重編程表觀遺傳學(xué)誘導(dǎo)多能干細(xì)胞DNA甲基化論文

1、小鼠三種胚胎干細(xì)胞表觀相關(guān)基因的分析【摘要】 細(xì)胞核的重編程可以通過將體細(xì)胞的細(xì)胞核移入卵母細(xì)胞,將體細(xì)胞和胚胎干細(xì)胞進(jìn)行融合,以及向體細(xì)胞中轉(zhuǎn)入幾個(gè)轉(zhuǎn)錄因子例如Oct4, Sox2, C-myc, Klf4和Nanog的方法實(shí)現(xiàn),然而細(xì)胞核的重編程需要經(jīng)歷復(fù)雜的過程,其中最為重要的就是細(xì)胞核所發(fā)生的表觀遺傳學(xué)變化,本文主要綜訴了細(xì)胞核重編程的研究概況,產(chǎn)生干細(xì)胞的四種不同的方法和現(xiàn)代表觀遺傳學(xué)中干細(xì)胞的表觀遺傳學(xué)特性以及體細(xì)胞的表觀遺傳學(xué)變化。我們從培養(yǎng)ES細(xì)胞著手,通過一年的摸索初步建立了小鼠胚胎成纖維細(xì)胞的體外培養(yǎng)平臺(tái),并在此基礎(chǔ)上利用小鼠胚胎成纖維細(xì)胞經(jīng)過絲裂霉素c處理的方法建立了合格

2、的胚胎細(xì)胞滋養(yǎng)層。同時(shí)綜合國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn),采用對(duì)小鼠注射激素,超數(shù)排卵,沖取3.5天的受精卵,接種于小鼠胚胎成纖維細(xì)胞制作的滋養(yǎng)層細(xì)胞上,在體外培養(yǎng)下使受精卵正常發(fā)育,并孵化,進(jìn)而使受精卵在體外貼壁,等內(nèi)細(xì)胞團(tuán)長(zhǎng)大時(shí)用機(jī)械的方法挑取內(nèi)細(xì)胞團(tuán),從而建立了三株小鼠的胚胎干細(xì)胞系,經(jīng)過分子水平的鑒定,基本確定細(xì)胞系的成功?；谂咛ゼ?xì)胞完整的培養(yǎng)體系,我們成功培養(yǎng)了ES細(xì)胞系,核移植胚胎干細(xì)胞系,IPS細(xì)胞系各兩株,在實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)擴(kuò)大后分別提取了各個(gè)細(xì)胞系. 更多還原【Abstract】 Somatic cells can be reprogrammed through transferring

3、nuclear contents of somatic cell into oocytes, or by fusion with embryonic cells, or inserting several transcription factors (Oct4, Sox2, C-myc, Klf4 and Nanog) into somatic cell genome. This is a complex progress in which the most important is the epigenetic changs of the cell nucleus Here we discu

4、ssed the recnt advance in the reprogramming of cell nucleolus, four different approach to generate embritic stem cells, the eptgenetic characteri. 更多還原 【關(guān)鍵詞】 重編程； 表觀遺傳學(xué)； 誘導(dǎo)多能干細(xì)胞； DNA甲基化； 【Key words】 Reprogramming； Epigenetics； Ips(induced pluripotent stem cells)； DNA Methylation； 摘要 5-7 Abstrac

5、t 7-8 1 引言 9-29 1.1 細(xì)胞重編程研究進(jìn)展 9-23 重編程研究概論 9-11 產(chǎn)生干細(xì)胞的方法 11-23 1.2 表觀遺傳學(xué)研究概論 23-28 干細(xì)胞的表觀遺傳特性 23-27 體細(xì)胞的表觀重編程 27-28 1.3 本研究的目標(biāo)和主要內(nèi)容 28-29 2 材料與方法 29-49 2.1 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞的分離培養(yǎng)和滋養(yǎng)層的準(zhǔn)備 29-35 2.2 小鼠胚胎干細(xì)胞的體外分離和鑒定 35-41 2.3 表觀相關(guān)基因的分析 41-49 3 結(jié)果和討論 49-63 3.1 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞的分離和滋養(yǎng)層的制備 49-50 3.2 小鼠胚胎細(xì)胞的建立 50-55 3.3 所建細(xì)胞系的分子水平鑒定 55-57 3.4 細(xì)胞系的復(fù)蘇培養(yǎng) 57-5