重編程表觀遺傳學(xué)誘導(dǎo)多能干細胞DNA甲基化論文

1、小鼠三種胚胎干細胞表觀相關(guān)基因的分析【摘要】 細胞核的重編程可以通過將體細胞的細胞核移入卵母細胞,將體細胞和胚胎干細胞進行融合,以及向體細胞中轉(zhuǎn)入幾個轉(zhuǎn)錄因子例如Oct4, Sox2, C-myc, Klf4和Nanog的方法實現(xiàn),然而細胞核的重編程需要經(jīng)歷復(fù)雜的過程,其中最為重要的就是細胞核所發(fā)生的表觀遺傳學(xué)變化,本文主要綜訴了細胞核重編程的研究概況,產(chǎn)生干細胞的四種不同的方法和現(xiàn)代表觀遺傳學(xué)中干細胞的表觀遺傳學(xué)特性以及體細胞的表觀遺傳學(xué)變化。我們從培養(yǎng)ES細胞著手,通過一年的摸索初步建立了小鼠胚胎成纖維細胞的體外培養(yǎng)平臺,并在此基礎(chǔ)上利用小鼠胚胎成纖維細胞經(jīng)過絲裂霉素c處理的方法建立了合格

2、的胚胎細胞滋養(yǎng)層。同時綜合國內(nèi)外文獻,采用對小鼠注射激素,超數(shù)排卵,沖取3.5天的受精卵,接種于小鼠胚胎成纖維細胞制作的滋養(yǎng)層細胞上,在體外培養(yǎng)下使受精卵正常發(fā)育,并孵化,進而使受精卵在體外貼壁,等內(nèi)細胞團長大時用機械的方法挑取內(nèi)細胞團,從而建立了三株小鼠的胚胎干細胞系,經(jīng)過分子水平的鑒定,基本確定細胞系的成功?；谂咛ゼ毎暾呐囵B(yǎng)體系,我們成功培養(yǎng)了ES細胞系,核移植胚胎干細胞系,IPS細胞系各兩株,在實驗室培養(yǎng)擴大后分別提取了各個細胞系. 更多還原【Abstract】 Somatic cells can be reprogrammed through transferring

3、nuclear contents of somatic cell into oocytes, or by fusion with embryonic cells, or inserting several transcription factors (Oct4, Sox2, C-myc, Klf4 and Nanog) into somatic cell genome. This is a complex progress in which the most important is the epigenetic changs of the cell nucleus Here we discu

4、ssed the recnt advance in the reprogramming of cell nucleolus, four different approach to generate embritic stem cells, the eptgenetic characteri. 更多還原 【關(guān)鍵詞】 重編程； 表觀遺傳學(xué)； 誘導(dǎo)多能干細胞； DNA甲基化； 【Key words】 Reprogramming； Epigenetics； Ips(induced pluripotent stem cells)； DNA Methylation； 摘要 5-7 Abstrac

5、t 7-8 1 引言 9-29 1.1 細胞重編程研究進展 9-23 重編程研究概論 9-11 產(chǎn)生干細胞的方法 11-23 1.2 表觀遺傳學(xué)研究概論 23-28 干細胞的表觀遺傳特性 23-27 體細胞的表觀重編程 27-28 1.3 本研究的目標和主要內(nèi)容 28-29 2 材料與方法 29-49 2.1 小鼠胚胎成纖維細胞的分離培養(yǎng)和滋養(yǎng)層的準備 29-35 2.2 小鼠胚胎干細胞的體外分離和鑒定 35-41 2.3 表觀相關(guān)基因的分析 41-49 3 結(jié)果和討論 49-63 3.1 小鼠胚胎成纖維細胞的分離和滋養(yǎng)層的制備 49-50 3.2 小鼠胚胎細胞的建立 50-55 3.3 所建細胞系的分子水平鑒定 55-57 3.4 細胞系的復(fù)蘇培養(yǎng) 57-5