腫瘤疫苗免疫策略研究進展.docx

1、腫瘤疫苗免疫策略研究進展司春楓，魯美鈕，周玲，徐茂磊，楊小平ResearchprogressoftumorvaccinestrategySiChunfeng,LuMeiyu,ZhouLing,XuMaolei,YangXiaopingCollegeofPharmacyBinzhouMedicalUniversity,ShandongYantai264003,China.Abstract】Alongwiththedevelopmentofimmunologyandfurtherunderstandingofthemechanismoflumorigenesis,tumorvaccinehasbe

2、comeanewresearchfocusofcancertreatment.Comparedwiththetraditionaltherapiessuchasradiotherapy,chemotherapy,surgicalandothermeans,tumorvaccinehasthecharacteristicofstrongspecificity,broadantitumorspectniinandlowtolerance.Tumorvaccinecansignificantlyinhibitluinorgrowthandmetastasismainlythroughregulati

3、ngtheimmuneresponse,promotingTcellproliferationandactivalionandcytokinerelease,andhasobtainedsomeachievementsinclinicaltrails.Tumorvaccinesmainlyincludetumorcellvaccine,dendriticcellvaccine,DNAvaccine,peptidevaccine,CTLepitopevaccine,anti-angiogenesisoftumorvaccineandsoon.Thisarticlemainlyreviewsimm

4、unologyfoundationoftumorimmunotherapy,functioncharacteristics,researchprogressandapplicationstatusoftumorvaccines.Keywordstumor,immunotherapy,(umorvaccine,anti-angiogenesisModemOncology2016,24(15)：2478-2482【指示性摘要】隨著免疫學的發(fā)展以及對腫瘤發(fā)生發(fā)、展機理的進一步認識，腫痛疫苗已成為腫瘤治療新的研究熱點。相比于傳統(tǒng)的放化療，手術(shù)切除等手段，腫瘤疫苗具有特異性強，抗瘤譜廣.耐受性低等優(yōu)點。

5、腫瘤疫苗主要通過調(diào)樣機體的免疫反應(yīng)，促進T細胞增殖和活化及細胞因子釋放發(fā)揮作用，可以顯著抑制腫瘤生長和轉(zhuǎn)移，臨床試驗結(jié)果顯示已取得一定效果。腫瘤疫苗免疫手段主要包括腫痛細胞疫苗、樹突狀細胞疫苗、DNA疫苗、多肽疫苗、CTL表位肽疫苗、靶向腫痛新生血管疫苗等。本文主要對腫痛疫苗治療的免疫學基礎(chǔ)、作用特點、研究進展及應(yīng)用現(xiàn)狀作一綜述?！娟P(guān)鍵詞】腫瘤;免疫治療;腫瘤疫苗;抗血管生成【中圖分類號1R73O.51【文獻標識瑪】ADOI：l0.3969/j.issn.1672-4992.2016.15.038【文章編號】1672-4992-（2016）15-2478-04在2013年Science雜志評選

6、的十大科技突破中，“腫瘤免疫治療”店于首位腫瘤疫苗作為腫瘤免疫治療的一個幣:要組成部分，近年來也取得了長足的發(fā)展,在基礎(chǔ)研究和【收稿日期】2016-04-07【基金項L”國家白然科學基金（編號：81541158）；山東省自然科學座金（編號：ZR2OI5PHOO2）；山東省優(yōu)秀中肖年科學家科研獎勵基金（編號：BS2014YY051）；山東省歐藥P生科技發(fā)展計劃（編號：2014WS0479）；山東省鬲等學?？萍加媱潱ň幪?J15LM51）【作者熊位】濱州醫(yī)學院藥學院，山東煙臺264003【作者簡介】司春楓（1989-）,男，山東濱州人，在讀碩士，主要從事腫瘤免疫治療方面研究。E-rnaihscfm

7、aple©163.com【通訊作者】徐茂和（1985-）,男，山東淄博人.講帥，博士，主要從事腫痛免疫治療方面研究eE-mail:xumaoleil234楊小平（1962-），男，河北邯鄲人，教授，山東省“泰山學者”海外特聘專家，碩上研究生導師，博士，主要從小腫痛免疫為理學方面研究CE-mail:yangxiaoping©.on臨床研究領(lǐng)域均有較顯著的成果。腫瘤疫苗，即利用腫瘤抗原，通過激發(fā)機體免疫應(yīng)答反應(yīng)以抑止腫瘤的發(fā)生、發(fā)展或轉(zhuǎn)移,從而達到腫瘤治療的目的。1腫瘤免疫應(yīng)答機理免疫應(yīng)答包括非特異性免疫應(yīng)答和特異性免疫應(yīng)答，兩者之間相互補充并誘導機體產(chǎn)生免疫力

8、。特異性免疫系統(tǒng)中的T細胞和B細胞利用其細胞表面的受體識別外來抗原,B細胞直接識別抗原表位，而T細胞則是通過抗原提呈細胞（antigenpresentingcell.APC）遞呈的抗原肽-主要組織相容性復合物（majorhistocompatibilitycomplex,MHC）分子復合體來識別抗原。樹突狀細胞（dendriticcell,DC）是人體中已知功能最強的抗原呈遞細胞,是聯(lián)系特異性和非特異性免疫應(yīng)答重要的一類細胞。在腫痛免疫中，DC通過獲取腫痛抗原，并在細胞內(nèi)經(jīng)過處理加工將腫瘤抗原的信息呈遞給淋巴組織中未成熟的T淋巴細胞，此時T淋巴細胞被激活產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答°同時被激活

9、的T淋巴細胞釋放一系列細胞因子如IL-2等，進一步促進T淋巴細胞的增殖、活化。T淋巴細胞可轉(zhuǎn)化為記憶T細胞和效應(yīng)T細胞，記憶T細胞可在抗原再次人侵時大量增殖并產(chǎn)生免疫應(yīng)答，效應(yīng)T細胞則可有接對腫瘤細胞產(chǎn)生殺傷作用,并且可以刺激B淋巴細胞的增殖、活化,促使B淋巴細胞產(chǎn)生靶向腫瘤的抗體，對腫瘤產(chǎn)生殺傷作用。腫痛疫苗則是根據(jù)以上免疫應(yīng)答機理，通過機體識別腫痛特異性抗原(tumorspecificantigen,TSA)或腫瘤相關(guān)抗原(tumorassociatedantigen,TAA)，激發(fā)機體特異性免疫應(yīng)答殺傷腫瘤細胞。根據(jù)腫瘤疫苗的用途可以將其分為兩類:一類是預防性腫瘤疫苗，可以通過接種此類疫

10、苗減少或消除腫瘤發(fā)生的幾率;一類是治療性腫瘤疫苗,其主要以腫瘤抗原為基礎(chǔ)，用于放化療或手術(shù)切除后的輔助治療。而根據(jù)腫瘤疫苗的來源又可將其分為腫瘤細胞疫苗、樹突狀細胞疫苗、DNA疫苗、多肽疫苗、CTL表位疫苗、靶向腫瘤新生血管疫苗等。2腫瘤疫苗的類型21腫瘤細胞疫苗腫痛細胞疫苗是通過物理、化學或者生物學的方法(加熱、輻射等)處理腫瘤細胞制備得到的,此種疫苗保留了原有的免疫原性而且沒有致痛作用。研究發(fā)現(xiàn)，全腫痛細胞疫苗不僅可以提供腫瘤全部抗原，誘導機體產(chǎn)生針對腫瘤抗原的免疫應(yīng)答,而且不引發(fā)機體的排斥反應(yīng)，是一種理想的疫苗方案。由于單純的腫瘤細胞疫苗的免疫原性較低，僅僅能激發(fā)機體較低水平的免疫應(yīng)答，

11、需要尋找合適的佐劑以增強腫瘤細胞疫苗的免疫原性。武峰等在OK432腫瘤細胞疫苗對BDA/2荷痛小鼠CD4、CD25調(diào)節(jié)性T細胞免疫效應(yīng)的研究中發(fā)現(xiàn)，此種腫痛細胞疫苗能夠明顯減少皮膚癌模型小鼠體內(nèi)CD4LCD25Treg細胞含最，推斷OK432腫瘤細胞疫苗可以降低機體的免疫抑制功能，從而可以保持疫苗良好的免疫原性，增強機體抗腫瘤免疫應(yīng)答。宿佳等在氧化型甘露聚糖修飾的腎透明細胞癌疫苗誘導CTL的抗腫瘤免疫效果評價的研究中發(fā)現(xiàn)，此種疫苗具有很強的免疫原性,在體外可以有效致敏DC,增強其抗原遞呈能力，同時提高了對腫瘤細胞的殺傷作用。喬莎等在腫瘤疫苗對小鼠肝癌細胞Hca-F抑制作用的研究中，將OK432

12、與KLN-205癌細胞通過戊二醛偶聯(lián)制成腫瘤疫苗，將此疫苗腹腔注射于接種了肝癌細胞的小鼠體內(nèi)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，此腫瘤疫苗可以明顯抑制Hca-F肝癌細胞的生長，抑制腫瘤細胞的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,并能夠激發(fā)荷瘤小鼠機體免疫反應(yīng)，增強其抗腫瘤能力。2.2樹突狀細胞疫苗DC是1973年由加拿大學者Steinman發(fā)現(xiàn)的，是目前所知功能最強的APC,源自于骨陶造血系統(tǒng)。一系列研究表明,DC在非特異性免疫應(yīng)答、特異性免疫應(yīng)答以及維持機體免疫耐受中的作用非常突出；利用DC高效的抗原提呈能力衍生而來的過繼性免疫療法逐漸用于抗腫瘤的治療。DC具有誘導初始免疫應(yīng)答能力、并且能夠增強機體對腫瘤的特異性免疫應(yīng)答，選擇其作為載體制備

13、DC腫瘤疫苗是公認的腫瘤免疫治療手段之一。目前用于負載DC的抗原有多種，比如TAA.TSA以及腫瘤全細胞抗原;臨床上常用的負載抗原是將腫瘤細胞反復凍融獲得的全腫瘤細胞裂解物。將體外獲取的DC前提細胞以細胞因子誘導其成熟，加之腫瘤抗原體外剌激從而獲得負載腫瘤抗原的成熟DC,然后將其轅回體內(nèi)，可誘導產(chǎn)生有效的抗腫瘤免疫應(yīng)答F。但疫苗制備的工藝較為復雜,需要激活大量DC,費時費力。在一項有關(guān)患者自體腫瘤細胞裂解物負載DC治療進展期轉(zhuǎn)移性腎癌的I/I1期臨床研究中,Flttrcken等發(fā)現(xiàn)在7例患者中有3例體內(nèi)表現(xiàn)出特異性Thl型免疫應(yīng)答,臨床獲益率部分緩解(partialresponse,PR)+疾

14、病穩(wěn)定(stabledisease,SD)達29%,平均腫瘤進展時間(timetoprogression,TTP)為24.6周；1例患者出現(xiàn)最小的臨床反應(yīng),TPP為96周，但疫苗誘導了機體針對未識別抗原的T細胞克隆增殖,顯示DC疫苗對黑色素瘤的治療具有相對較好的臨床效果。在2014年的一項II期臨床實驗的研究中發(fā)現(xiàn)，在治療晚期黑色素瘤的過程中，利用腫瘤細胞裂解物負載DC并聯(lián)合免疫調(diào)節(jié)型放射性治療和IFN-a治療,獲得了較為顯著的治療效果，三分之二的患者出現(xiàn)了免疫應(yīng)答，臨床獲益率為55.5%；研究者旨在通過聯(lián)合治療方案，提高疫苗的抗腫痛效應(yīng)，使患者獲得滿意的生存期并降低毒性回。此外，在肝癌,卵巢

15、癌以及乳腺癌等腫瘤的治療中，腫瘤細胞裂解物負載的DC疫苗在延長生存期或臨床獲益率上都能取得可觀的治療效果I，0'，21o美國杜克大學醫(yī)學中心在2015年的一項研究中發(fā)現(xiàn)，在給腦膠質(zhì)瘤患者進行DC疫苗治療前預先用破傷風-白喉毒素(TD)處理，結(jié)果顯示，經(jīng)TD處理的DC遷移能力明顯提高，患者的中位總生存期顯著延長；在小鼠模型中顯示出同樣的實驗結(jié)果，DC遷移能力增強并抑制了腫瘤的生長'E。荊雪寧等句在黃芷多糖誘導成熟的DC腫瘤疫苗體外抗腫瘤作用的實驗中發(fā)現(xiàn)，黃芷多糖誘導成熟的DC能夠刺激同種異體T淋巴細胞的增殖,T細胞增殖指數(shù)隨刺激細胞與效應(yīng)細胞比值的增加而增加；DC與T細胞共培養(yǎng)上

16、清IL-2JFN-7的水平明顯增加，并且對時間呈現(xiàn)依賴性;通過致敏DC活化的CTL能顯著的殺傷腫瘤細胞，并隨著效靶比的增加殺傷作用增強。提示黃茂多糖可在體外誘導DC成熟，并促進其抗原提呈能力，有效活化CTL,增強機體的抗腫痛作用，為中藥參與腫瘤生物治療提供了理論依據(jù)°2.3DNA疫苗DNA疫苗又稱基因疫苗(geneticvaccine)，是利用基因工程技術(shù)將編碼腫瘤特異性抗原的DNA片段結(jié)合于重組病毒或質(zhì)粒DNA等表達載體上，再將腫瘤疫苗接種于體內(nèi)，使其表達出所需抗原,進而誘導機體產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答:。將編碼有目的抗原的質(zhì)粒DNA經(jīng)皮內(nèi)或肌肉注射是一種簡單而有效的免疫治療方案。DNA

17、注入體內(nèi)后經(jīng)由細胞攝取，進入細胞核并以轉(zhuǎn)錄激活形式存在,最終基因表達量與轉(zhuǎn)染細胞數(shù)量成正比。由于質(zhì)粒DNA很少能夠進入細胞內(nèi)并定位于細胞核上，并且組織內(nèi)APC周圍缺乏炎癥反應(yīng)的必要條件，加之缺少共刺激分子激活T淋巴細胞，所以單純的注射質(zhì)粒DNA所引起的機體免疫應(yīng)答不能令人滿意。因此，進一步優(yōu)化DNA疫苗策略是非常有必要的，包括免疫時間，免疫劑量，給藥方式以及合適的佐劑配伍。Vical公司利用質(zhì)粒與脂質(zhì)體混合的方法設(shè)計了一種腫瘤疫苗Allovectin-7,將編碼HLA-B7和陽微球蛋白的DNA序列裝載成一個功能性MHCI類分子復合物，將其直接痛內(nèi)注射以提高DNA攝入最。在針對III/IV期黑色

18、素瘤患者的臨床試驗中發(fā)現(xiàn),Allovectin-7可以通過結(jié)合MHCI類分子特異性識別轉(zhuǎn)移性黑色素瘤病灶，腫瘤組織活檢也可以檢測出有細胞毒性T細胞浸潤，顯示出良好的局部和系統(tǒng)免疫反應(yīng)，并且具有可靠的安全性，較一線化療藥有明顯的臨床治療優(yōu)勢o其作用方式如下：首先,DNA-脂質(zhì)體誘導機體產(chǎn)生了炎癥反應(yīng);其次,MHCI復合物增強了機體對腫瘤抗原的提呈作用；再次,MHCI復合物使機體產(chǎn)生異源反應(yīng)。此外，尋找合適的表達載體、優(yōu)化免疫方案以及聯(lián)合其他腫瘤治療手段是腫瘤治療必然趨勢。24多肽疫苗抗腫瘤多肽疫苗是通過激活機體自身免疫系統(tǒng),利用腫痛抗原肽誘導機體產(chǎn)生特異性細胞和體液免疫應(yīng)答,從而抑制腫瘤的生長、

19、轉(zhuǎn)移和復發(fā)，達到控制或治愈腫瘤的目的。多肽疫苗具有安全性好和特異性高的特點，但是合成的肽段較小,免疫原性較差，而且只能用于擁有相同人類白細胞抗原(humanleukocyteantigen,HLA)位點的患者。研究顯示，多肽疫苗體內(nèi)抗腫瘤的免疫學機制主要有以下幾點：首先，多肽疫苗可以直接結(jié)合MHCI類分子，促進CD8T細胞的增殖以及免疫應(yīng)答反應(yīng)。其次,有些多肽疫苗含有輔助性T細胞表位，能被DC攝取從而有效的與MHCII類分子結(jié)合，激活CD4,T細胞，最終為CD8+T細胞傳遞殺傷信號。再次.CTL型和輔助性抗腫瘤多肽可以通過物理連接的方式制備疫苗，此類疫苗可同時激活CD8*T細胞和CD4，T細胞

20、，較前兩種機制更能產(chǎn)生有效的免疫應(yīng)答"們。最后,DC激動劑與抗腫瘤多肽共價連接制備的多肽疫苗，能夠強烈激活攝取腫瘤抗原的全部DC,從而誘導有效的細胞免疫應(yīng)答,發(fā)揮強有力的抗腫瘤效應(yīng)0目前,有關(guān)抗腫瘤多肽疫苗的研究都在進行中。Waiter等"力在對一種腎細胞癌多肽疫苗IMA901的實驗研究中發(fā)現(xiàn)，在第一階段研究中，患者的T細胞免疫反應(yīng)靶向多種腫痛相關(guān)抗原，病情得到了良好的控制，并且有關(guān)免疫抑制的調(diào)節(jié)性T細胞數(shù)鼠降低;在第二階段研究中.Walter確證了疫苗激發(fā)的免疫反應(yīng)靶向多種腫瘤相關(guān)抗原,并且患者對其中至少三種肽產(chǎn)生免疫應(yīng)答反應(yīng)時生存情況優(yōu)于其他低應(yīng)答者。Noguchi等&

21、#39;研發(fā)了一種個體化的多肽疫苗,其根據(jù)宿主的免疫狀態(tài)選擇與宿主HLA匹配的多肽，最多含有4個。Thomas等小在對黑色素痛的多肽疫苗研究中發(fā)現(xiàn)，將即100：209-217位點210處的蘇氨酸替換為甲硫氨酸，制備了一種疫苗gpl00：209217(210M),與替換前相比顯著提高了與HLA-A2的結(jié)合能力，對T淋巴細胞免疫應(yīng)答的特異性以及MHC分子的親和力更強，對患者外周血單個核細胞體外的致敏性(peripheralbloodmononuclearcells,PBMCs)更好。宵冰等*在熱休克蛋白72(HSP72)-甲胎蛋白(AFP)抗原表位肽復合物抗小泉肝癌Hepal-6細胞免疫的研究中發(fā)

22、現(xiàn)，以HSF72-AFP抗原表位肽復合物免疫小鼠，可激發(fā)小鼠機體抗腫瘤免疫應(yīng)答，誘導產(chǎn)生特異性針對AFP腫瘤的細胞免疫,并且針對腫瘤細胞的殺傷效應(yīng)顯著優(yōu)于單一的多肽疫苗、2.5CTL表位疫苗腫瘤特異性抗原的免疫治療可以啟動腫瘤特異性CTL反應(yīng)為主的免疫反應(yīng)，有效的遏制腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移。隨著對免疫應(yīng)答機制的的深入研究,人們逐步意識到激發(fā)機體免疫應(yīng)答的是與MHC分子結(jié)合的氨基酸短肽，也就是CTL表位，所以尋找以及鑒別腫痛特異性抗原和相應(yīng)的CTL表位成為腫瘤免疫治療的關(guān)鍵。范宗江等'在甲胎蛋白CTL表位多抗原肽疫苗對原發(fā)性肝癌的抗腫瘤活性的研究中,體外分離培養(yǎng)人類白細胞抗原(HLA)A2.1

23、陽性的健康志愿者外周血和HLA-A2.1轉(zhuǎn)基因小鼠骨髓來源的成熟DC,用DC負載多肽疫苗，體內(nèi)外誘導效應(yīng)細胞，并采用標準4h55Cr釋放實驗和酶聯(lián)免疫斑點技術(shù)(ELISPOT)檢測CTL活性。研究結(jié)果表明，AFPMAP誘導的CTL反應(yīng)強于相應(yīng)單肽誘導的CTL反應(yīng)，對AFP陽性且HLA-A2.1相匹配的腫瘤細胞具有明顯的殺傷效應(yīng)；對AFP陰性的腫瘤細胞不具有殺傷效應(yīng)。范艷等為在一項研究中成功構(gòu)建了H-2"限制性WT1蛋白CTL表位肽的表達載體，并使其在293T細胞中表達。隨后又將其制備CTL表位疫苗并免疫小鼠，結(jié)果發(fā)現(xiàn)疫苗特異CTL具有殺傷腫瘤細胞的作用，為WT1肽疫苗抗腫痛效應(yīng)的提高

24、提供了新的思路。26靶向腫痼新生血管疫苗腫瘤免疫治療的靶點除了腫瘤相關(guān)抗原以外，還包括了腫瘤新生血管c靶向腫痛新生血管疫苗主動免疫治療方法，可以激發(fā)機體產(chǎn)生靶向腫瘤血管的免疫反應(yīng),抑制腫痛血管的生成，拮抗腫瘤細胞生長和轉(zhuǎn)移，能夠有效克服單克隆抗體和小分子受體抑制劑等抗血管生成藥物用藥昂貴,易產(chǎn)生耐受以及副作用多的缺點，是對腫瘤免疫治療的一個有益補充。中國學者魏于全首次報道采用多聚甲醛固定的內(nèi)皮細胞作為抗原制備內(nèi)皮細胞疫苗，并將該疫苗免疫小鼠，激發(fā)小鼠產(chǎn)生靶向腫瘤新生血管的免疫反應(yīng)，通過控制腫瘤血管新生達到控制腫瘤生長的目的,研究表明內(nèi)皮細胞疫苗能有效的克服機體對自身血管抗原的免疫耐受,是對腫瘤

25、免疫治療的有效方法)。然而，日本學者OKaji等F在臨床實驗中發(fā)現(xiàn)，僅以人臍靜脈內(nèi)皮細胞(humanumbilicalveinendothelialceU.HUVEC)作為抗原制備的全細胞疫苗在治療性免疫中引起的免疫應(yīng)答是有限的,抗腫瘤效果不能完全令人滿意,提示我們需要尋找合適的佐劑以優(yōu)化當前的內(nèi)皮細胞疫苗治療方案。徐茂磊等:"-30】在對內(nèi)皮細胞疫苗治療方案的探索中開發(fā)了一種以HUVEC為抗原，以O(shè)K432或N&為佐劑的新型內(nèi)皮細胞疫苗，該疫苗與單獨的HUVEC疫苗相比更易激發(fā)機體強烈的免疫應(yīng)答，對諸如小鼠H22肝細胞癌、EAC乳腺癌以及B16F10黑色素瘤等腫瘤顯示出良好

26、的治療效果。MinoruTanaka等叫在HUVEC疫苗對復發(fā)性膠質(zhì)母細胞痛患者的治療作用的臨床研究中.將患有夏發(fā)性膠質(zhì)母細胞痛的病人作為研究對象分別皮下注射HUVEC疫苗并對無惡化生存期和總生存期進行檢測。結(jié)果顯示，此疫苗能明顯延長腫瘤倍增時間，降低腫瘤生長率;并且在治療過程中沒有出現(xiàn)嚴重的不良反應(yīng)。3展望近年來，有關(guān)腫瘤疫苗的研究不斷升溫,其在臨床上的應(yīng)用越來越廣泛，在眾多的疫苗形式中，DC疫苗在臨床前以及臨床研究中尤其顯示了良好的抗腫瘤效應(yīng)。由于腫痛抗原的免疫原性較弱，引起機體免疫應(yīng)答強度有限，故而如何增強疫苗的免疫原性、克服腫瘤的免疫逃避、誘導高效免疫應(yīng)答仍然是是腫瘤疫苗研究的核心問題

27、。靶向腫瘤新生血管的疫苗是腫瘤疫苗研究的另一個新熱點，該類疫苗可以通過抑制腫瘤新生血管達到防止腫瘤的轉(zhuǎn)移和復發(fā)的作用，是對腫瘤疫苗免疫治療策略的一個有益補充。然而，腫瘤的發(fā)病機理復雜，單一治療手段起到的治療效果有限,多靶點、多手段的聯(lián)合治療方案已被證實是腫瘤臨床治療的發(fā)展方向，這提示我們可以將腫瘤疫苗與手術(shù)切除、放化疔等傳統(tǒng)治療方案有益聯(lián)合，雙管齊下，有望在腫瘤臨床治療中發(fā)揮更大作用?！緟⒖嘉墨I】1Couzin-FrankelJ.CancerimmunotherapyJ.Science,2013,342(6165):1432-1433.2 ElertE.CallingcellstourmsfJ

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