生物技術(shù)專業(yè)復(fù)習(xí)資料(西南民大版)-生物工程下游技術(shù)

1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上 生物工程下游技術(shù)1、 生物分離的四步：a.固液分離：發(fā)酵液預(yù)處理、過濾、離心。作用：對產(chǎn)品起到濃縮作用 b.產(chǎn)品粗分離：沉淀法、吸附、膜分離技術(shù)、萃取。作用：特異性分離程度不高，只是進(jìn)行初步分離 c.產(chǎn)品的純化：各類層析技術(shù)（親和、疏水、凝膠過濾、離子交換）電泳。作用：對產(chǎn)物高度特異性選擇，除雜質(zhì) d.產(chǎn)品的成品化：結(jié)晶，干燥，制劑。作用：便于產(chǎn)品的運(yùn)輸和保存，輔助治療。2、 細(xì)胞的濃度測定：a.計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)法：在顯微鏡下用血球計(jì)數(shù)器直接數(shù)出細(xì)胞數(shù)目 b.濁度計(jì)比濁法：測定稀的細(xì)胞懸液的透光量，間接測出細(xì)胞數(shù)量 c.細(xì)胞干重稱量法：直接測定一定體積培養(yǎng)物的細(xì)胞干重，由

2、此代表菌體細(xì)胞物質(zhì)總量 d.平板菌落計(jì)數(shù)法：將待測樣品經(jīng)適當(dāng)稀釋之后，其中的微生物充分分散成單個(gè)細(xì)胞，取一定量的稀釋樣液涂布涂布到平板上，經(jīng)過培養(yǎng)，由每個(gè)單細(xì)胞生長繁殖而形成肉眼可見的菌落，即一個(gè)單菌落應(yīng)代表原樣品中的一個(gè)單細(xì)胞，統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)，根據(jù)稀釋倍數(shù)和取樣量換算出含菌數(shù) e.細(xì)胞組成分析法：測定一種大分子的細(xì)胞組成（如蛋白質(zhì)、DNA），間接算出細(xì)胞重量。3、 細(xì)胞生長一般分為五個(gè)階段：a.遲緩期：指培養(yǎng)基接種后，細(xì)胞濃度在一段時(shí)間內(nèi)無明顯增加的這一階段，它是細(xì)胞在環(huán)境改變后表現(xiàn)出來的一個(gè)適應(yīng)階段 b.指數(shù)生長期：在此階段中，培養(yǎng)基中營養(yǎng)物質(zhì)較充分，細(xì)胞生長不受抑制，細(xì)胞濃度隨時(shí)間呈指數(shù)生長

3、 c.減速期：由于細(xì)胞大量生長后，培養(yǎng)基中營養(yǎng)物質(zhì)大量消耗，加上有害代謝物質(zhì)的積累，細(xì)胞生長速率開始減緩 d.靜止期：由于營養(yǎng)物質(zhì)已經(jīng)消耗盡或有害物質(zhì)大量積累，使細(xì)胞濃度不再增加，靜止期內(nèi)細(xì)胞濃度為最大濃度 e.衰退期：由于環(huán)境惡化，細(xì)胞開始死亡，活細(xì)胞濃度下降，細(xì)胞生長速率為負(fù)4、 培養(yǎng)基：是維持細(xì)胞體外生存和生長的溶液，分天然培養(yǎng)基和和合成培養(yǎng)基。5、 原代培養(yǎng)期：也稱初代培養(yǎng)，即從體內(nèi)取出組織接種培養(yǎng)到第一次傳代階段。6、 發(fā)酵液預(yù)處理方法：降低液體粘度；調(diào)整pH；凝聚與絮凝；加入助率劑；加入反應(yīng)劑。7、 雜質(zhì)去除的3種方法：沉淀法、變性法、吸附法。8、 細(xì)胞破碎方法依據(jù)：a.細(xì)胞處理量

4、 b.細(xì)胞壁強(qiáng)度和結(jié)構(gòu) c.目標(biāo)產(chǎn)物對破碎條件的敏感性 d.破碎程度 e.目標(biāo)產(chǎn)物的選擇性釋放 f.選擇性釋放目標(biāo)產(chǎn)物。9、 細(xì)胞碎片除去方法：離心沉降、微孔膜過濾、雙水相萃取、泡沫分離法、擴(kuò)張床的吸附。10、 切向流過濾：又稱錯(cuò)流過濾、交叉過濾、十字流過濾，一種維持恒壓下高速過濾的技術(shù)11、 雙水相萃?。合蛩嘀屑尤肴苡谒母叻肿踊衔?，形成密度不同的兩相，輕相富含某一種高分子化合物，重相富含鹽類或另一種高分子化合物，兩相均含較多的水，故稱雙水相12、 鹽析法特點(diǎn)：成本低，不需要特別昂貴的設(shè)備。操作簡單、安全，不會引起蛋白質(zhì)變性，經(jīng)透析去鹽法后，能得到保持生物活性的純化蛋白。分離效果不理想，

5、通常只是作為初步分離純化，還需要結(jié)合其他純化方法。13、 等電點(diǎn)沉淀：在低的離子強(qiáng)度下，調(diào)pH至等電點(diǎn)，使蛋白質(zhì)所帶靜電荷為零，降低了靜電斥力，而疏水力能使分子間相互吸引，形成沉淀的操作稱為等電點(diǎn)沉淀。14、 溶劑萃取法：是利用一種溶質(zhì)組分在兩個(gè)互不相溶的液相中競爭性溶解和分配性質(zhì)上的差異來進(jìn)行分離的操作。15、 “相似相溶”原理：“相似”一是分子結(jié)構(gòu)相似，如分子的組成、官能團(tuán)、形態(tài)結(jié)構(gòu)的相似，二是能量相似，兩種物質(zhì)如相互作用力相近，則能互相溶解。16、 多級錯(cuò)流萃取特點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：由幾個(gè)單級萃取單元串聯(lián)組成，萃取劑分別加入各萃取單元；萃取推動力較大，萃取效率較高；缺點(diǎn)：仍需加入大量萃取劑，因而產(chǎn)

6、品濃度稀，需消耗較多能量回收萃取劑。17、 多級逆流萃取特點(diǎn)：由幾個(gè)單級萃取單元串聯(lián)組成，料液和萃取劑分別從兩端連續(xù)加入，互成逆流接觸。18、 超臨界流體：當(dāng)一種物質(zhì)處于其臨界點(diǎn)以上的溫度和壓力，則稱之為超臨界流體19、 反膠團(tuán)萃?。合蛉軇┲屑尤氡砻婊钚詣?dāng)表面活性劑的濃度超過一定值時(shí)，在溶劑中會形成膠團(tuán)。膠團(tuán)或反膠團(tuán)的形成均是表面活性劑分子自聚集的結(jié)果，是熱力學(xué)穩(wěn)定體系20、 膜分離的特點(diǎn)：a.操作在常溫下進(jìn)行 b.是物理過程，不需要加入化學(xué)試劑 c.不發(fā)生相變化 d.在很多情況下選擇性很高 e.濃縮和純化可在一個(gè)步驟內(nèi)完成 f.設(shè)備易放大，可以分批或連續(xù)操作。21、 反滲透：如果在高濃度

7、水溶液一側(cè)加壓，使高濃度水溶液側(cè)與低濃度水溶液側(cè)的壓差大于滲透壓，則高濃度水溶液中的水將通過半透膜流向低濃度水溶液側(cè)，這一過程即反滲透。22、 吸附法：吸附操作是通過多孔固定物質(zhì)與某一混合組分體系接觸，有選擇地使體系中一種或多種組分附著于固體表面，從而實(shí)現(xiàn)特定組分分離的操作過程。23、 色譜法基本原理：利用混合物中各組分物理化學(xué)性質(zhì)的差異（如吸附力、分子形狀），使各組分在兩相（一相為固定相，一相為流動相）中的分布程度不同，從而使各組分以不同的速率移動而達(dá)到分離目的。特點(diǎn)：分離效率高、應(yīng)用范圍廣、選擇性強(qiáng)、高靈敏度的在線監(jiān)測、快速分離、過程自動化操作。分類：吸附色譜分離、分配色譜、離子交換色譜、

8、凝膠色譜、親和色譜。24、 基線：在正常操作條件下，僅有載氣通過檢測器時(shí)色譜流出曲線為基線。25、 色譜峰：色譜流出曲線是電信號隨時(shí)間的變化曲線，由于電信號強(qiáng)度正比于組分濃度或質(zhì)量，所以色譜流出曲線實(shí)際上是組分濃度隨時(shí)間的變化曲線，曲線上突起部分稱為色譜峰26、 峰面積：色譜峰的頂點(diǎn)與基線之間的距離稱為峰高。色譜峰與基線之間所包圍的面積稱為峰面積27、 保留時(shí)間：指從進(jìn)樣開始到柱后被測組分出現(xiàn)濃度極大點(diǎn)時(shí)所需的時(shí)間。28、 塔板理論的特點(diǎn)與不足：a.塔板理論描述了組分在柱內(nèi)的分配平衡和分離過程，導(dǎo)出了流出曲線的數(shù)學(xué)模型，解釋了流出曲線形狀和位置，提出了計(jì)算和評價(jià)柱效的參數(shù)b.當(dāng)色譜柱長度一定時(shí)

9、，塔板數(shù) n 越大(塔板高度 H 越小)，被測組分在柱內(nèi)被分配的次數(shù)越多，柱效能則越高，所得色譜峰越窄。c.不同物質(zhì)在同一色譜柱上的分配系數(shù)不同，用有效塔板數(shù)和有效塔板高度作為衡量柱效能的指標(biāo)時(shí)，應(yīng)指明測定物質(zhì)。d.柱效不能表示被分離組分的實(shí)際分離效果，當(dāng)兩組分的分配系數(shù) K 相同時(shí)，無論該色譜柱的塔板數(shù)多大，都無法分離。e.塔板理論無法解釋同一色譜柱在不同的載氣流速下柱效不同的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，也無法指出影響柱效的因素及提高柱效的途徑。29、 速率理論：進(jìn)一步把色譜過程與分子擴(kuò)散和組分在氣液兩相中的傳質(zhì)過程聯(lián)系起來，從動力學(xué)角度較好地解釋了影響板高的多種因素。因此，速率理論對于色譜分離操作條件的選擇

10、具有指導(dǎo)意義。 30、 氣相色譜儀：氣路系統(tǒng)、進(jìn)樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、溫度控制系統(tǒng)、檢測記錄系統(tǒng)31、 監(jiān)測器分類： 檢測器根據(jù)其不同檢測原理，可分為濃度型檢測器和質(zhì)量型檢測器兩類。32、 靈敏度：是指單位濃度或質(zhì)量的被測組分通過檢測器時(shí)所產(chǎn)生的響應(yīng)信號值33、 高效液相色譜法：以液體作為流動相的色譜法。它是在經(jīng)典液相色譜實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，引入氣相色譜的理論，在技術(shù)上采用高壓輸液泵，高效固定相和高靈敏的檢測器，而發(fā)展起來的快速分離分析技術(shù)。具有分離效能高，檢出限低，操作自動化和應(yīng)用范圍廣的特點(diǎn)34、 高效液相色譜儀：主要包括高壓輸液系統(tǒng)、進(jìn)樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)、數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)及梯度洗脫等輔助裝置。35、 常用凝膠種類：葡聚糖凝膠、瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠36、 離子交換色譜：原理:根據(jù)離子交換樹脂對需要分離的各種離子的靜電作用力不同而達(dá)到分離。主要依賴電荷間的相互作用，利用帶電分子中電荷的微小差異進(jìn)行分離。37、 醋酸纖維電泳：電泳時(shí)經(jīng)過膜的預(yù)處理、加樣、電泳、染色、脫色與透明即可得到滿意的分離效果。此電泳的特點(diǎn)是分離速度快、電泳時(shí)間短、樣品用量少。因此特別適合于病理情況下微量異常蛋白的檢測。38、 PAGE的具體操作過程：制膠、樣品準(zhǔn)備、電泳、檢測。39、 等電點(diǎn)聚焦IEF：利用蛋白質(zhì)分子或其它兩性分子的等電點(diǎn)不同，在一個(gè)穩(wěn)定的、連