毒熱平注射液對(duì)流感病毒感染小鼠的保護(hù)作用

1、毒熱平注射液對(duì)流感病毒感染小鼠的保護(hù)作用【摘要】 目的 探討毒熱平注射液對(duì)流感病毒感染小鼠的保護(hù)作用。方法 用流感病毒亞甲型鼠肺適應(yīng)株 A/FM/1/47(H1N1)感染小鼠，建立小鼠流感病毒性肺炎的生物模型，采用ELISA方法測(cè)定肺組織懸液中的IL-4 和IFN-的活性水平，觀察毒熱平注射液對(duì)流感病毒感染小鼠的保護(hù)作用。結(jié)果 毒熱平注射液各劑量組小鼠肺勻漿的IFN-活性水平明顯升高而IL-4的活性顯著下降；毒熱平注射液的0.33 g /(kgd)和0.17 g /(kgd)劑量組對(duì)流感病毒感染小鼠具明顯的保護(hù)作用。結(jié)論 毒熱平注射液能通過調(diào)節(jié)細(xì)胞因子的活性，糾正Th1/Th2細(xì)胞失衡而發(fā)揮抗

2、流感病毒作用。 【關(guān)鍵詞】 毒熱平；流感病毒；Th1/Th2；細(xì)胞漂移Abstract: Objective To explore the antivirus effect of Dureping Injection in mice. Methods The murine pneumonia model was establish by influenza virus strain A/FM/1/47 (H1N1).The bioactivity of interleuking-4 (IL-4 ) and interferon- (IFN-) in the murine lung was de

3、tected by ELISA.The murine Death Rate was observed. Results Dureping Injection decreased the bioactivity of IL-4 and increased the bioactivity of IFN-. It showed 0.33 g/（kgd） and 0.17 g/（kgd）of Dureping Injection had significantly protective effect to death of the mouse with virus pneumonia. Conclus

4、ion Dureping Injection has an obvious effect against influenza virus FM1 strain by correcting the Th1/Th2 cell shift, regulating the bioactivities of Th1 cytokines and the bioactivies of Th2 cytokines, which reach a new balance between Th1 cell and Th2 cell.Key words: Dureping；influenza virus；Th1/Th

5、2；cell drift 流感是一種具有高度傳染性的急性呼吸道疾病，遍布全世界，引起人和動(dòng)物很高的發(fā)病率和病死率1。研究證明，中藥在抗流感病毒方面有其獨(dú)特的優(yōu)越性，其一方面直接抑制和滅活流感病毒；另一方面，調(diào)節(jié)機(jī)體免疫網(wǎng)絡(luò)，起到抗流感病毒免疫的作用。本研究探討毒熱平注射液對(duì)流感病毒感染小鼠Th1/Th2 細(xì)胞漂移的影響，為該藥的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)室研究數(shù)據(jù)。1 實(shí)驗(yàn)材料1.1 病毒 流感病毒亞甲型鼠肺適應(yīng)株(FM1)，中國(guó)中醫(yī)藥研究院中醫(yī)所提供，本實(shí)驗(yàn)室76保存?zhèn)溆谩Ｓ?日齡雞胚尿囊腔連續(xù)傳代2次后，測(cè)血凝滴度為1512。1.2 動(dòng)物 ICR小鼠，體重(141)，合格證號(hào)：SLXK(京2005-

6、2006)，級(jí)別：SPF/VAF。小鼠及飼料均由北京維通利華實(shí)驗(yàn)中心提供。飼養(yǎng)環(huán)境：本室動(dòng)物室動(dòng)物潔凈柜，室溫：(222)，相對(duì)濕度：50%10%。1.3 藥物 毒熱平注射液，棕色液體，17.4mg/mL，由廣東省康美藥業(yè)有限公司開發(fā)提供；陽(yáng)性對(duì)照藥：注射用雙黃連(凍干粉)：600mg干粉/支，實(shí)驗(yàn)前用無血清DMEM培養(yǎng)液配制成40 mg/mL備用，批號(hào)：0501004(哈藥集團(tuán)中藥二廠)；利巴韋林：100 mg/mL，批號(hào)：0506251(石藥集團(tuán)歐意藥業(yè)有限公司)。1.4 細(xì)胞因子檢測(cè)試劑盒：購(gòu)自美國(guó)Biosource公司。2 方法和結(jié)果2.1 流感病毒對(duì)小鼠半數(shù)致死量(LD50)的測(cè)定

7、取ICR小鼠50只，用單純隨機(jī)抽樣法隨機(jī)平均分成5組，病毒為2-62-105個(gè)稀釋度，每只小鼠經(jīng)乙醚輕度麻醉后分別滴鼻感染不同稀釋度病毒液0.05mL，以死亡和生存為觀察指標(biāo)，24 h內(nèi)死亡的不予統(tǒng)計(jì)。每天觀察，直至感染后第14天為止。按Reed-Munch公式2計(jì)算出病毒的半數(shù)致死量(LD50)為10-2.2。2.2 對(duì)流感病毒所致小鼠死亡的保護(hù)作用 取ICR小鼠144只，隨機(jī)分組、給藥見表1。將各組小鼠用乙醚輕度麻醉，正常對(duì)照組以生理鹽水0.05mL滴鼻，其余各組以4 LD50流感病毒液滴鼻感染，每只0.05 mL，于感染當(dāng)天開始腹腔給藥，正常對(duì)照組在同等條件下注射生理鹽水，每天1次，連續(xù)10 d。從感染之日算起，每天觀察并記錄小鼠感染病毒后的死亡數(shù)，連續(xù)觀察15 d，計(jì)算死亡保護(hù)率3，結(jié)果見表1。表1 毒熱平注射液對(duì)流感病毒致小鼠死亡的保護(hù)作用（略）2.3 流感病毒感染小鼠肺勻漿細(xì)胞因子的檢測(cè)(雙抗體夾心酶標(biāo)免疫分析法) 取ICR小鼠70只，隨機(jī)分組、給藥見表2。將各組小鼠用乙醚輕度麻醉，正常對(duì)照組以生理鹽水0.05 mL滴鼻，其余各組以40 LD50流感病毒液滴鼻感染，每只0.05 mL，于感染后第2天開始腹腔給藥，正常對(duì)照組在同等條件下注射生理鹽水，每天1次，連續(xù)6 d，第7天摘眼球放血處死，在低溫條件下，按常規(guī)方法制作肺組織勻漿，肺重(g)/生理鹽水(mL)=1