狂犬病疫苗（課堂PPT）

1、2 人用狂犬病疫苗（人用狂犬病疫苗（Vero 細胞）細胞） RabiesmVaccine (Vero Cell) for Human Use 凍干人用狂犬病疫苗（凍干人用狂犬病疫苗（Vero 細胞）細胞）Rabies Vaccine (Vero Cell) for Human Use ,Freeze-dried人用狂犬病疫苗（地鼠腎細胞）人用狂犬病疫苗（地鼠腎細胞） Rabies Vaccine (Hamster Kidney Cell) for Human Use3一、基本要求一、基本要求 生產(chǎn)和檢定用設(shè)備、原料及輔料、水、器具、動物等應(yīng)符合“凡例”有關(guān)要求。4二、制造二、制造2.1 生產(chǎn)用

2、細胞：生產(chǎn)用細胞：Vero Vero 細胞細胞 2.1.1 細胞的管理及檢定細胞的管理及檢定 應(yīng)符合“生物制品生產(chǎn)用動物細胞基質(zhì)制備及檢定規(guī)程”規(guī)定。各細胞種子批代次應(yīng)不超過批準(zhǔn)的限定代次。 取自同批工作細胞庫的1支或多支細胞管，經(jīng)復(fù)蘇擴增后的細胞僅用于一批疫苗的生產(chǎn)。 2.1.2 細胞制備細胞制備 取工作細胞庫中的1支或幾支細胞管，細胞復(fù)蘇、擴增至接種病毒的細胞為一批。將復(fù)蘇后的單層細胞用胰蛋白酶或其他適宜的消化液進行消化，分散成均勻的細胞，加入適宜的培養(yǎng)液混合均勻，置37培養(yǎng)成均勻單層細胞。 52.2 毒種毒種2.2.1 名稱及由來名稱及由來 生產(chǎn)用毒種為狂犬病病毒固定毒CTN-1V株、a

3、GV株或其他經(jīng)Vero細胞適應(yīng)的狂犬病病毒固定毒株。2.2.2 種子批的建立種子批的建立 應(yīng)符合“生物制品生產(chǎn)檢定用菌毒種管理規(guī)程”規(guī)定。各種子批代次應(yīng)不超過批準(zhǔn)的限定代次。62.2.3 種子批毒種的檢定種子批毒種的檢定 （1）鑒別試驗：用小鼠腦內(nèi)中和試驗鑒定毒種的特異性，中和指數(shù)應(yīng)不低于500. （2）病毒滴定：每個稀釋度腦內(nèi)接種體重為11-13g小鼠至少6只，病毒滴度應(yīng)不低于7.5lgLD50/ml. （3）無菌檢查：依法檢查，應(yīng)符合規(guī)定。 （4）支原體檢查：依法檢查，應(yīng)符合規(guī)定。 （5）病毒外源因子檢查：依法檢查，應(yīng)符合規(guī)定。 （6）免疫原性檢查：用主種子批毒種制備原疫苗，腹腔免疫體重為

4、12-14g小鼠，每只0.5ml，7天后重復(fù)接種1次。于第1次免疫后的第14天，用10倍系列稀釋的CVS病毒腦內(nèi)攻擊，每只0.03ml，每個稀釋度10只小鼠。同時，取同樣體重的未免疫小鼠，用10倍系列稀釋的CVS病毒腦內(nèi)攻擊作對照，每個稀釋度10只小鼠，每只0.03ml。保護指數(shù)應(yīng)不低于100.2.2.4 毒種保存毒種保存 毒種應(yīng)置-60以下保存不得超過2年。72.3 原液原液2.3.1細胞制備：同細胞制備：同2.1.2項項2.3.2培養(yǎng)液培養(yǎng)液 培養(yǎng)液為含適量滅能小牛血清的MEM、199或其他適宜培養(yǎng)液。小牛血清的質(zhì)量應(yīng)符合要求。2.3.3對照細胞病毒外源因子檢查：對照細胞病毒外源因子檢查：

5、 依法檢查，應(yīng)符合規(guī)定。2.3.4病毒接種和培養(yǎng)病毒接種和培養(yǎng) 按0.01-0.1MOI或終濃度為4.5-5.5lgLD50/ml接種狂犬病病毒毒種，置適宜溫度下培養(yǎng)一定時間后，用PBS沖洗去除小牛血清，加入適量維持液，置33-35繼續(xù)培養(yǎng)。2.3.5病毒收獲病毒收獲 經(jīng)培養(yǎng)適當(dāng)時間，收獲病毒液，各次收獲的病毒液為單次病毒收獲液，根據(jù)病毒收獲液，根據(jù)細胞生長情況，可多次收獲病毒液。 82.3.6單次病毒收獲液檢定：單次病毒收獲液檢定：按3.1項進行。2.3.7病毒滅活病毒滅活 病毒收獲液按1:4000比例加入-丙內(nèi)酯，置適宜溫度下一定時間內(nèi)滅活病毒。2.3.8 合并、濃縮、純化合并、濃縮、純化

6、 （1）合并及超濾濃縮 同批細胞生產(chǎn)的多次病毒收獲液可在嚴(yán)格無菌操作的條件下合并為一批，經(jīng)超濾或其他適宜方法適當(dāng)濃縮。 （2）純化 經(jīng)濃縮并檢定合格的病毒液以柱色譜或其他適宜的方法純化，純化后可加入適量人血白蛋白作為穩(wěn)定劑及一定量硫柳汞作為防腐劑，即為原液。2.3.9原液檢定：原液檢定：按3.2項進行。92.4半成品半成品2.4.1配制配制 根據(jù)蛋白質(zhì)含量和抗原含量進行配制，總蛋白含量應(yīng)不高于120g/劑?？杉尤虢K濃度不高于0.70g/ml的氫氧化鋁佐劑吸附，即為半成品。2.4.2半成品半成品檢定：檢定：按3.3項進行。102.5成品成品2.5.1分批分批 應(yīng)符合“生物制品分批規(guī)程”規(guī)定。2.

7、5.2分裝分裝 應(yīng)符合“生物制品分裝和凍干規(guī)程”規(guī)定。2.5.3規(guī)格規(guī)格 每瓶1.0ml。每1次人用劑量為1.0ml，狂犬病疫苗效價應(yīng)不低于2.5IU。2.5.4包裝包裝 應(yīng)符合“生物制品包裝規(guī)程”規(guī)定。11三、檢定三、檢定3.1單次病毒收獲液檢定單次病毒收獲液檢定3.1.1病毒滴定：病毒滴定：按2.2.3（2）項進行，病毒滴度應(yīng)不低于6.0lgLD50/ml。 人用狂犬病疫苗（地鼠腎細胞）病毒滴度應(yīng)不低于5.5lgLD50/ml。3.1.2無菌檢查無菌檢查 依法檢查，應(yīng)符合規(guī)定。3.1.3支原體檢查支原體檢查 依法檢查，應(yīng)符合規(guī)定。123.2原液檢定原液檢定3.2.1抗原含量抗原含量 采用適

8、宜的方法檢測抗原含量。3.2.2病毒滅活驗證試驗病毒滅活驗證試驗 取病毒滅活后的本品，腦內(nèi)接種體重為11-13g小鼠20只，每只0.03ml，觀察14天，應(yīng)全部健存（3天內(nèi)死亡的不計）3.2.3蛋白質(zhì)含量蛋白質(zhì)含量 取純化后未加入人血白蛋白的本品，依法測定，應(yīng)不高于120g/ml。3.2.4牛血清白蛋白殘留量牛血清白蛋白殘留量 采用酶聯(lián)免疫法，牛血清白蛋白殘留量應(yīng)不高于50ng/劑。3.2.5Vero細胞細胞DNA殘留量殘留量 應(yīng)不高于100g/劑。3.2.6無菌檢查無菌檢查 依法檢查，應(yīng)符合規(guī)定。3.3半成品檢定半成品檢定 無菌檢查：依法檢查，應(yīng)符合規(guī)定。133.4成品檢定成品檢定3.4.1

9、鑒別試驗鑒別試驗 按3.4.4項進行，應(yīng)符合規(guī)定。效價測定不合格時，鑒別試驗不成立。3.4.2外觀外觀 應(yīng)為乳白色渾濁液體，久置形成可搖散的沉淀，無異物。 人用狂犬病疫苗（地鼠腎細胞）無佐劑應(yīng)為無色澄明液體。3.4.3化化學(xué)檢定學(xué)檢定 （1）PH值：應(yīng)為7.2-8.0。 （2）硫柳汞含量：應(yīng)不高于0.10mg/ml。 （3）含佐劑疫苗應(yīng)進行此項檢測，氫氧化鋁含量應(yīng)不高于0.70mg/ml。 （凍干人用狂犬病疫苗：水分應(yīng)不高于3.0%）3.4.4效價測定：效價測定：應(yīng)不低于2.5IU/劑。3.4.5熱穩(wěn)定性試驗熱穩(wěn)定性試驗 疫苗出廠前應(yīng)進行熱穩(wěn)定性試驗。于37放置14天后；按3.4.4項進行效價

10、測定。如合格，視為效價測定合格。3.4.6無菌檢查無菌檢查 依法檢查，應(yīng)符合規(guī)定。3.4.7異常毒性檢查異常毒性檢查 依法檢查，應(yīng)符合規(guī)定。3.4.8細菌內(nèi)毒素檢查：細菌內(nèi)毒素檢查： 應(yīng)不高于100EU/劑。14四、保存、運輸及有效期四、保存、運輸及有效期 于2-8避光保存和運輸。自效價測定合格之日起，有效期為1年。15五、使用說明五、使用說明【藥品名稱藥品名稱】 通用名稱：人用狂犬病疫苗（Vero疫苗） 英文名稱：Rabis Vaccine (Vero Cell) for Human Use 漢語拼音：Renyong Kuangquanbing Yimiao(Vero Xibao)【成分和形

11、狀成分和形狀】 本品系用狂犬病病毒固定毒株接種Vero（或地鼠腎）細胞，培養(yǎng)后，收獲病毒液，經(jīng)滅活病毒、濃縮、純化，加入適宜的穩(wěn)定劑，可加入氫氧化鋁佐劑制成。為乳白色渾濁液體，含硫柳汞防腐劑。（凍干人用狂犬病疫苗為白色疏松體，復(fù)溶后為澄明液體） 人用狂犬病疫苗（地鼠腎疫苗）含佐劑疫苗為為乳白色渾濁液體，不含佐劑疫苗為無色澄清液體?！窘臃N對象接種對象】 凡被狂犬或其他瘋動物咬傷、抓傷時，不分年齡、性別均應(yīng)立即處理局部傷口（用清水或肥皂水反復(fù)沖洗后再用碘酊或酒精消毒數(shù)次），并及時按暴露后免疫程序注射本疫苗；凡有接觸狂犬病病毒危險的人員（如獸醫(yī)、動物飼養(yǎng)員、林業(yè)從業(yè)人員、屠宰場工人、狂犬病實驗人員等

12、），按暴露前免疫程序免疫接種。【作用與用途作用與用途】 接種本疫苗后，可刺激機體產(chǎn)生抗狂犬病病毒免疫力。用于預(yù)防狂犬病?！疽?guī)格規(guī)格】 每瓶1.0ml。每1次人用劑量為1.0ml，狂犬病疫苗效價應(yīng)不低于2,5IU。 16【用法用量用法用量】 （1）使用前將疫苗振搖成均勻懸液。 （2）于上臂三角肌肌內(nèi)注射，幼兒可在大腿前外側(cè)區(qū)肌內(nèi)注射。 （3）暴露后免疫程序：一般咬傷者于0天（第1天，當(dāng)天）、3天（第4天，以下類推）、7天、14天、28天各注射本疫苗1劑，共5針，兒童用量相同。對有下列情形之一的建議首劑狂犬病疫苗劑量加倍給予。 注射疫苗前1個月內(nèi)注射過免疫球蛋白或抗血清者。 先天性或獲得性免疫缺陷

13、病人。 接受免疫抑制劑（包括抗瘧疾藥物）治療的病人。 老年人及患慢性病者。 于暴露后48小時或更長時間后才注射狂犬病疫苗的人員。 17暴露后免疫程序按下述及程度分級處理： 級暴露 觸摸動物，被動物舔及無破損皮膚，一般不需處理，不必注射狂犬病疫苗。 級暴露 未出血的皮膚咬傷、抓傷，破損的皮膚被舔及，應(yīng)按暴露后免疫程序接種狂犬病疫苗。 級暴露 一處或多處皮膚出血性咬傷或被抓傷出血，可疑或確診的瘋動物唾液污染粘膜，應(yīng)按暴露后程序立即接種狂犬病疫苗和抗血清或免疫球蛋白。抗狂犬病血清按40IU/kg給予，或狂犬病人免疫球蛋白按20IU/kg給予，將盡可能多的抗狂犬病血清或狂犬病人免疫球蛋白做咬傷局部浸潤注射，剩余部分肌內(nèi)注射。 （4）暴露前免疫程序：按0天、7天、28天接種，共接種3針。 （5）對曾經(jīng)接種過狂犬病疫苗的一般患者再需接種疫苗的建議： 1年內(nèi)進行全程免疫，被可疑瘋動物咬傷者，應(yīng)于0天和3天各接種1劑疫苗。 1年前進行過全程免疫，被可疑瘋動物咬傷者，則應(yīng)全程接種疫苗。 3年內(nèi)進行過全程免疫，并且進行過加強免疫，被可疑瘋動物咬傷者，于0天和3天各接種1劑疫苗。 進行過全程免疫，并且進行過加強免疫但不超過3年，被可疑瘋動物咬傷者，則應(yīng)全程接種疫苗。18 【不良反應(yīng)】 注射后有輕微局部及全身反應(yīng)，可自行緩解，偶有皮疹。若有速發(fā)型過敏反應(yīng)、神經(jīng)性水腫、蕁麻疹等較嚴(yán)重副反應(yīng)者，可做對癥治療