸轉(zhuǎn)運功能。本研究旨在探討Ghrelin對大鼠術(shù)后腸動力障礙的調(diào)控作用?，F(xiàn)將結(jié)果報告如下。1材料和方法1.1動物來源健康成年Wistar大鼠88只，雌雄兼?zhèn)?，體質(zhì)量200-250g,由青島市藥物檢驗所提供。置于室溫（25士2）C,12-12h晝夜循環(huán)光照條件下飼養(yǎng)，自由攝食、飲水。實驗開始前禁食18h。1.2 實驗試劑Ghrelin.胃動素、紅霉素、降鈣素基因相關(guān)肽（CGRP）均購自美國Sigma公司,99mTc購自加拿大Amersham公司。1.3 實驗方法1.3.1胃排空實驗將60只Wistar大鼠隨機分為生理鹽水

12、（NS）對照組（30只）和Ghrelin組（30只）。采用含有46.26mmol甲基纖維素和放射性計數(shù)為100000min199mTc蒸俺水1.5mL給清醒大鼠灌胃，各組大鼠分別在0、15、30、45、60min斷頭處死，每次6只。開腹并結(jié)扎胃賁門和幽門，取胃放于試管中，在計數(shù)器上進行放射性計數(shù)。另選Wistar大鼠28只，將其隨機分為NS對照組（7只）和1、5、20昭/kg體質(zhì)量Ghrelin組（每組7只）。分別使用1.5mL的含有46.26mmol甲基纖維素和放射性計數(shù)為100000min-1的少Tc溶液灌胃后，經(jīng)頸靜脈導管分別注射0.1mLGhrelin（K5和20g/kgGhrelin

13、溶于NS中）或0.1mL的NS,觀察大鼠胃內(nèi)甲基纖維素殘留量。1.3.2 小腸和結(jié)腸傳輸實驗大鼠腹腔注射0.6mol/L水合氯醛3mL/kg麻醉，開腹，將一小硅橡膠管插入十二指腸（幽門后1cm）或盲腸（回腸前1cm）,膠固定導管，導管經(jīng)背部皮下引出，縫合腹部，同時將動物置于單獨的籠內(nèi)。硅橡膠管安置24h后，乙醍麻醉大鼠，行右頸靜脈插管。2h后，經(jīng)十二指腸或盲腸的硅橡膠管注射0.5mL的含有46.26mmol甲基纖維素和放射性計數(shù)100000min1的mTc溶液。經(jīng)頸靜脈導管給予0.1mLGhrelin（20/ig/kg）,以同等量的NS為對照組。實驗結(jié)束后大鼠斷頭處死，開腹，胃和小腸分別用絲線

14、結(jié)扎分成胃、十二指腸、回腸1（上1/3）、回腸2（中1/3）、回腸3（下1/3）、盲腸、結(jié)腸1（近端1/2）、結(jié)腸2（遠端1/2）等多段。分別將上述胃或各腸段置于試管中，并通過計數(shù)器進行放射性計數(shù)。觀察給藥后15min內(nèi)糞便排出量，評估結(jié)腸運輸功能。并同時觀察給藥后15min期間的糞便排泄情況。1.3.3 腸梗阻模型制備和分組選取7只大鼠為假手術(shù)組。另選取56只大鼠乙醍麻醉后開腹，將盲腸輕輕取出，放于浸有生理鹽水的紗布間，用手輕輕拍打1min,將盲腸放同腹腔，縫合腹部創(chuàng)口。隨機分為NS對照組（7只，0.1mL）、不同劑量的Ghrelin組（共28只，每組7只，4、10、20、50ptg/kgG

15、hrelin加0.1mL的NS）、胃動素組（7只，100Mg/kg胃動素加0.1mL的NS）、紅霉素組（7只，200Mg/kg紅霉素加0.1mL的NS）和CGRP組（7只，50昭/kgCGRP加0.1mL的NS）。5min后進行胃排空實驗。以上各組分別用1.5mL的含有46.26mmol甲基纖維素的Tc灌胃后，經(jīng)頸靜脈導管分別給予上述藥物后，觀察大鼠胃內(nèi)99mTc甲基纖維素殘留量的改變。1.4統(tǒng)計學分析用PPMS1.5統(tǒng)計軟件處理。組間比較用ANOVA及/檢驗，以PV0.05為差異有顯著性。2結(jié)果2.1Ghrelin對正常大鼠胃排空的影響給藥15min后，大鼠胃內(nèi)99mTc-甲基纖維素的殘留量

16、顯著降低，與對照組比較，差異有顯著意義（F=248.13,q=5.1521.60,PV0.01）。見表1。表1Ghrelin對正常大鼠胃內(nèi)99mTc-甲基纖維素殘留量的影響（X/%9Xs）與對照組比較，F(xiàn)=248.13,q=5.1521.6O,PVO.O5。組別n0min15min30min45min60min對照組695.11+4.2357.41士7.2330.018.7123.048.4119.124.01Ghrelin組696.22*8.713.248.343.117.632.93，給予1g/kgGhrelin的大鼠，15min后胃內(nèi)99mTc-甲基纖維素的殘留量

17、（42.18土11.02）%）與對照組（47.3317.12）%）比較無顯著差異（P0.05）;但給予5jug/kgGhrelin的大鼠，15min后胃內(nèi)99mTc-甲基纖維素的殘留量（17.514.24）%）較對照組和1Mg/kgGhrelin組明顯降低（F=18.23,q=6.21、7.51,PV0.01）,給予20g/kgGhrelin,15min后胃內(nèi)99mTc-甲基纖維素的殘留量（5.08士1.11）%）較對照組、1ptg/kgGhrelin組和5ptg/kgGhrelin組明顯降低（q=3.159.64,PV0.05）。2.2Ghrelin對小腸傳輸功能的影響在近端十二指腸給予含有

18、放射性標記9偵丘的甲基纖維素液態(tài)飲食15min后，與對照組(46.14土17.10)%)相比，靜脈注射Ghrelin后，大鼠回腸1內(nèi)99mTc-甲基纖維素的殘留量(14.17+5.04)%)明顯下降(F=16.41,q=10.56,PV0.01),但在回腸2中，與對照組相比，靜脈注射Ghrelin后99mTc-甲基纖維素的殘留量(83.85士26.28)%)卻明顯上升(g=ll.44,PV0.01)。2.3 Ghrelin對結(jié)腸傳輸功能的影響在大鼠遠端問腸給予含有放射性標記河氏的甲基纖維素液態(tài)飲食15min后，與對照組(93.5524.96)%)相比，靜脈注射Ghrelin，盲腸中的。偵Tc-

19、甲基纖維素的殘留量(86.23士17.50)%)無顯著改變(F0.05)。在15min觀察期間大鼠沒有排便。2.4 Ghrelin對腸梗阻大鼠胃排空的影響給予大鼠盲腸經(jīng)輕拍1min,再行胃內(nèi)灌注含有放射性標記Tc的甲基纖維素液態(tài)飲食15min后，大鼠胃內(nèi)99raTc-甲基纖維素的殘留量(54.23士4.41)%)明顯低于假手術(shù)組(81.55+3.02)%),差異有顯著性h=2.78,PVOO5)。經(jīng)頸靜脈分別注射4、10、20、50fig/kgGhrelin15min后，大鼠胃內(nèi)99mTc-甲基纖維素殘留量分別為(67.8120.11)%、(63.12士18.32)%、(28.487.18)%

20、、(44.55士12.38)%,對照組為(80.2121.05)%,與對照組比較差異有顯著意義，而且呈明顯的量效依賴關(guān)系(Z=3.046.22,PV0.05)。靜脈注射胃動素后，胃內(nèi)99mTc-甲基纖維素的殘留量(84.54+12.22)%)與對照組(80.2121.05)%)比較，無顯著改變(P0.05)。靜脈注射紅霉素后，胃99mTc-甲基纖維素的殘留量(82.3116.28)%)與對照組比較無明顯改變(P0.05)。雖然靜脈注射CGRP后，胃內(nèi)99mTc-甲基纖維素的殘留量(58.4114.02)%)明顯降低(z=2.31,PV0.05),但該效應明顯低于20Mg/kgGhrelin對胃

21、的排空作用h=5.07,PV0.01)o3討論Ghrelin是一種肽，主要由胃黏膜細胞分泌，可調(diào)節(jié)生長激素分泌，促進攝食和體質(zhì)量增長。本研究結(jié)果顯示，Ghrelin可以顯著加快正常清醒大鼠胃排空進程，也可有效改善腸梗阻的癥狀。Ghrelin可以加速小腸運輸功能，但對結(jié)腸沒有明顯影響。MASUDA等山的研究結(jié)果顯示，大鼠經(jīng)氨基甲酸乙酯麻醉后，使用阿托品或行迷走神經(jīng)切斷術(shù)，均可阻斷由Ghrelin誘導的胃收縮作用。ASAKA-WA等研究結(jié)果顯示，經(jīng)腹腔注射Ghrelin的小鼠，攝食12h后胃內(nèi)食物殘留量明顯減少，提示Ghrelin可加速胃排空。本文結(jié)果顯示，ghrellin可加速大鼠胃排空，但對麻

22、醉大鼠無顯著影響。由于與胃動素前體序列具有同源性，TOMA-SETTO等8定義Ghrelin為胃動素相關(guān)肽。本實驗結(jié)果顯示,Ghrelin可以緩解腸梗阻的癥狀，但胃動素或胃動素受體擬似劑紅霉素并不能緩解腸梗阻的癥狀,提示Ghrelin對受體的作用不同于胃動素。這些實驗結(jié)果可能與構(gòu)效關(guān)系研究結(jié)果相吻合，表明胃動素的生物活性依賴于其第4個氨基酸序列，而Ghrelin的生物活性則依賴于其第7個氨基酸序列胡。此外，這兩種肽類N末端片段的差異性非常大，這同樣說明了它們有各自不同的受體，并且受體之間不存在交叉作用。近年來,Ghrelin對術(shù)后腸梗阻的作用引起了醫(yī)學界廣泛關(guān)注。眾所周知，腹部手術(shù)能抑制胃排空

23、并影響消化功能。腹部手術(shù)病人，術(shù)后消化功能會受到較大影響，但通過有效對癥治療會得到緩解。因此，通過縮短術(shù)后腸梗阻時間，可減少病人住院時間。但目前術(shù)后腸梗阻原因仍不清楚，當今的治療方案也是醫(yī)生根據(jù)以往經(jīng)驗決定，療效不甚理想。目前也有應用促胃動力藥直接刺激胃平滑肌或借助傳出神經(jīng)通路刺激胃排空的方法，但以上方法也不能令人滿意【。近來有研究表明，傳入神經(jīng)功能抑制可能與術(shù)后腸梗阻的起因有關(guān)。而Ghrelin可以減少胃迷走神經(jīng)傳入放電。本文的研究結(jié)果顯示,Ghrelin較CGRP更具有加速胃排空的作用。總之,Ghrelin是一種較強的促胃動力肽，但其在體內(nèi)作用機制還有待于進一步探討。參考文獻1 KOJIM

24、AM,MOSODAH,DATEY,etal.Ghrelinisagrowth-hormone-releasingacylatedpeptidefromslomachJNature*1999402：656-660.2 WRENAM,SMALLCJ,WARDHL,etal.ThenovelhypothalamicpeptideGhrelinstimulatesfoodintakeandgrowthhormonesecretion_JJ.Endocrinology.2000,141:4325-4328.3 ASAKAWAA,INUIA,KAGAT,etal.Ghrelinisanappetite-s

25、timulatorysignalfromstomachwithstructuralresemblancetomotilinEJj.Gastroenterology20019120:337-345.4 MASUDAY,TANAKAT,INOM/lTAN,etal.Ghrelinstimulatesgastricacidsecretionandmotilityinrats_JJ.BiochemBiophysResCommun2000,276：905-908.(下轉(zhuǎn)第6頁)乏TrkB受體的表達，因此DHF對6-OHDA誘導PC12細胞損傷的保護作用，不是通過激活TrkB受體而可能與其抗氧化作用有關(guān)。

26、DHF分子結(jié)構(gòu)中具有鄰位二羥基，可作為電子受體而直接清除自由基*氣另外，CHEN等研究顯示，在缺乏TrkB受體的海馬HT-22細胞系，DHF可通過清除細胞內(nèi)自由基及提高谷胱甘肽(GSH)水平而對抗谷氨酸誘導的細胞損傷。因此，DHF的神經(jīng)保護作用至少存在依賴TrkB和不依賴TrkB受體兩條途徑。PI3K/Akt是細胞內(nèi)非常重要的信號傳導通路,其可參與細胞的增殖、分化、凋亡等多種功能。PI3K通過催化底物磷脂酰肌醇而使下游Akt磷酸化。激活后的Akt具有對抗細胞凋亡、促進細胞存活等多種效應。6-OHDA處理的PC12細胞，Akt磷酸化水平出現(xiàn)明顯下調(diào)mi。本文研究結(jié)果顯示，PI3K抑制劑能部分阻斷

27、DHF的保護作用，提示該作用與PI3K/Akt信號通路有關(guān)。綜上所述，DHF對6-OHDA誘導的PC12細胞損傷具有明顯的保護作用，該作用可能以PI3K/Akt信號通路為中介。參考文獻口THOMASB,BEALMF.ParkinsonsdiseaseJ.HumMolGenet,2007,2：R183-194._2HALLIWELLB.Oxidativestressandneurodegeneration:wherearewenowJ?JNeurochem,2006,97:1634-1658.3 呂占云，姜宏，徐華敏，等.高鐵飲食致C57BL/6小鼠黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元選擇性損傷的研究口.青島大學

28、醫(yī)學院學報.2010,46(4):298-301.4 JANGW,LIUX,YEPESM,etal.AselectiveTrkBagonistwithpotentneurotrophicactivitiesby7,8-dihydroxyflavoneJ.ProcNatlAcadSciUSA,2010,107：2687-2692.5 DEVIL,OHNOM.7,8-dihydroxyflavoneasmall-moleculeTrkBagonist,reversesmemorydeficitsandBACE1elevationinamousemodelofAlzheimer*sdisease；.

29、Neuropsychopharmacology2012,37(2)：434-444.6 周曉彬，張健.醫(yī)學統(tǒng)計軟件系統(tǒng)PPMS1.5的應用舉例口.齊魯醫(yī)學雜志，2011,26(6):502-505.7 POUGETC,LAUTIHERF,SIMONA,etal.Flavonoids：structuralrequirementsforantiproliferativeactivityonbreastcancercellsJ.BioorgMedChemLett,2001,11(24)：3095-3097.8PANDEYKB,RIZVISI.Plantpolyphenolsasdietaryanti

30、oxidantsinhumanhealthanddiseaseJ.OxidMedCellLon-gev,2009,2(5):270-278.9 LIUHL,JIANGWB,XIEMX.Flavonoids：recentadvancesasanticancerdrugsJ,RecentPatAnti-Canc2010,5(2):152-164.10 GUTIERREZ-MERINOC,LOPEZ-SANCHEZC,LAGOARetal.Neuroprotectiveactionsofflavonoids(_J.CurrentMedicinalChemistry*2011*18(8)：1195-1

31、212.11CHENJ,CHUAKW,CHUACC,etal.Antioxidantactivityof7,8dihydroxyflavoneprovidesneuroprotectionagainstglutamate-inducedtoxicityJ,NeurosciLett,2011,499(3)：181-185.12 ZHANGR,KANGKA,PIAOMJ,etalPreventiveeffectof7,8dihydroxyflavoneagainstoxidativestressinducedgeno-toxicityJ.BiolPharmBull,2009,32(2)：166T7

32、1.13 PARKHY,KIMGY,HYUNJW,etal.7.8-dihydroxyflavoneinducesG1arrestofthecellcycleinU937humanmonocyticleukemiacellsviainductionoftheCdkinhibitorp27anddownregulationofpRBphosphorylationEJJ.OncolRep,2012,28(1):353-357.14 DUANWG,SHANGJ,JIANGZZ,etal.RhokinaseinhibitorY-27632down-regulatesnorepinephrinesynt

33、hesisandreleaseinPCI2cellsJ.BasicClinPharmacolToxicol2009,104：434-440.15 WOLDUAS,MAIJ.AnovelrelationshipbetweentheradicalscavengingactivityofflavonoidsandenthalpyofformationrevealedwithHartree-FockcomputationsandthermochemicaldeductionJ.RedoxRep,2012,17(3):115-130._16LONGL,YANJQ,WEIL,etal.Simvastatininducesneuroprotectionin6-OHDA-lesionedPC12viathePI3K/AKT/caspase3pathwayandanti-inflammatoryresponsesTJ